采精頻率對(duì)嘉黎牦牛精液品質(zhì)的影響

王耀梅，袁 越，趙彥玲

（西藏農(nóng)牧學(xué)院 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，西藏 林芝 860000）

牦牛精液品質(zhì)受多種因素影響，其中采精頻率是一個(gè)非常重要的因素[1]。研究最佳采精頻率對(duì)充分合理地利用牦牛種公牛具有重要意義。在精液采集過(guò)程中需要根據(jù)不同的牛種、年齡、身體狀況、繁殖目的等因素合理設(shè)定采精頻率[2]。采精頻率對(duì)于保障公牛的生殖健康和精液品質(zhì)非常重要，如果采精頻率過(guò)低，將導(dǎo)致公牛射精不充分、精子老化、精液積聚過(guò)多等，影響精液的質(zhì)量和產(chǎn)量；如果采精頻率過(guò)高，就會(huì)導(dǎo)致公牛體力不足、精液質(zhì)量下降，影響精子的品質(zhì)和數(shù)量，甚至還會(huì)影響公牛的身體健康[3-5]。原因是采精頻率過(guò)低，會(huì)使附睪內(nèi)儲(chǔ)存的精液時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，導(dǎo)致精子密度偏低，精子長(zhǎng)時(shí)間停留在附睪內(nèi)會(huì)降低精子的活力和受孕能力，增加精子死亡率；而采精頻率過(guò)高，精液在附睪內(nèi)儲(chǔ)存的時(shí)間短，會(huì)導(dǎo)致精子成熟率降低或數(shù)量減少，生產(chǎn)效率顯著下降[6]。因此，本研究利用計(jì)算機(jī)輔助精液分析儀對(duì)不同采精頻率的嘉黎牦牛的精液品質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，以探索最佳采精頻率，為嘉黎牦牛種公牛的合理應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

選用拉薩市當(dāng)雄縣當(dāng)雄牦牛凍精站中體況、年齡相近的12頭健康成年嘉黎牦牛作為試驗(yàn)動(dòng)物。

1.2 試驗(yàn)方法

按照不同的采精頻率將牦牛分為A、B、C、D 4個(gè)組，每組3頭。A組采精2次/周、B組采精3次/周、C組采精4次/周、D組采精5次/周。試驗(yàn)采用假陰道法采精，采精時(shí)間為早晨9：00左右，試驗(yàn)期為1周，每次采精完成后立即送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行精液品質(zhì)檢測(cè)。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及測(cè)定方法

用計(jì)算機(jī)輔助精液分析系統(tǒng)（casa）檢測(cè)精子濃度、活力和運(yùn)動(dòng)參數(shù)等指標(biāo)。把采集的精液放在37 ℃水浴鍋中孵育10 min后，將3 μL精液滴在預(yù)熱（37 ℃）的makler精子計(jì)數(shù)板上，待精液靜止穩(wěn)定后，放置到顯微鏡下，采用精子圖像分析儀檢測(cè)精子的濃度、活力和運(yùn)動(dòng)參數(shù)等相關(guān)指標(biāo)。

用改良巴氏染色方法檢測(cè)精子畸形率和頂體完整率。考馬斯亮藍(lán)染色液在37 ℃水浴中預(yù)熱10 min，將精子涂片浸泡在染色液中5～7 min后沖洗干凈并晾干，干燥后密封，用改良巴氏染色法染色，在顯微鏡下觀察精子畸形率和頂體完整率。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，精子的各項(xiàng)指標(biāo)數(shù)據(jù)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行分析，均值比較采用單因素方差分析，用鄧肯多重比較進(jìn)行顯著性分析，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 采精頻率對(duì)嘉黎牦牛精液品質(zhì)的影響

從表1可以看出，嘉黎牦牛采精頻率為3次/周時(shí)，精液品質(zhì)達(dá)到最高。其中，采精頻率為3次/周的精子密度顯著高于2次/周與5次/周的精子密度（P＜0.05），而與4次/周的精子密度差異不顯著（P＞0.05）；采精頻率為3次/周的精子活力也顯著高于其他組（P＜0.05）；采精頻率2次/周、3次/周、4次/周時(shí)的精液量各組間差異不顯著（P＞0.05），但均與5次/周組差異顯著（P＜0.05），精液量隨著采精頻率的增加而逐漸減少；采精頻率為2次/周、3次/周時(shí)精子畸形率差異不顯著（P＞0.05），但均與采精頻率為4次/周、5次/周的精子畸形率差異顯著（P＜0.05）；采精頻率為5次/周時(shí)精液的頂體完整率顯著低于其他組（P＜0.05）。

