溶血磷脂酰膽堿?；D移酶1在宮頸癌中的表達及臨床意義

陳韓,楊江怡,陳華,韓鋒

宮頸癌是女性生殖系統最常見的惡性腫瘤之一。GLOBOCAN2020全球癌癥統計數據報告顯示,2020年全球約60.4萬宮頸癌新發病例和34.2萬死亡病例[1-2]。2020年我國宮頸癌新發病例約11萬例,死亡病例約6萬例[3]。目前宮頸癌較為理想的治療模式是手術切除配合術后同步放療、化療,但是宮頸癌早期癥狀不明顯,確診時通常已處于中晚期,貽誤了最佳的手術治療時機,且患者預后往往較差[4-5]。溶血磷脂酰膽堿?；D移酶1(lysophosphatidylcholine acyltransferase 1,LPCAT1)是一種重要的磷脂?；x酶,主要功能為介導磷脂代謝過程Land’s循環中溶血磷脂酰膽堿的再乙?；?生成飽和磷脂酰膽堿(PC)[6]。膽堿代謝產物的變化是細胞癌變的一個重要特征,而PC是腫瘤細胞較正常細胞改變最為明顯的磷脂。可見,磷脂酰膽堿的代謝異常與腫瘤的發生發展密切相關[7-8]。LPCAT1作為合成磷脂酰膽堿的關鍵酶在多種惡性腫瘤中表達顯著上升,如肺癌、子宮內膜癌、前列腺癌、乳腺癌、肝癌等[9-13]。然而,關于LPCAT1蛋白在宮頸癌中的表達情況及其與患者預后的關系相關報道較少。因此,現分析不同LPCAT1蛋白表達的宮頸癌患者臨床病理特征和預后的差異,以期為宮頸癌的早期診斷和臨床治療提供新思路,報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2012年1月1日—2022年12月31日海南醫學院第一附屬醫院婦科手術治療宮頸癌患者163例作為觀察組,年齡(50.37 ± 12.88)歲;腫瘤直徑≤4 cm者71例,>4 cm者92例;參考國際婦產科聯盟(FIGO)分期標準[14]:Ⅰ～Ⅱ期110例,Ⅲ～Ⅳ期53例;主要的組織病理類型為鱗癌133例(81.6%);子宮肌層浸潤深度>1/2肌層72例(44.2%);發生盆腔淋巴結轉移77例(47.2%);組織分化程度為低分化88例,中高分化75例;HPV感染陽性率為74.8%(122/163)。另選取同期因患子宮平滑肌瘤施行全子宮切除術患者77例作為對照組,年齡(52.93±13.56)歲。2組患者年齡比較差異無統計學意義(t=1.413,P=0.159)。本研究已經獲得醫院倫理委員會批準(HYFY20230258),患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標準 (1)納入標準:①無生育需求,主要術式為廣泛子宮切除加盆腔淋巴結清掃術;②手術切除標本經病理組織活檢證實為宮頸癌[15];③術前未接受放療、化療和靶向治療等抗腫瘤治療。(2)排除標準:①合并其他惡性腫瘤;②合并心、肺、肝、腎等嚴重影響患者生存的疾病;③臨床資料不完整、隨訪不依從。

1.3 觀測指標與方法

1.3.1 免疫組化法檢測LPCAT1蛋白表達:收集觀察組患者手術切除宮頸癌組織以及對照組患者手術切除正常宮頸組織,經10%福爾馬林溶液固定、常規石蠟包埋,4 μm厚連續切片。二甲苯脫蠟、乙醇梯度水化后采用免疫組化SP法對切片進行染色。3%過氧化氫溶液浸泡后在檸檬酸溶液中修復抗原,PBS緩沖液漂洗后加入10%山羊血清室溫下封閉20 min。將1∶200稀釋的LPCAT4一抗(購自英國Abcam公司)滴加至切片上,4℃孵育過夜。次日PBS沖洗后將二抗(購自北京中杉金橋生物技術有限公司)滴加至切片上室溫孵育30 min。PBS清洗后DAB顯色、蘇木精復染。常規乙醇梯度脫水后二甲苯固定、中性樹脂封片,顯微鏡(型號CX23BGUV,購自日本Olympus公司)下觀察并攝片。

1.3.2 隨訪:依據《宮頸癌診療規范》[15]推薦的隨訪方法,采用門診復查或電話隨訪,第1年和第2年每3個月隨訪1次,以后每6個月隨訪1次,隨訪截至2023年5月31日?？偵嫫?overall survival,OS)是指患者接受手術治療當日至任何原因死亡或失訪的時間[16]。

1.4 結果判定 參照二級計分法對免疫組化結果進行判定,即總評分=陽性細胞百分比×細胞染色強度。以細胞膜和/或細胞質呈現棕黃色或棕褐色判定為LPCAT1蛋白表達陽性。陽性細胞百分比≤5%計0分,6%～25%計1分,26%～50%計2分,51%～75%計3分,>75%計4分;細胞染色強度呈無色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別計0、1、2、3分。上述兩者乘積0分為陰性,1～4分為弱陽性,5～8分為陽性,9～12分為強陽性,其中陰性和弱陽性認定為LPCAT1蛋白低表達,陽性和強陽性認定為高表達[17]。

