HPV感染對復發性流產患者早期滋養細胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表達的影響分析

孟 杰 孟雅姣 趙紅霞

天津市第四中心醫院 300140

復發性流產(Recurrent spontaneous abortion,RSA)又稱為習慣性流產,其發生常與滋養細胞某些生物學行為改變有關,包括滋養細胞侵襲不足、胎盤局部缺血缺氧、螺旋小動脈無法轉化為低阻力小血管等。正常情況下,基質金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMPs)與特異性組織抑制物(Specific tissue inhibitor,TIMPs)維持著動態平衡,在正常妊娠中參與胚胎的種植及分娩發動,研究指出,MMPs、TIMPs在調節滋養細胞浸潤功能中發揮重要作用[1]。波形蛋白(vimentin)多見于胚胎發育早期細胞中,與基因表達、細胞分化發育、內皮細胞運動、血管阻力等密切相關[2]。近年來研究表明,RAS與免疫紊亂、感染等因素有關[3],既往文獻證實人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)感染與RSA有一定關系,但其導致RSA的具體機制及對滋養細胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表達的影響尚不明確。本文主要探討HPV感染對復發性流產患者早期滋養細胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表達的影響 。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2021年1月—2023年1月本院收治的84例RSA患者設為研究組,另選取95例擬行人工流產術的早孕婦女設為對照組。研究組:年齡22～35歲,平均年齡(28.56±3.02)歲;孕期45～65d,平均孕期(55.14±5.02)d。對照組:年齡23～34歲,平均年齡(28.62±2.98)歲;孕期45～65d,平均孕期(55.36±4.81)d。兩組年齡、孕期比較無統計學差異(P>0.05)。研究組納入標準:患者與同一性伴侶發生連續3次或3次以上自然流產;夫妻雙方染色體正常;無子宮畸形、宮內感染、內分泌異常。本研究符合《赫爾辛基宣言》規定,且患者及其監護人對本次研究知情并簽署同意書。

1.2 方法 (1)MMP-2、TIMP-2、vimentin免疫組化檢測: ①無菌條件下,取新鮮絨毛組織,對照組人工流產術時取樣,觀察組要在確認胚胎停止發育時取樣,在使用生理鹽水反復沖洗干凈后取適量絨毛組織,并以10%福爾馬林固定,石蠟包埋,切片;按照試劑盒說明進行常規免疫組織化學染色,檢測組織中的MMP-2、TIMP-2、vimentin表達,其中MMP-2、TIMP-2、vimentin多克隆抗體及所用試劑盒均來自博士得生物技術有限公司。②結果判定:根據細胞中出現棕黃色顆粒為陽性表達,運用高清晰度病理彩色圖文分析系統分析圖像,每張切片取5個視野并攝片,保證所有圖片均在同一條件下拍攝;測定每張圖片上滋養細胞的平均光密度(MD)、積分光密度(IOD)、有效面積(A),MD=IOD/A,此值反映滋養細胞中相關蛋白的表達值。(2)HPV-DNA檢測:本次檢測包括5種低危型及23種高危型HPV基因型;采用聚合酶鏈式反應(PCR)法,在組織細胞配置好之后,加入細胞消化液將DNA釋放出來,并選用HPV L基因區的共有引物GP5+/GP6+和β-globin基因引物Glob-F/Glob-R進行標本PCR擴增,再選用改進的PGMY09/11對β-globin陽性以及HPV陰性進行再次PCR擴增操作,所有擴增過程均包含β-globin基因對照及HPV陽性、陰性對照,電泳技術后將熒光條帶出現部分與每條引物擴增的DNA長度相比較。

1.3 觀察指標 (1)比較兩組滋養細胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表達。(2)比較兩組HPV感染情況。(3)比較HPV陽性受試者早期滋養細胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表達水平。

2 結果

2.1 兩組滋養細胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表達比較 研究組滋養細胞中MMP-2表達水平高于對照組,TIMP-2、vimentin表達水平低于對照組,差異有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 兩組滋養細胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表達比較

2.2 兩組HPV感染情況比較 研究組HPV陽性率(42.86%)顯著高于對照組(16.84%),差異有統計學意義(χ2=14.639,P<0.001),見表2。

