子癇前期患者胎盤組織Toll樣受體表達與血清腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-6的相關性分析

陳海霞 程 靜 趙 華 梁 潔

江蘇省無錫市婦幼保健院病理科 214000

子癇前期(PE)是妊娠期高血壓的一種,多發(fā)生于妊娠20周后,具體表現(xiàn)為頭痛、惡心、嘔吐、眼花、胸悶等,容易引起供氧不足、肝腎心功能衰竭、胎兒窘迫、胎盤早剝、宮內(nèi)生長發(fā)育受限等不良妊娠結(jié)局,對母嬰生命安全構(gòu)成一定威脅[1-2]。據(jù)調(diào)查顯示:世界范圍內(nèi)PE的發(fā)生率高達2%～8%,每年由于PE死亡的孕產(chǎn)婦多達70 000萬[3]。及早對PE患者病情作出判斷,并預測不良妊娠結(jié)局發(fā)生風險,對臨床及早展開個性化治療具有重要指導意義。Toll樣受體表達(TLRs)是一種模式識別受體,與免疫耐受、特異性免疫等有著極為密切的聯(lián)系,可刺激機體釋放大量的促炎因子,損傷血管內(nèi)皮功能,引發(fā)PE或促進疾病進展[4-5]。腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素-6(IL-6)是臨床常見的促炎因子,與組織、血管內(nèi)皮功能損傷聯(lián)系密切,在維持Th1/Th2平衡方面具有重要意義[6-7]。基于此,為探究PE患者胎盤組織TLRs與血清TNF-α、IL-6的相關性,本文選定本院婦產(chǎn)科就診的112例PE患者研究,具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選定本院婦產(chǎn)科2020年11月—2022年10月就診的112例PE患者為P組,另選定同期本院婦產(chǎn)科待產(chǎn)的112例健康產(chǎn)婦為I組。P組:孕周23～35周,平均孕周(29.12±0.64)周;產(chǎn)婦類型:70例初產(chǎn)婦、42例經(jīng)產(chǎn)婦。I組:孕周25～36周,平均孕周(29.85±0.85)周;產(chǎn)婦類型:78例初產(chǎn)婦、34例經(jīng)產(chǎn)婦。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),可比較。

1.2 選擇標準 (1)納入標準:①P組患者均滿足《妊娠期血壓管理中國專家共識(2021)》[8]中對“PE”診斷標準。②患者均為首次發(fā)生PE。③產(chǎn)檢資料齊全。④均為自然受孕、單胎妊娠。⑤均是自愿參與本次研究。(2)排除標準:①近1個月使用過阿司匹林等抗凝藥物者。②合并出血性疾病者。③合并其他妊娠并發(fā)癥者。④胎兒染色體異常或畸形者。⑤同期參與其他研究或中途從本研究退出者。⑥合并巨大胎盤血管瘤、動靜脈瘺等疾病者。⑦合并紅斑狼瘡、風濕性疾病等疾病者。⑧存在酗酒、吸毒、吸煙史者。⑨合并狂躁癥、焦慮癥等精神障礙者。

1.3 方法 (1)胎盤組織TLRs:受檢者娩出胎盤后,取與臍帶距離3cm的1.0cm×1.0cm×1.0cm的胎盤組織,沖洗干凈后固定在10%的甲醛溶液中,石蠟包埋,37℃環(huán)境下干燥,切片4μm,保存在4℃環(huán)境,采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)法檢測TLRs,TLRs上、下游引物序列是5’-TGGATACGTTCCTTATAAG-3’、5’-GAAATGGAGGCACCCCTTC-3’,內(nèi)參U6上游、下游引物序列是5’-TCATGAAGTGTGACGTTGACATCCGT-3’、5’-CCTAGAAGCATTTGCGGTGCACGATC-3’,擴增反應條件,94℃下反應5min,94℃下反應30s,60℃下反應40s,72℃下反應90s,72℃下反應10min,共計35個循環(huán),計算TLRs表達量,試劑盒均由北京百奧萊博科技有限公司提供。(2)血清TNF-α、IL-6:抽取所有受檢者入院24h內(nèi)5ml空腹靜脈血,離心10min,4 000r/min離心速率,15cm離心半徑,分離上層清液后保存在-80℃環(huán)境,以酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測TNF-α、IL-6,試劑盒均由齊一生物科技(上海)有限公司提供。

