復(fù)合益生菌制劑對寵物犬貓機(jī)體免疫力的影響

王 誠，丁博群，董桂紅，范秋蘋

（1.山東寵言生物科技有限公司，山東 泰安 271000；2.山東健源生物科技有限公司，山東 泰安 271000）

近年來，人們對精神生活的追求越來越高，出于緩解壓力或是尋找精神寄托，越來越多的家庭選擇飼養(yǎng)寵物，養(yǎng)寵物漸漸成為一種流行趨勢，隨之帶動了寵物用品行業(yè)的快速發(fā)展。寵物食品是寵物的必需品，通過在寵物食品中添加益生菌來調(diào)節(jié)寵物腸道菌群、提高寵物免疫力、促進(jìn)寵物機(jī)體健康。

益生菌是一類安全無害并對機(jī)體健康具有一定功效的活性微生物，其功效主要包括降低血脂血糖血壓、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抑制病原菌生長、抗氧化、促進(jìn)營養(yǎng)吸收等[1]。它主要分為乳桿菌類、雙歧桿菌類、芽孢桿菌類、鏈球菌類、其他類等5大類[2]。目前，益生菌主要應(yīng)用于食品、醫(yī)療、養(yǎng)殖、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域，其在安全無害的同時還具有促進(jìn)營養(yǎng)吸收和提高免疫力等優(yōu)點(diǎn)，因此具有廣闊的發(fā)展前景。此外，益生菌還可以作為寵物食品添加劑，通過調(diào)節(jié)pH值、維持腸道優(yōu)勢菌群平衡、促進(jìn)免疫屏障的構(gòu)建、阻抗病原菌的定植等作用機(jī)制，抑制病原菌的生長并提高動物機(jī)體免疫力[3]。如Strompfová等[4]的研究表明，給健康犬補(bǔ)充發(fā)酵乳桿菌AD1，顯著增加了犬消化道中乳酸菌的數(shù)量，促進(jìn)了犬對某些營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。劉鮮姣[5]研究發(fā)現(xiàn)，口服益生菌可改善犬胃腸消化功能，并快速糾正腸道機(jī)能紊亂現(xiàn)象。這些研究表明，益生菌可以調(diào)節(jié)犬的胃腸道菌群，建立免疫屏障，從而提升犬的免疫力。

血常規(guī)結(jié)果不僅是某些疾病的診斷指標(biāo)，而且可以在一定程度上反映動物機(jī)體的狀態(tài)及健康狀況[6-7]。其中，免疫球蛋白可以在一定體系或環(huán)境中與菌體或病毒體發(fā)生凝集反應(yīng)，產(chǎn)生抑菌效果，從而提高機(jī)體免疫力[8]。白細(xì)胞介素6（Interleukin 6，IL-6）可以在不同炎癥環(huán)境下發(fā)揮相應(yīng)的抑制炎癥或促炎癥作用，是一種幾乎可以調(diào)節(jié)先天免疫系統(tǒng)各個方面的多功能細(xì)胞因子[9]。本試驗(yàn)開展了嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、沼澤紅假單胞菌3種益生菌對寵物犬貓機(jī)體免疫力影響的試驗(yàn)，主要對寵物犬貓血清中的免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）和白細(xì)胞介素6（IL-6）4個免疫指標(biāo)進(jìn)行測定分析，以期為復(fù)合益生菌制劑在寵物犬貓養(yǎng)殖中的應(yīng)用價值提供一定理論支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)菌株

試驗(yàn)選取的菌株分別為嗜酸乳桿菌（保藏號為CICC 20985）、長雙歧桿菌（保藏號為CICC 6207）、沼澤紅假單胞菌（保藏號為CICC 23812），均購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心。

1.2 試驗(yàn)儀器

動物血常規(guī)分析儀（海力孚HF-3800）。

1.3 試驗(yàn)動物

試驗(yàn)設(shè)在泰安市某寵物醫(yī)院，研究對象為滿足寵物實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的成年健康犬和健康貓。

