TIPE2、TGF-β1 在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)和意義

齊宏峰，劉金香，龐大斌，陳麗倩

（1.昌邑市人民醫(yī)院胸心外科，山東 昌邑 261300；2.昌邑市人民醫(yī)院特檢科，山東 昌邑 261300；3.濰坊市人民醫(yī)院病理科，山東 濰坊 261041）

人口老齡化在很大程度上導(dǎo)致了全世界新增癌癥病例的增加，據(jù)報道[1]，到2035 年，新增癌癥病例將達(dá)到1400 萬例，占全球癌癥發(fā)病率的近60%。肺癌（lung cancer）是最常見的癌癥之一，也是全世界癌癥相關(guān)死亡的主要原因[2]。非小細(xì)胞肺癌占肺癌的80%以上，常見的亞型包括腺癌（約40%）和鱗狀細(xì)胞癌（約30%）[3]。手術(shù)治療對肺癌仍然是最有效的治療方式，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，非小細(xì)胞肺癌的分子靶向治療和免疫治療顯著延長了患者的生存期。然而，絕大多數(shù)晚期非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer）對目前的治療產(chǎn)生耐藥性，尚無有效的治療手段，生存率仍然很低[4，5]。因此，尋求可用于早期診斷、評估預(yù)后的生物標(biāo)志物是當(dāng)前研究的熱點。TIPE2，也稱為TNFAIP8L2，是TNF-α 誘導(dǎo)的蛋白8（TNFAIP8，TIPE）家族成員，主要參與維持機體免疫平衡[6]。TIPE2 與炎癥、自身免疫性疾病、腫瘤等的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[7-9]。有文獻(xiàn)報道[10-13]，TIPE2在胰腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌等腫瘤組織中明顯呈異常表達(dá)，并且其異常表達(dá)多與腫瘤的低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后不良等惡性行為相關(guān)。TGF-β1 位于染色體19q13.1-q13.3，是一種分子量為25 KDa的細(xì)胞因子，具有廣泛的生物學(xué)活性，可以調(diào)節(jié)機體的免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)細(xì)胞的凋亡、增殖和分化[14，15]。本研究中通過免疫組織化學(xué)染色分析了TIPE2、TGF-β1 在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)情況并分析其與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)類型、TNM 分期等非小細(xì)胞肺癌臨床病理因素的關(guān)系，以期為非小細(xì)胞肺癌的診斷和治療研究提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016 年1 月-2021 年12 月昌邑市人民醫(yī)院術(shù)前未經(jīng)放化療且經(jīng)病理確診的非小細(xì)胞肺癌組織50 例和50 例腫瘤旁的正常肺組織（距離腫瘤≥5 cm），排除臨床病理資料不完整者。患者年齡38～84 歲，中位年齡55 歲；年齡≥55 歲者26 例，＜55歲者24 例；男22 例，女28 例；WHO 分類：高分化者21 例，中、低分化者29 例；國際抗癌聯(lián)盟第八版TNM分期：Ⅰ期35 例，Ⅱ～Ⅲ期15 例；伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移17 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33 例；腫瘤大小：＞2 cm 22 例，≤2 cm 28 例；病理組織學(xué)分型：肺鱗狀細(xì)胞癌患者19 例，肺腺癌患者31 例。所有參與者均簽署知情同意書，經(jīng)昌邑市人民醫(yī)院倫理審查委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法 免疫組織化學(xué)染色方法及判讀標(biāo)準(zhǔn)：手術(shù)切除的標(biāo)本放入10%的中性福爾馬林固定12 h，經(jīng)常規(guī)石蠟包埋、梯度酒精脫水、二甲苯透明然后行HE 染色。TIPE2、TGF-β1 兔抗人單克隆抗體（工作液濃度1∶150），購買于武漢三鷹生物科技有限公司。3～4 μm 切片，步驟如下：烤片、脫蠟、脫水；檸檬酸修復(fù)，羊血清孵育；滴加一抗；滴生物素標(biāo)記的二抗抗體；加鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶；滴DAB顯色液顯色。滴加一抗時用PBS 液替代一抗做陰性對照。依據(jù)美國臨床腫瘤學(xué)會ASCO 分級判讀染色結(jié)果，染色陽性的細(xì)胞面積＜5%、5%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%分別記為0、1、2、3、4 分。細(xì)胞著色強度-、+、++、+++分別記為0、1、2、3 分。將染色陽性的細(xì)胞面積評分和細(xì)胞著色強度評分相乘，＜6 分歸為低表達(dá)，≥6 分歸為高表達(dá)。所有結(jié)果由2名病理診斷醫(yī)師獨立作出診斷。

