ZEB1-AS1在結腸癌中表達及與鉑類藥物化療敏感性的關系

蔡欣 劉坤 張輝 楊瑞芳 冉德園 王愛玲

(濱州醫學院煙臺附屬醫院醫學檢驗科,山東 煙臺 264100)

每年有超過60萬人死于結腸癌,該病是世界上最常見的癌癥類型之一,特點為預后較差,生存率低,嚴重威脅人類的生命健康〔1〕。臨床發病率呈上升趨勢,目前我國在惡性腫瘤中排名第四,與高蛋白飲食相關。與許多其他類型的癌癥一樣,結腸癌的發展是一個多階段的過程,涉及遺傳和表觀遺傳變化的積累〔2〕。鋅指E-盒結合同源異形盒(ZEB)1-反義鏈(AS)1在腫瘤發生和發展過程中起重要作用〔3〕。鉑類藥物是目前最有效的抗癌藥物之一,廣泛應用于各種實體瘤的治療,但鉑類藥物的廣泛應用會導致腫瘤對鉑類化療的耐藥。有研究表明ZEB1-AS1可能會對鉑類化療的療效產生影響〔4〕。本研究旨在分析結腸癌中ZEB1-AS1的表達及其與鉑類化療藥物敏感性及預后的關系。

1 材料與方法

1.1一般資料 選取2016年1月至2018年1月濱州醫學院煙臺附屬醫院腫瘤科收治的結腸癌患者120例為研究組,男76例,女44例;年齡55～85歲,平均(69.09±4.78)歲;根據美國國立綜合癌癥網絡(NCCN)TNM分期標準進行臨床分期〔5〕:Ⅲ期59例,Ⅳ期61例;淋巴結轉移79例,無淋巴結轉移41例。納入標準:①所有病例經過病理學診斷確診為結腸癌;②患者術前均未行含鉑類藥物化療;③對本研究內容知情,同意參加本次試驗;④臨床資料完整,有完整隨訪記錄。排除標準:①合并其他癌癥者;②合并心臟、肝臟及腎臟功能不全者;③有嚴重感染者。收集結腸癌患者手術過程中切除的癌組織及相應癌旁正常組織(對照組)石蠟包埋標本。本研究獲得醫院倫理委員會批準后實施,所有研究對象家屬簽署知情同意書。

1.2方法 FOLFOX4方案:奧沙利鉑100 mg/m2靜脈滴注2 h,第1天;亞葉酸鈣200 mg/m2,靜脈滴注2 h,第1～2天;5-氟尿嘧啶400 mg/m2推注,第1～2天。每2 w重復,共進行6個周期以上化療周期〔6〕。按照世界衛生組織實體瘤客觀療效評價標準〔7〕判斷,化療效果分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩定(SD)與進展(PD),其中以CR+PR為有效。采用實時熒光定量(qRT-PCR)檢測ZEB1-AS1水平:檢測兩組ZEB1-AS1水平,使用Trizol試劑從上述樣本中抽提總RNA,利用紫外分光光度計檢測總RNA含量,總RNA反轉錄為cDNA,利用熒光定量PCR儀分別對ZEB1-AS1和U6進行擴增,U6正向引物5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3,反向5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′ZEB1-AS1正向引物5′-GAATATTCCTCCCACACCCA-3′,反向5′-TATGGTTTTGACGACTGTGTGAT-3′。采用2-△△Ct計算基因相對表達量。

1.3隨訪 所有患者通過門診復查的方式進行隨訪,記錄患者手術后生存時間,隨訪期限為從患者手術完成至隨訪截止日期,或死亡、失訪日期。隨訪5年,隨訪截止日期為2023年1月,隨訪率為100%。

1.4統計學方法 采用SPSS25.0軟件進行t檢驗、χ2檢驗、生存曲線(Kaplan-Meier)法及Cox回歸模型分析。

2 結 果

2.1兩組ZEB1-AS1水平比較 研究組ZEB1-AS1水平(2.83±0.84)高于對照組(1.07±0.32),差異有統計學意義(t=41.516,P=0.000)。

2.2結腸癌組織中ZEB1-AS1表達水平與患者臨床病理特征的關系 以結腸癌患者組織中ZEB1-AS1表達平均數(2.83)為界值將結腸癌患者分成ZEB1-AS1高表達組(n=57)與低表達組(n=63),結腸癌患者ZEB1-AS1表達與年齡、性別、腫瘤直徑無關(P>0.05),與TNM分期、淋巴結轉移有關(P<0.05)。見表1。

表1 結腸癌組織中ZEB1-AS1高表達與患者臨床病理特征的關系(n)

