提取方法對庫拉索蘆薈多糖的抗氧化活性影響研究

曾小彤，陶洪坤，2，石麗平，3，王 怡，林勁松，魏 偉

1.四川文理學院，四川 達州 635000；2.成都大學，四川 成都 610106；3.西南醫(yī)科大學，四川 瀘州 646099

蘆薈為百合科多年生肉質(zhì)草本植物。庫拉索蘆薈是保健常用蘆薈，也是世界上銷量最高的蘆薈[1]。蘆薈多糖作為藥用的有效成分之一，有關其功效的研究非常廣泛，眾多學者對其抗氧化、抗?jié)儭⒖鼓[瘤、護膚美容等多種功效進行了研究[2]。蔣文明等[3]采用水提法提取蘆薈多糖并制備其衍生物，證實了蘆薈多糖具有較高的抗氧化活性。為比較不同的提取方法，本研究將采用兩種不同方法提取庫拉索蘆薈多糖，并對其進行抗氧化活性評價，以期為庫拉索蘆薈多糖作為藥用植物資源的進一步開發(fā)與研究提供一定的理論參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

新鮮庫拉索蘆薈購自壹朵舒園藝；2，2-聯(lián)氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（ABTS）、纖維素酶、果膠酶購自合肥博美生物科技有限公司；1，1-二苯基-2-苦味基肼（DPPH）、D-葡萄糖等購自成都科隆化學品有限公司；所使用的水為蒸餾水。

PS-60A 超聲清洗機，深圳市潔康洗凈電器有限公司；Varioskan LUX 多功能酶標儀，賽默飛世爾科技（中國）。

1.2 實驗方法

1.2.1 提取實驗

水提法：參考吳廣楓等[4]的研究方法，得到蘆薈多糖提取物ABP-W。

超聲波輔助復合酶法：參考馬麗媛等[5]的研究方法，得到提取蘆薈多糖提取物ABP-U。

1.2.2 多糖提取率及含量測定

1.2.2.1 多糖提取率測定

式中：m1為多糖提取物粉末的質(zhì)量，mg；m0為蘆薈凝膠的質(zhì)量，mg。

1.2.2.2 多糖含量測定

參考韓秋菊等[6]的標準曲線制定方法，繪制標準曲線。以葡萄糖質(zhì)量濃度（μg/mL）C 為橫坐標，以吸光度A 為縱坐標，得到回歸方程，即得線性方程Y=0.010 76X-0.074 9，相關系數(shù)R2=0.99 364，可知在此濃度范圍內(nèi)線性關系良好。

1.2.3 蘆薈多糖抗氧化能力評價

1.2.3.1 評價羥基自由基清除率

參考蔣文明等[3]的方法評價羥基自由基清除率。以VC 作為陽性標準，根據(jù)式（2）計算蘆薈多糖的羥基自由基清除率。

式中：A0為等體積蒸餾水代替樣品溶液的吸光度；A1為樣品溶液的吸光度；A2為等體積蒸餾水代替H2O2溶液的吸光度。

1.2.3.2 評價DPPH 自由基清除率

參考Tan 等[7]方法評價DPPH 自由基清除率。以VC 作為陽性標準，根據(jù)式（3）計算蘆薈多糖DPPH自由基清除率。

式中：A0為1.0 mL DPPH 溶液和1.0 mL 蒸餾水混合后的吸光度；A1為1.0 mL DPPH 溶液加入1.0 mL樣品溶液中混合后的吸光度；A2為1.0 mL 無水乙醇和1.0 mL 樣品溶液混合后的吸光度。

1.2.3.3 評價ABTS 自由基清除率

參考Teng 等[8]方法評價ABTS 自由基清除率。以VC 作為陽性標準，根據(jù)式（4）計算蘆薈多糖ABTS 自由基清除率。

式中：A0為等體積蒸餾水代替樣品溶液的吸光度；A1為1.0 mL 樣品溶液與5.0 mL ABTS 工作液混合后的吸光度；A2為等體積蒸餾水代替ABTS 工作液和1.0 mL 樣品溶液混合液的吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同提取方法對多糖提取率和含量的影響

水提法與超聲波輔助復合酶法的多糖提取率和含量如表1 所示。評價結(jié)果表明，提取方法的不同會對多糖提取率和含量產(chǎn)生影響，就本研究的兩種提取方法而言，超聲波輔助復合酶法要優(yōu)于水提法。

表1 不同提取方法的提取率和多糖含量

2.2 抗氧化活性評價

2.2.1 羥基自由基清除能力

不同樣品對羥基自由基的清除效果如圖1A 所示。VC、ABP-U 和ABP-W 的EC50 分別為0.54 mg/mL、0.58 mg/mL、0.79 mg/mL。ABP-U 和ABP-W 的清除DPPH 自由基活性均略低于VC，但ABP-U 的清除率均高于ABP-W 的清除率，意味著超聲波輔助復合酶法更適合用于蘆薈多糖提取。

圖1 不同樣品的抗氧化活性

2.2.2 DPPH 自由基清除能力

圖1B 呈現(xiàn)了不同樣品對DPPH 自由基的清除能力。VC、ABP-U 和ABP-W 的EC50 分別為0.78 mg/mL、0.86 mg/mL、0.99 mg/mL。ABP-U 和ABP-W的清除DPPH 自由基活性均略低于VC，但ABP-U的清除率均高于ABP-W 的清除率，說明超聲波輔助復合酶法提取的蘆薈多糖DPPH 自由基清除能力比水提法強。

2.2.3 ABTS 自由基清除能力

如圖1C 所示，不同樣品的ABTS 自由基清除能力與濃度呈正相關。VC、ABP-U 和ABP-W 的EC50分別為0.65 mg/mL、0.74 mg/mL、0.76 mg/mL。兩種提取方法得到的產(chǎn)物清除ABTS 自由基的能力均弱于VC，但差別不明顯，總體上都表現(xiàn)出較強的清除能力。

3 結(jié)語

本文對庫拉索蘆薈的抗氧化活性進行了研究，采用兩種不同的提取方法提取蘆薈多糖，通過抗氧化活性評價發(fā)現(xiàn)，ABP-U 的羥基自由基、DPPH 自由基清除率要優(yōu)于ABP-W。不同的提取方法會對蘆薈多糖的抗氧化活性產(chǎn)生不同程度的影響。本文對蘆薈多糖的提取方法和抗氧化活性進行了初步研究，為庫拉索蘆薈資源的深入研究提供了實驗基礎。