1.4 飼養(yǎng)管理

選取健康的成年犬、貓各21只，分別隨機(jī)分為7組，每組3只，其中1組為對照組，其余6組為試驗(yàn)組。飼養(yǎng)環(huán)境：溫度（23±2）℃，相對濕度（55±5）%。喂養(yǎng)市售寵物食品為對照組，在市售寵物食品的基礎(chǔ)上分別按照表1補(bǔ)飼益生菌菌劑，其中試驗(yàn)4、5、6組中菌劑的添加量為前期試驗(yàn)篩選出的單菌株最優(yōu)添加量，試驗(yàn)1、2、3組分別為低于、高于、等于單菌株最優(yōu)添加量復(fù)合益生菌制劑。每組動物提供相同食盆，每天同一時間飼喂，每天1餐，喂食量為試驗(yàn)犬貓體重的6%，喂食周期為1周，每次飼喂前清潔食具，補(bǔ)充足量的飲用水，每日定時清潔犬舍、貓舍，做好通風(fēng)消殺工作。

表1 不同菌劑的添加量 單位：cfu/g

1.5 血液采集與血清免疫指標(biāo)測定

1周后，取每只試驗(yàn)動物的血樣置于4 ℃環(huán)境靜置4 h后，在4 ℃、5 000 r/min條件下離心15 min進(jìn)行血常規(guī)檢查。具體如下：取試驗(yàn)動物前肢靜脈血液；取20 μL全血置于稀釋液中，振動稀釋均勻；將血樣置于動物血常規(guī)分析儀中進(jìn)行血常規(guī)檢查，記錄數(shù)據(jù)。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2010進(jìn)行初步整理計算，采用IBM SPSS Statistics 21軟件進(jìn)行單因素方差分析，使用Duncan's法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 益生菌制劑對寵物犬免疫力的影響

由表2可知，與對照組相比，各試驗(yàn)組犬的血清IgA和IgM含量均無顯著差異（P＞0.05），IgG含量顯著高于對照組（P＜0.05），補(bǔ)充單種益生菌的犬血清IL-6含量與對照組相比無顯著差異（P＞0.05），補(bǔ)充復(fù)合益生菌制劑的犬血清IL-6顯著高于對照組（P＜0.05）。其中，將嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、沼澤紅假單胞菌按不同添加量復(fù)合配置補(bǔ)充的3個試驗(yàn)組（1、2、3組）均可顯著提高寵物犬血清中IgG和IL-6的含量（P＜0.05），IgG含量較對照組分別增加71.17%、65.91%、79.14%，IL-6含量較對照組分別增加20.42%、20.76%、22.17%，IgG的增加量明顯高于IL-6的增加量。補(bǔ)充單菌株的3個試驗(yàn)組（4、5、6組）與對照組相比，IgG的含量顯著增加（P＜0.05）。試驗(yàn)1、2、3組中IgG和IL-6的含量均顯著高于補(bǔ)充單菌株的試驗(yàn)4、5、6組（P＜0.05）。由此推測，在寵物犬食品中分別單獨(dú)補(bǔ)充嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、沼澤紅假單胞菌均可提高寵物犬血清中的IgG含量，而補(bǔ)充上述3種菌的復(fù)合益生菌制劑可以大大提高寵物犬血清中IgG和IL-6的含量，且效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于添加單菌株。

表2 各組犬血清中IgG、IgA、IgM和IL-6的含量

2.2 益生菌制劑對寵物貓免疫力的影響

由表3可知，各試驗(yàn)組貓的血清IgG含量顯著高于對照組（P＜0.05），其中試驗(yàn)1、2、3組對貓血清中IgG的提升效果優(yōu)于試驗(yàn)4、5、6組。各試驗(yàn)組IgA、IgM、IL-6含量與對照組相比均無顯著差異（P＞0.05），但試驗(yàn)1、2、3組貓血清中IgA、IgM、IL-6的含量有增加趨勢。由此推測，在寵物貓食品中補(bǔ)充嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、沼澤紅假單胞菌的復(fù)合益生菌制劑有助于提高寵物貓血清中IgG的含量。