表1 采精頻率對(duì)嘉黎牦牛精液品質(zhì)的影響

2.2 采精頻率對(duì)嘉黎牦牛精子運(yùn)動(dòng)速度的影響

由表2可知，精子的曲線運(yùn)動(dòng)速率（VCL）、平均路徑速度（VAP）、直線速率（VSL）均在采精頻率為3次/周時(shí)達(dá)到最高值，與4次/周差異不顯著，與2次/周和5次/周差異顯著（P＜0.05）。

表2 采精頻率對(duì)嘉黎牦牛精子運(yùn)動(dòng)速度的影響

精液的數(shù)量和質(zhì)量易受環(huán)境、天氣和遺傳因素影響[7]，公牦牛精液質(zhì)量的好壞直接影響牦牛的受孕率，其中采精頻率是一個(gè)重要的影響因素。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，精子的密度和活力指標(biāo)均在采精頻率為3次/周時(shí)達(dá)到峰值；精液量在采精頻率為2次/周時(shí)最多，當(dāng)采精頻率增加到5次/周時(shí)，精液量最少；精子的VCL、VAP、VSL均在3次/周時(shí)達(dá)到最高值，與4次/周差異不顯著，與2次/周和5次/周差異顯著。Meding[8]的研究表明，采集精液頻率過(guò)高的公豬精液品質(zhì)相對(duì)較差。Audet等[9]和胡國(guó)娟[10]的研究結(jié)果均表明，成年種公豬每隔5～6天采精1次，其精液品質(zhì)最佳。謝靜靜等[11]的研究結(jié)果表明，豬采精間隔為3～5 d時(shí)綜合性能最佳。易宗容等[12]研究發(fā)現(xiàn)，采精頻率為3次/周時(shí)精液品質(zhì)最佳，精子頂體完整率隨著采精頻率的增加而出現(xiàn)顯著下降趨勢(shì)。陽(yáng)文攀等[13]的研究結(jié)果表明，豬的采精間隔時(shí)間越長(zhǎng)，其精液量、精子活力、精液密度指標(biāo)越好，采精間隔為5 d時(shí)綜合性能最佳，但長(zhǎng)時(shí)間不采精會(huì)導(dǎo)致精子活力降低，這表明采精頻率對(duì)精液質(zhì)量有較大影響。也有研究發(fā)現(xiàn)，精子活力高說(shuō)明精子的運(yùn)動(dòng)性能較強(qiáng)，相關(guān)的運(yùn)動(dòng)參數(shù)也會(huì)相應(yīng)提高。在本試驗(yàn)中，精子的VCL、VAP、VSL隨著采精頻率的增加呈現(xiàn)先增加后下降的趨勢(shì)，在3次/周時(shí)，VCL、VAP、VSL指標(biāo)達(dá)到峰值。李碧波等[14]的研究表明，高頻率的采精會(huì)給公羊帶來(lái)過(guò)度刺激，導(dǎo)致其陰莖難以恢復(fù)，出現(xiàn)疲憊、精神不佳和性欲下降等情況，同時(shí)會(huì)影響公羊的正常活動(dòng)和繁殖能力。張佳慧等[15]的研究結(jié)果表明，湖羊的采精量及精子密度會(huì)隨著采精頻率的增加而下降。Bunaciu等[16]和趙輝玲等[17]的研究結(jié)果表明，兔的精子密度和采精量均會(huì)隨著采精頻率的增加而出現(xiàn)下降趨勢(shì)。精子密度和射精量隨著采精頻率的增加而降低，動(dòng)物由于品種不同，其合適的采精頻率也有所差異。李雪賢等[18]研究發(fā)現(xiàn)，種公驢采精頻率為3 d/次時(shí)最佳，梅軍四等[19]研究結(jié)果表明，長(zhǎng)白種公豬精子的畸形率、精液密度和采精量隨著采精頻率的增加出現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，除射精量在采精頻率為2次/周時(shí)較高外，精子密度、精子活率、精子的曲線運(yùn)動(dòng)速率、平均路徑速度、直線速率均在采精頻率為3次/周時(shí)最佳。

3 結(jié)論

嘉黎牦牛采精頻率為3次/周時(shí)，精子的密度、活力高于2次/周、4次/周、5次/周；精液量和精子頂體完整率在采精頻率為2次/周時(shí)達(dá)到最高；精子畸形率在采精頻率為3次/周時(shí)最低，呈現(xiàn)出隨采精頻率的增加而升高的趨勢(shì)。精子曲線運(yùn)動(dòng)速率、平均路徑速度、直線速率均在3次/周時(shí)達(dá)到最高值。綜上所述，嘉黎牦牛的最佳采精頻率為2～3次/周。