2 結 果

2.1 宮頸癌組織和正常宮頸組織中LPCAT1蛋白表達比較 宮頸癌組織和正常宮頸組織中LPCAT1蛋白表達見圖1;宮頸癌組織中LPCAT1蛋白高表達率為50.9%(83/163),高于正常宮頸組織中的21.3%(16/75)(χ2=18.509,P<0.001)。

注:A.正常宮頸組織中LPCAT1蛋白陽性表達;B.宮頸癌組織中LPCAT1蛋白弱陽性表達;C.宮頸癌組織中LPCAT1蛋白陽性表達;D.宮頸癌組織中LPCAT1蛋白強陽性表達。

2.2 LPCAT1表達水平在宮頸癌患者不同臨床病理特征中差異比較 FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、浸潤深度>1/2肌層、淋巴結轉移、中高分化宮頸癌患者LPCAT1蛋白高表達率高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、≤1/2肌層、無淋巴結轉移、低分化者(P<0.05),而在不同年齡、腫瘤直徑、組織病理類型和HPV感染中比較差異無統計學意義(P>0.05),見表1。

表1 LPCAT1表達水平在宮頸癌患者不同臨床病理特征中差異比較 [例(%)]

2.3 LPCAT1蛋白表達與宮頸癌患者術后預后的關系 163例宮頸癌患者中位生存時間為67.73個月,1、3和5年總生存率分別為87.4%、60.5%和49.1%。

83例LPCAT1蛋白高表達者中位生存時間為36.10個月,低于80例低表達者中位生存時間95.30個月(χ2=4.791,P=0.029),見圖2。

圖2 LPCAT1蛋白表達與宮頸癌患者術后預后的關系

2.4 宮頸癌患者術后預后影響因素Cox回歸分析 以宮頸癌患者術后生存為因變量,以上述結果中P<0.05項目為自變量進行多因素Cox回歸分析,結果顯示FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤浸潤深度>1/2肌層、淋巴結轉移、中高分化和LPCAT1蛋白高表達均為宮頸癌患者術后預后不良的獨立危險因素(P<0.05),見表2。

表2 宮頸癌患者術后預后影響因素Cox回歸分析

3 討 論

LPCAT1屬于1-酰基甘油-3-磷酸?；D移酶(1-acylglycerol-3-phosphate acyltransferases,AGPATs)家族,是一種具有4個保守結構域的Ⅱ型跨膜蛋白,定位于細胞的脂滴、內質網和高爾基體內[18]。LPCAT1通過將脂肪?；溄Y合到磷脂酰膽堿中來催化溶血磷脂酰膽堿轉化為磷脂酰膽堿,這種磷脂代謝反應一方面可為腫瘤細胞增殖提供更多的生物來源,另一方面可調節細胞內磷脂組分和脂滴含量,影響細胞膜性結構及信號通路傳導[6,19]。多項研究表明LPCAT1催化的溶血磷脂酰膽堿向磷脂酰膽堿的轉化是腫瘤進展的原因[10,20]。

LPCAT1表達上調可促進腫瘤細胞增殖、侵襲和遷移,而其表達下調可誘導細胞周期阻滯于G0/G1期從而抑制腫瘤細胞生長[9]。本研究發現宮頸癌組織中LPCAT1蛋白高表達率顯著高于正常宮頸組織。前期細胞實驗證實敲低LPCAT1可顯著抑制宮頸癌細胞的增殖、遷移和侵襲,同時顯著誘導細胞凋亡。LPCAT1沉默可顯著降低宮頸癌細胞中白介素-6(IL-6)、p-Janus激酶2(JAK2)和磷酸化信號轉導和轉錄激活因子3(p-STAT3)的表達水平[21]。類似地,在具有LPCAT1缺失的宮頸癌細胞中,IL-6/STAT3靶基因的表達水平也被顯著下調[19]。添加重組IL-6后可消除由敲低LPCAT1引起的功能變化,抑制宮頸癌細胞的增殖和上皮間質轉化過程[21]。此外,動物實驗結果證實LPCAT1缺失可有效降低異種移植小鼠模型的腫瘤生長速率和體內肺轉移[22]。Tao等[23]發現LPCAT1通過介導SREBP-1/EGFR/PI3K信號通路調節細胞內的膽固醇代謝,進而促進食管癌細胞的遷移和侵襲。

本研究發現,LPCAT1蛋白高表達的宮頸癌患者總生存率顯著低于低表達者,與前期研究發現類似,例如劉小小等[24]發現LPCAT1 mRNA低表達的非小細胞肺癌患者總生存率明顯高于高表達者;He等[13]檢測了3 715例肝癌組織和3 105例非肝癌組織發現,肝癌組織標本中LPCAT1蛋白表達水平顯著增加,且LPCAT1高表達與總生存狀況惡化相關,是肝癌預后不良的危險因素(HR=2.21)。

綜上所述,LPCAT1蛋白在宮頸癌組織中呈現高表達水平,其表達水平上升與FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤浸潤深度>1/2肌層、淋巴結轉移、中高分化程度呈正相關,同時亦是宮頸癌患者術后預后不良的獨立危險因素,提示LPCAT1蛋白可能是宮頸癌早期診斷的潛在生物標志物和治療靶標。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

陳韓:設計研究方案,實施研究過程,論文撰寫;楊江怡:實施研究過程,資料搜集整理,論文修改;陳華:提出研究思路,分析試驗數據,論文審核;韓鋒:論文審核,論文修改,論文終審