表3 各組貓血清中IgG、IgA、IgM和IL-6的含量

3 討論

益生菌可以通過調(diào)節(jié)腸道功能提高犬貓的消化吸收能力，同時刺激腸道產(chǎn)生分泌型免疫球蛋白增強(qiáng)寵物機(jī)體免疫力，提高胃腸道免疫功能[10]。Tanprasertsuk等[11]研究發(fā)現(xiàn)，喂食嗜酸乳桿菌等7種益生菌和菊粉合生元的犬，腹瀉發(fā)生率往往較低。Strompfová等[12]研究發(fā)現(xiàn)，犬源益生菌菌株發(fā)酵乳桿菌CCM 7421可以在犬胃腸道內(nèi)定植，改變腸道微生物群，并調(diào)節(jié)犬的血清生化參數(shù)和免疫參數(shù)。血清免疫球蛋白與白細(xì)胞介素均是體現(xiàn)機(jī)體免疫能力的相關(guān)指標(biāo)。連麗娜等[13]在黃羽肉雞基礎(chǔ)飼糧中添加枯草芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌復(fù)合益生菌，發(fā)現(xiàn)雞體內(nèi)IgG含量顯著增加，肉雞腸道形態(tài)發(fā)生變化。Baillon等[14]在狗糧中摻入嗜酸乳桿菌，狗血清中IgG濃度顯著增加，研究推斷這種益生菌可能具有保護(hù)狗腸道健康和增強(qiáng)免疫力的潛力。Alizadeh等[15]在小母雞基礎(chǔ)飼料中補(bǔ)充嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、糞鏈球菌、枯草芽孢桿菌第3周后，小母雞血清中IgG含量增加，免疫力提升。Alonge等[16]對妊娠期母犬補(bǔ)充屎腸球菌和嗜酸乳桿菌，測得犬血清中IgG和IgM的含量顯著提升。吳占月等[17]的研究表明，在柴達(dá)木絨山羊的短期飼養(yǎng)中，飼料中添加雙歧桿菌的山羊血清中IgG和IL-6的含量顯著增加，其生長性能、免疫力、抗氧化功能等均有所改善。孟祥晨等[18]研究發(fā)現(xiàn)，長雙歧桿菌可以顯著增加小白鼠血液中IgG、IL-6的含量，對小白鼠的免疫功能產(chǎn)生正向調(diào)節(jié)作用。這些研究均表明，嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌可以不同程度地使動物血清中IgG、IL-6含量增加，使腸道保持健康狀態(tài)，并對機(jī)體免疫力有所改善。邵林等[19]研究發(fā)現(xiàn)，沼澤紅假單胞菌及沼澤紅假單胞菌與枯草芽孢桿菌的復(fù)合菌均可通過菌株的代謝產(chǎn)物來增強(qiáng)鯽魚的免疫特性。目前，沼澤紅假單胞菌多應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖，在畜禽養(yǎng)殖中的應(yīng)用報道較少。本試驗(yàn)將嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、沼澤紅假單胞菌單獨(dú)補(bǔ)充及以不同添加量復(fù)合補(bǔ)充到寵物食品中時，可達(dá)到增加寵物犬貓血清中IgG和IL-6含量的效果，與上述研究結(jié)果相似。添加不同比例的復(fù)合益生菌制劑對血清中IgG和IL-6含量的提升效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于單獨(dú)添加，說明嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、沼澤紅假單胞菌復(fù)合益生菌制劑可以在一定程度上增強(qiáng)寵物犬貓機(jī)體免疫力。

4 結(jié)論

在寵物犬貓食品中添加由嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、沼澤紅假單胞菌組成的復(fù)合益生菌制劑，可以改善寵物犬貓血清生化指標(biāo)，增強(qiáng)寵物犬貓機(jī)體免疫力。