系統性紅斑狼瘡患者血清TRAF3、miR-107表達水平及與疾病活動度的關系*

湯 茜,宋冬明,王方明,劉敏黎

江南大學附屬醫院風濕免疫科,江蘇無錫 214000

系統性紅斑狼瘡(SLE)是一種系統性慢性自身免疫性疾病,其特征是血液中的各種自身抗體和多個器官受到影響,表現從輕度到重度,甚至危及生命[1-2]。中國SLE的患病率為30～70/100 000,世界排名第二,且大多數SLE患者是育齡的年輕女性[3]。隨著醫療技術的發展,SLE患者的生活質量得到了顯著改善,但其通常具有與其他自身免疫性疾病重疊的癥狀、自身抗體和易感基因等,導致在臨床中經常被誤診[4]。SLE的確切病理病因尚不明確,因此,尋找與SLE進展密切相關的生物標志物,對其臨床研究開展新的方向十分必要。腫瘤壞死因子受體相關因子3(TRAF3)是先天免疫應答的細胞內銜接蛋白之一,參與各種細胞過程中的信號傳導調節,且TRAF3主要通過核因子-κB激酶(NIK)降解作為替代NF-κB通路的抑制劑[5]。微小RNA(miRNA)是一種基因調控分子,通過影響靶基因的表達來調節免疫反應和炎癥途徑,例如miR-107可在膿毒癥誘導的急性肺損傷中產生重要作用[6-7]。因此,猜測TRAF3與miR-107可能參與SLE進程,本研究通過檢測SLE患者血清TRAF3、miR-107表達水平分析TRAF3、miR-107與SLE疾病活動度的相關性,探討其用于SLE病情監測和作為治療靶點的可能性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2020年1月至2022年1月本院接收的80例SLE患者作為研究對象(SLE組)。根據SLE疾病活動指數(SLEDAI)評分[8]進一步將研究對象分為輕中度組(SLEDAI評分<10分)32例和重度組(SLEDAI評分≥10分)48例。納入標準:(1)臨床確診為SLE[8];(2)臨床資料完整。排除標準:(1)患其他自身免疫性疾病者;(2)有嚴重感染者;(3)患惡性腫瘤者;(4)患心腦血管疾病者;(5)患其他肝、腎疾病者。另外納入同期體檢健康者80例為對照組。本研究經醫院倫理委員會審核批準。

1.2方法

1.2.1熒光定量PCR測定血清TRAF3、miR-107的表達水平 取入組者空腹血清5 mL,保存于-80 ℃待測。使用RNeasy Mini Kit試劑盒(德國QIAGEN公司)純化血清中的總RNA,并用PrimeScript RT-PCR試劑盒(日本TaKaRa公司)反轉錄。計算A260/A280比值以評估RNA質量和純度。在推薦的熱循環設置下,使用RotorGene 6000系統(Corbett Life Science,QIAGEN)上使用SensiFASTTMSYBRNo-ROX試劑盒(美國Bioline公司)進行熒光定量PCR測定。以U6、GAPDH為內參。基因相關序列見表1。反應結束后TRAF3、miR-107 mRNA的相對表達水平采用2-ΔΔCt法計算。

表1 qPCR引物序列

1.2.2資料收集 收集SLE患者信息:(1)一般資料:年齡、性別、體質量指數(BMI)、臨床癥狀(發熱脫發、紅斑、黏膜損傷、關節痛、尿檢異常、神經系統癥狀)、SLEDAI評分等。(2)實驗室指標:采用酶聯免疫吸附試驗測定檢測血小板(PLT)、白細胞介素(IL)-6、IL-1β、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、C反應蛋白(CRP);采用酶偶聯速率法檢測血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr);采用魏氏法檢測檢測紅細胞沉降率(ESR);采用免疫印跡法檢測抗SSA抗體(SSA)、抗SSB抗體(SSB)、抗Sm抗體(Sm)、抗RNP抗體(RNP);采用酶聯免疫吸附試驗測定抗dsDNA抗體(dsDNA)、補體C3(C3)、C4。

2 結 果

2.1SLE患者與對照組一般資料與血清中TRAF3、miR-107表達水平的比較 SLE組血清中TRAF3表達水平顯著高于對照組,miR-107表達水平顯著低于對照組,差異有統計學意義(P<0.05)。兩組年齡、性別、BMI比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 SLE患者與對照組一般資料與血清中TRAF3、miR-107表達水平的比較或n(%)]

2.2SLE患者輕中度組和重度組臨床資料及血清TRAF3、miR-107表達水平比較 相較于輕中度組,重度組發熱脫發比例、SLEDAI評分、IL-6、IL-1β、TNF-α、CRP、TRAF3顯著較高,miR-107、PLT、C3、C4表達水平顯著較低,差異有統計學意義(P<0.05)。兩組間年齡、性別、BMI、紅斑、黏膜損傷、關節痛、尿檢異常、神經系統癥狀、BUN、ESR、SCr、SSA、SSB、Sm、RNP、dsDNA比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 SLE患者輕中度組和重度組臨床資料及血清中TRAF3、miR-107表達水平的比較或n(%)]