1.3 觀察指標(biāo) 比較肺癌組織及正常肺組織中TIPE2、TGF-β1 的表達(dá)水平；分析肺癌患者癌組織中TIPE2、TGF-β1 表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，并探討TIPE2 和TGF-β1 的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 使用統(tǒng)計軟件SPSS 20.0、GraphPad Prism 6.0 對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗；參數(shù)之間的相關(guān)性分析采用Pearson 分析。以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌組織及正常肺組織中TIPE2、TGF-β1 的表達(dá)水平 與正常肺組織相比，TIPE2 在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)降低（P＜0.05）；與正常肺組織相比，TGF-β1 在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)升高（P＜0.05），見表1。

表1 肺癌組織及正常肺組織中TIPE2、TGF-β1 的表達(dá)水平[n（%）]

2.2 TIPE2、TGF-β1 表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系TIPE2 低表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期、分化程度有關(guān)（P＜0.05），而與組織學(xué)分型、腫瘤大小、年齡、性別無關(guān)（P＞0.05）；TGF-β1 高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期、分化程度有關(guān)（P＜0.05），而與組織學(xué)分型、腫瘤大小、年齡、性別無關(guān)（P＞0.05），見表2。

表2 TIPE2、TGF-β1 的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系（n）

2.3 TIPE2、TGF-β1 的相關(guān)性分析 TIPE2 表達(dá)與TGF-β1 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r＝-0.298，P＝0.018），見圖1。

圖1 肺癌組織中TIPE2 表達(dá)與TGF-β1 表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

肺癌是全世界范圍內(nèi)危害人類健康的主要惡性腫瘤之一，手術(shù)治療是目前肺癌的首選治療方法，但肺癌患者的5 年生存率仍然不高。隨著基因治療和化療技術(shù)的發(fā)展，肺癌的治療有了新的方向。但化療藥物的耐藥和靶向治療的效果欠佳仍然是肺癌治療的難點[4，5]。因此，急需研究發(fā)現(xiàn)肺癌新的分子標(biāo)記物。

TIPE 家族是新發(fā)現(xiàn)的參與免疫調(diào)節(jié)、炎癥和腫瘤發(fā)生的基因家族。TIPE2 選擇性高表達(dá)于淋巴細(xì)胞中，是維持免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)和適應(yīng)性免疫的新型調(diào)節(jié)因子，參與維持機體的免疫穩(wěn)態(tài)，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中也發(fā)揮著重要的作用[7-9]。TIPE2 缺失可引起多種疾病，例如炎癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、哮喘等免疫性疾病[16-18]。既往研究已經(jīng)證實[19]，TIPE2 可能通過抑制Akt 磷酸化，進(jìn)而激活死亡受體途徑、線粒體途徑和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑，促進(jìn)LPS 活化的巨噬細(xì)胞凋亡。TIPE2 在不同癌癥中所起的不同作用可能與腫瘤類型、腫瘤的發(fā)展階段及腫瘤微環(huán)境相關(guān)。腫瘤微環(huán)境就是腫瘤細(xì)胞生活的內(nèi)環(huán)境，包括腫瘤細(xì)胞及周圍的細(xì)胞間質(zhì)、免疫細(xì)胞、血管、炎細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等，其具備缺氧、慢性炎癥及免疫抑制等特征，對腫瘤的生長和發(fā)生發(fā)展有重要的作用[20]。TGF-β 超家族由32 個配體組成，分為TGF-βs 和骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）的2 個亞家族[21]。TGF-β 亞家族包括3 種TGF-β1、-β2 和-β3、激活素A 和B、淋巴結(jié)和幾種生長和分化因子（GDF）。TGF-β1、-β2和-β3 由3 個不同的基因編碼，在三種TGF-β 中，TGF-β1 在免疫細(xì)胞中表達(dá)最廣泛，在血清中表達(dá)最豐富，通常是腫瘤微環(huán)境中的主要亞型。研究表明[22，23]，TGF-β1 是調(diào)節(jié)細(xì)胞和組織分化、血管生成、免疫穩(wěn)態(tài)等許多生物學(xué)過程的關(guān)鍵因子。本研究通過免疫組化方法檢測TIPE2、TGF-β1 在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示與正常肺組織相比，TIPE2 在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)降低（P＜0.05）；與正常肺組織相比，TGF-β1 在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)升高（P＜0.05）；并且TIPE2 低表達(dá)、TGF-β1 高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期、分化程度等惡性行為相關(guān)。另外，Pearson 相關(guān)性分析顯示，TIPE2 表達(dá)與TGF-β1 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。研究報道[24]，TIPE2 異常表達(dá)能夠影響肺癌細(xì)胞的凋亡、生長能力。并且TIPE2 的異常表達(dá)可能通過以mTOR 依賴的方式干擾非小細(xì)胞肺癌中的自噬而導(dǎo)致化療耐藥的發(fā)生，TIPE2 可作為順鉑耐藥非小細(xì)胞肺癌的新治療靶點[25-27]。而TIPE2 在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用可能與TGF-β1 有關(guān)。

綜上所述，TIPE2、TGF-β1 參與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展，并且TIPE2 低表達(dá)、TGF-β1 高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期、分化程度等惡性行為密切相關(guān)。