2.3ZEB1-AS1表達水平與化療客觀有效率的關系 化療2～4個周期后(中位3個周期),有效53例,無效67例。ZEB1-AS1低表達患者治療有效率〔38例(60.3%)〕高于ZEB1-AS1高表達患者〔15例(26.32%)〕,差異有統計學意義(χ2=12.685,P=0.000)。

2.4結腸癌組織中ZEB1-AS1表達水平與生存期的關系 Kaplan-Meier分析結果顯示,ZEB1-AS1高表達患者5年生存率(26.30%)低于低表達患者(41.30%),差異有統計學意義(Log-rank=6.843,P<0.05)。見圖1。

圖1 結腸癌組織中ZEB1-AS1表達水平與生存期的關系

2.5Cox回歸模型分析影響結腸癌患者預后不良的因素 單因素Cox分析顯示,TNM分期Ⅳ期、淋巴結轉移、化療無效、ZEB1-AS1高表達均是影響結腸癌患者預后不良的危險因素(P<0.05)。見表2;多因素Cox分析顯示,TNM分期Ⅳ期、淋巴結轉移、化療無效、ZEB1-AS1高表達均是影響結腸癌患者預后不良的獨立危險因素(P<0.05)。見表3。

表2 影響結腸癌患者預后不良的單因素分析

表3 影響結腸癌患者預后不良的多因素分析

3 討 論

結腸癌是常見的消化道惡性腫瘤,在全球范圍內為男性第3位、女性第2位高發性惡性腫瘤,每年新發約120萬例,死亡約60萬例〔8〕。早期癥狀不明顯,隨著癌腫的增大而表現出排便習慣改變、便血、腹瀉、腹瀉與便秘交替、局部腹痛等癥狀,晚期則表現貧血、體重減輕等全身癥狀。隨著社會經濟發展、居民生活方式的轉變及人口老齡化的加劇,我國結腸癌的發病和死亡呈明顯上升趨勢,且發病年齡有所提前,嚴重威脅人類的生命健康〔9〕。ZEB1-AS1基因屬于非編碼RNA,隸屬于長鏈非編碼(lnc)RNA類〔10〕。該RNA是從具有ZEB1的共享雙向啟動子轉錄而來,與賴氨酸甲基轉移酶2A結合并促進組蛋白修飾,這些修飾被認為可促進ZEB1的表達〔11〕。研究表明該基因的表達與腫瘤進展相關,與ZEB1-AS1相關的疾病包括膀胱癌和鱗狀細胞癌〔12〕。奧沙利鉑是新一代鉑類抗腫瘤藥物〔13〕。與順鉑、卡鉑相比,奧沙利鉑具有抗癌譜廣、毒副作用小等優點,尤其可以有效治療進展期大腸癌。然而由于藥物使用的盲目性,無論單獨還是聯合應用,奧沙利鉑的有效率不高〔14〕。

本研究結果唐銀炳等〔15〕研究結果一致,ZEB1-AS1在胃癌中表達上調,與胃癌不良預后相關;此外,王妮娜等〔16〕研究也顯示,ZEB1-AS1在乳腺癌中高表達,能夠促進乳腺癌細胞遷移和侵襲;高儒旭〔17〕研究顯示,在膀胱癌細胞中,ZEB1-AS1將通過調控miR-200b/FSCN1并與轉化生長因子(TGF)-β1共同誘導膀胱癌細胞的增殖。劉芬等〔18〕研究發現ZEB1-AS1在食管鱗癌中高表達,且與不良預后相關;時北京等〔19〕報道LncRNA-ZEB1-AS1通過與miRNA形成ceRNA網絡使肝癌預后不良。以上研究均表明LncRNA-ZEB1-AS1在多種腫瘤中都發揮促癌基因作用。

本研究結果說明ZEB1-AS1在結腸癌患者化療耐藥過程中發揮重要作用。與宋嬌等〔20〕研究結果一致,ZEB1-AS1在子宮內膜癌中高表達,且其高表達與子宮內膜癌患者淋巴結轉移、遠端轉移相關。該結果同時也證實過表達ZEB1-AS1可促進子宮內膜癌細胞的增殖,降低其對順鉑、5-氟尿嘧啶等化療藥物的敏感度。本研究結果說明結腸癌患者腫瘤組織中ZEB1-AS1低表達者應用奧沙利鉑輔助化療可能獲得生存受益,ZEB1-AS1表達水平可以作為奧沙利鉑治療的篩選指標。

綜上,ZEB1-AS1在結腸癌患者中高表達,是影響結腸癌患者預后不良的危險因素,且其高表達與化療效果、TNM分期、淋巴結轉移有關,ZEB1-AS1低表達者應用奧沙利鉑輔助治療有效率高。