2.3TRAF3、miR-107與臨床指標的相關性 SLE患者血清TRAF3與SLEDAI評分、IL-6、IL-1β、TNF-α呈正相關(r=0.680、0.537、0.556、0.574,P<0.05),與PLT呈負相關(r=-0.527,P<0.05),與C3、C4、CRP呈弱相關(r=-0.380、-0.337、0.245,P<0.05)。血清miR-107與SLEDAI評分、IL-6、IL-1β、TNF-α呈負相關(r=-0.692、-0.541、-0.563、-0.579,P<0.05),與PLT呈正相關(r=0.536,P<0.05),與C3、C4、CRP呈弱相關(r=0.392、0.351、-0.273,P<0.05)。

2.4TRAF3與miR-107的相關性 TRAF3和miR-107存在靶向關系,SLE患者血清TRAF3與miR-107呈負相關(r=-0.581,P<0.05)。見圖1。

2.5血清TRAF3、miR-107對重度SLE患者發生的預測價值 以SLE患者血清中TRAF3、miR-107表達水平為檢驗變量,以是否發生重度SLE為狀態變量(否=0,是=1)繪制ROC曲線,結果顯示血清中TRAF3、miR-107表達水平及二者聯合預測發生重度SLE的曲線下面積(AUC)分別為0.760、0.762、0.850,其中聯合預測AUC顯著高于二者單獨預測AUC(Z=1.269、1.201,P<0.05)。見圖2、表4。

圖2 血清TRAF3、miR-107預測重度SLE患者發生的ROC曲線

表4 血清TRAF3、miR-107預測重度SLE患者發生的價值

3 討 論

SLE特征是由免疫細胞、因子和途徑的復雜相互作用而導致的不同臨床表現,其發病機制包括核酸清除受損,Ⅰ型干擾素反應增加,B細胞耐受失調導致自身抗體合成增加,免疫復合物形成和沉積,進而導致多器官損傷[9]。SLE的發病率相當高,器官損傷是該疾病不可逆轉的后果,大約50%的SLE患者在接受診斷后10年內會出現一定程度的損傷,包括肌肉骨骼系統、中樞神經系統和腎臟的損傷[10]。狼瘡性腎炎(LN)發生在40%～75%的SLE患者中,是SLE最嚴重的并發癥之一,也是SLE產生短期和長期并發癥的主要原因,在早期階段對SLE進行及時診斷、治療可有效改善患者身體狀況[11]。由于SLE具有異質性,還沒有單一的臨床特征或實驗室檢查可以診斷它,因此,尋找有效可靠的生物標志物來更好地對SLE進行監測至關重要。

TRAF家族蛋白調節抗原、細胞因子和模式識別受體下游不同水平的NF-κB活化[12]。TRAF3是TRAF家族成員,是免疫的中樞調節因子,具有多種細胞功能,包括對B細胞活化、分化和存活的負調節,例如TRAF3缺陷的B細胞表現出組成型NF-κB活化[13]。有研究報道,TRAF3在LN患者中表達水平升高,其可通過調節小鼠的Th17細胞和Treg細胞平衡以及NF-κB信號通路在LN中發揮作用[14]。本研究發現,SLE患者血清中TRAF表達水平顯著增高,重度組SLE患者血清中TRAF表達水平高于輕中度組,與上述研究結果相似。此外,SUN等[14]還發現TRAF3敲低減少了促炎細胞因子(IL-1β、TNF-α)的表達水平。SLEDAI評分為目前常用的評價SLE活動度的臨床指標,可反映SLE疾病嚴重程度,評分越高,疾病相應越嚴重[15]。本研究進一步發現,SLE患者的TRAF與SLEDAI評分、IL-6、IL-1β、TNF-α呈正相關,與PLT呈負相關。提示SLE患者血清TRAF3表達水平與炎癥反應有關,且其表達水平高低可反映SLE的疾病活動度。此外,TRAF3預測發生重度SLE的AUC為0.760,表明TRAF3對重度SLE的發生具有一定的預測價值。

miRNA已被證實通過多種非常規途徑調節轉錄后基因的表達,在SLE的發病機制中起關鍵作用[16]。有研究表明,LN患者尿液和腎組織中的miR-107表達水平顯著降低[17]。與本研究中SLE患者血清中miR-107表達水平顯著降低,重度組SLE患者血清中miR-107水平低于輕中度組結果類似。同時本文還發現,血清miR-107與SLEDAI評分、IL-6、IL-1β、TNF-α呈負相關,與PLT呈正相關。以上研究表明機體處于高炎狀態,miR-107可作為SLE疾病活動度的血清指標。此外,miR-107預測發生重度SLE的AUC為0.762,對重度SLE的發生有一定的預測價值。進一步研究發現,TRAF3與miR-107聯合預測重度SLE發生的AUC和靈敏度相對于單一預測較高,且TRAF3與miR-107之間有靶向作用,提示二者在SLE中相互作用,均有望成為重度SLE發生的預測因子[13,18-19]。NF-κB信號通路在SLE中發揮重要作用,而miR-107和TRAF3均受NF-κB信號通路調控。因此猜測,本實驗結果可能與NF-κB信號通路有關,具體機制還需進一步研究。

綜上所述,SLE患者血清TRAF3表達水平較高、miR-107較低,均與患者SLEDAI評分、IL-6、IL-1β、TNF-α、PLT有關,能夠反映SLE疾病活動度。本研究結果顯示,對TRAF3、miR-107的研究可能有助于揭示SLE的發病機制,預測SLE病情進展,并篩選新的治療靶點。但本文未能深入分析TRAF3、miR-107與重度SLE患者發生的具體機制,后續可進一步進行研究。