1.4 觀察指標 比較兩組胎盤組織TLRs、血清TNF-α、IL-6水平,比較不同嚴重程度組胎盤組織TLRs、血清TNF-α、IL-6水平,比較有、無不良妊娠結(jié)局組胎盤組織TLRs、血清TNF-α、IL-6水平。出現(xiàn)早產(chǎn)、胎膜早破、產(chǎn)后出血、新生兒出現(xiàn)、胎兒死亡、胎兒窒息、低體重兒等均為不良結(jié)局。子癇前期嚴重程度分級標準[9]:蛋白尿≥0.3g/24h,收縮壓(SBP)/舒張壓(DBP)≥140/90mmHg(1mmHg=0.133kPa)是輕度;蛋白尿≥2g/24h,SBP/DBP≥160/110mmHg是重度。

2 結(jié)果

2.1 兩組胎盤組織TLRs血清TNF-α、IL-6水平比較 P組胎盤組織TLRs及血清TNF-α、IL-6水平均高于I組(P<0.05),見表1。

表1 兩組胎盤組織TLRs及血清TNF-α、IL-6水平比較

2.2 不同嚴重程度組胎盤組織TLRs及血清TNF-α、IL-6水平比較 重度組胎盤組織TLRs及血清TNF-α、IL-6水平均高于輕度組(P<0.05),見表2。

表2 不同嚴重程度組胎盤組織TLRs及血清TNF-α、IL-6水平比較

2.3 有、無不良妊娠結(jié)局組胎盤組織TLRs及血清TNF-α、IL-6水平比較 有不良妊娠結(jié)局組胎盤組織TLRs及血清TNF-α、IL-6水平均高于無不良妊娠結(jié)局組(P<0.05),見表3。

表3 有、無不良妊娠結(jié)局組胎盤組織TLRs及血清TNF-α、IL-6水平比較

2.4 TLRs與TNF-α、IL-6的相關性分析 TLRs與TNF-α、IL-6均呈正相關性(r=0.406、0.398,P<0.001)。

2.5 血清TNF-α、IL-6對PE患者不良妊娠結(jié)局預測效能 血清TNF-α、IL-6聯(lián)合檢測預測PE患者不良妊娠結(jié)局的AUC是0.919(95%CI:0.796～0.958),且其靈敏度、特異度均高于單一檢測(P<0.05),見表4。

表4 血清TNF-α、IL-6對PE患者不良妊娠結(jié)局預測效能

3 討論

目前,臨床認為PE的發(fā)生與免疫失衡、內(nèi)皮細胞損傷、滋養(yǎng)層細胞侵襲與增殖異常、氧化應激反應、炎癥反應、營養(yǎng)因素、家族遺傳等有著極為密切的聯(lián)系[10]。PE患者由于滋養(yǎng)層細胞增殖、侵襲異常,會出現(xiàn)不同程度胎盤缺氧、缺血現(xiàn)象,釋放大量的炎性因子、氧化應激因子,升高體循環(huán)動脈壓,增加胎兒宮內(nèi)生長受限等不良妊娠結(jié)局發(fā)生率[11-12]。目前,臨床對于PE尚無治療方法,只能通過終止妊娠、娩出胎兒與胎盤,才能保障孕婦生命安全。尋求一種有效、可靠的實驗室指標,對PE患者病情作出判斷并預測不良妊娠結(jié)局發(fā)生風險,是目前婦產(chǎn)科工作人員高度關注的內(nèi)容。