表2 兩組HPV感染情況比較[n(%)]

2.3 兩組中HPV陽性、陰性受試者早期滋養細胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表達比較 研究組中,HPV陽性患者滋養細胞中MMP-2表達水平高于陰性,TIMP-2、vimentin表達水平低于陰性,差異有統計學意義(P<0.05);對照組中,HPV陽性、陰性者滋養細胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表達差異無統計學意義(P>0.05),見表3～4。

表3 研究組HPV陽性、陰性患者早期滋養細胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表達比較

表4 對照組HPV陽性、陰性者早期滋養細胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表達比較

3 討論

RSA病因較為復雜,包括免疫、病毒感染等因素,多為早期流產。相關研究顯示,在胚胎發育的早期,子宮—胎盤血液循環以及妊娠的完成均依賴于滋養細胞向子宮內膜層的侵襲遷移能力[4]。滋養細胞兼具高度繁殖以及浸潤性生長的特點,具有嚴格的空間性及時間性,在胚胎發育及胎盤建立中發揮著重要的作用。因此推測滋養細胞中一些細胞因子的異常分泌可能是導致流產發生的危險因素,其中MMP-2、TIMP-2均是滋養細胞內分泌的重要細胞因子;vimentin為細胞骨架蛋白,維持細胞器形態并參與細胞間的信號傳遞[5-6]。

MMP-2是一類以無活性酶原形式分泌到外環境的蛋白酶,并參與許多人體生理及病理過程,如在胚泡植入中可促進血管生成、參與蛻膜止血與修復,且可維持細胞外基質的動態平衡;相關研究顯示,MMP-2可在許多惡性腫瘤組織中監測到,因此作為組織侵襲的標志物[7-8]。當MMP-2在滋養細胞中過度表達時便會導致侵襲過度,對胚胎發育產生不良影響,甚至導致流產。TIMPs對MMPs具有特異性抑制作用,兩者之間的動態平衡可控制侵襲程度,促進妊娠順利進行[9]。研究發現,MMP-2的活性表達與滋養細胞的遷移活力呈正相關;施林領等[10]的研究中推測MMP-9/TIMP-1動態失衡是稽留流產患者發病的重要因素。vimentin在正常的上皮細胞中不表達,可作為間葉組織的標記,主要定位于絨毛間質細胞、血管內皮細胞,是中間絲的一種,當絨毛血管內皮發生缺血等病變,可對內皮中間絲產生干擾作用。本文結果顯示,研究組滋養細胞中MMP-2表達水平高于對照組,TIMP-2、vimentin表達水平低于對照組,說明RSA的發生可能與妊娠早期滋養細胞MMP-2、TIMP-2、vimentin異常表達與有關。目前對于HPV感染導致RAS發生的機制尚未明確,相關學者認為,HPV衣殼蛋白質的質量較大從而不容易穿過胎盤屏障,因此對早期妊娠不產生危險[11]。但本文結果顯示,研究組HPV陽性率高于對照組,說明HPV與RAS的發生具有相關性;此外,研究組中,HPV陽性患者滋養細胞中MMP-2表達水平高于陰性,TIMP-2、vimentin表達水平低于陰性,而對照組中,HPV陽性、陰性者滋養細胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin表達差異無統計學意義,可能是樣本量較少所致,仍提示HPV可能影響RSA發生,且在RSA患者中,HPV影響妊娠早期滋養細胞MMP-2、TIMP-2異常表達更顯著,其機制推測為HPV能促進MMP-2表達,病毒感染后,細胞內的分子含量以及活性均會發生變化,誘導細胞產生內源性炎性因子,包括白介素、腫瘤壞死因子等,均能對其他蛋白的轉錄水平和活性產生誘導或抑制作用;除此之外,HPV可誘導細胞黏附等相關蛋白降解,從而使細胞間的黏附性降低,促進MMP-2在滋養細胞中過度表達,最終導致侵襲過度[12-13]。

綜上所述,RSA的發生可能與早期滋養細胞中MMP-2、TIMP-2、vimentin的異常表達有關,且HPV可能參與這一過程。本研究樣本量少,來源集中,相關論點有待進一步論證。