TLRs與母胎免疫耐受聯(lián)系密切,廣泛存在于多種免疫細胞中,在母胎子宮T細胞、NK細胞中均有表達,可通過分泌趨化因子、細胞因子,促進NK細胞、巨噬細胞活化,并在母胎界面募集,對外源性病原微生物起到一定的抵抗作用,在維持母體免疫耐受及妊娠方面具有重要意義[13-14]。TNF-α可促進血管活性物質(zhì)釋放、內(nèi)皮細胞黏附因子表達,增加血管通透性,引發(fā)血管內(nèi)皮損傷及全身小動脈痙攣,最終導致血壓升高[15-16]。IL-6是常見促炎因子,參與了免疫調(diào)節(jié)過程,在滋養(yǎng)細胞侵襲、胎盤血管形成等多方面均發(fā)揮著重要作用[17-18]。本研究結(jié)果顯示:P組胎盤組織TLRs及血清TNF-α、IL-6水平均高于I組(P<0.05)。由此可見,PE患者機體胎盤組織TLRs及血清TNF-α、IL-6均呈異常高表達。分析如下:PE患者由于胎盤血管形成不足、滋養(yǎng)細胞侵襲異常,引起級聯(lián)免疫應答,缺氧缺血性改變,刺激機體釋放大量血管內(nèi)皮損傷因子,誘發(fā)血管痙攣,促進動脈粥樣硬化,從而增加TLRs、TNF-α、IL-6合成、分泌、釋放量。血清TNF-α、IL-6表達量增高,會增加血漿纖溶酶原激活物、黏附分子,誘發(fā)、加重內(nèi)皮細胞損傷,引起功能紊亂及全身細小動脈痙攣,刺激血管收縮,增加外周血管阻力,最終導致血壓增高[19-20]。

本研究結(jié)果顯示:重度組胎盤組織TLRs及血清TNF-α、IL-6水平均高于輕度組(P<0.05)。由此可見,病情越重的PE患者,TLRs、TNF-α、IL-6表達量越高,故在產(chǎn)檢過程中,臨床可通過定期檢測血清TNF-α、IL-6變化,評估疾病進展程度,以便臨床及早發(fā)現(xiàn)異常,及早終止妊娠,改善母嬰結(jié)局。本研究結(jié)果顯示:有不良妊娠結(jié)局組胎盤組織TLRs及血清TNF-α、IL-6水平均高于無不良妊娠結(jié)局組(P<0.05)。由此可見,持續(xù)性TLRs、TNF-α、IL-6高表達是誘發(fā)不良妊娠結(jié)局的重要因素,故一旦發(fā)現(xiàn)以上組織、細胞因子居高不下,應高度警惕不良妊娠結(jié)局,必要時完善相關檢查,重點觀測氧化應激反應、胎盤子宮組織學變化等。另外,臨床可將抑制血清TNF-α、IL-6表達,作為治療PE、改善妊娠結(jié)局的靶點與方向。本研究結(jié)果顯示,TLRs與TNF-α、IL-6均呈正相關性(P<0.05)。提示臨床可通過檢測血清TNF-α、IL-6變化,評估胎盤發(fā)育狀況、母胎免疫耐受。本研究結(jié)果顯示,血清TNF-α、IL-6聯(lián)合檢測預測PE患者不良妊娠結(jié)局的曲線下面積是0.919,95%CI可信區(qū)間是0.796～0.958,靈敏度、特異度均高于單一檢測(P<0.05)。由此可見,聯(lián)合檢測血清TNF-α、IL-6在預測不良妊娠結(jié)局方面的靈敏度、特異度均較高,且血清學指標檢測具有可重復性強、操作簡單、價格低廉、創(chuàng)傷性小等優(yōu)點,在PE患者病情及預后診斷評估中具有廣闊的應用前景。

綜上所述,胎盤組織TLRs與血清TNF-α、IL-6異常高表達參與了PE疾病進展過程中,與患者病情嚴重程度、妊娠結(jié)局等存在密切聯(lián)系,聯(lián)合檢測血清TNF-α、IL-6可提高對不良妊娠結(jié)局的預測靈敏度、特異度,從而指導臨床及早根據(jù)個體差異性給予針對性治療。