急性心肌梗死患者血清GRP78，HSP47，miR-126表達與心功能的相關性*

趙 麗，高彥霞，柏 玲，時 雨，楊 妮，李浴靜

（西安交通大學第二附屬醫院，陜西西安 710004）

急性心肌梗死是一種冠狀動脈急性阻塞導致心肌缺血壞死、心功能受損的病癥［1］，致死率、致殘率均較高。急性心肌梗死患者主要表現為超過30 min 的心前區壓榨性疼痛、憋悶，發病前數日多數患者會有乏力、胸部不適等癥狀，嚴重威脅患者的生命健康［2］。故急性心肌梗死的早期診斷、評估與預測病前嚴重程度，以及實施風險分層對選擇后續治療方式十分重要。目前，臨床評估急性心肌梗死病情與風險常用心肌肌鈣蛋白I（cTnI），但結果多為假陽性。為保障臨床診斷、治療效果，需繼續尋找與急性心肌梗死相關的生物標志物［3-4］。有研究證實，內質網應激可介導心肌細胞、心肌組織的凋亡，加速心室重構。葡萄糖調節蛋白78（GRP78）、熱休克蛋白47（HSP47）是急性心肌梗死導致的內質網應激相關蛋白，GRP78 和HSP47 可體現患者心肌梗死后內質網的應激情況［5］。微小RNA（miRNA）是22nt左右的非編碼RNA，在血管新生、損傷修復中有重要作用。微小RNA-126（miR-126）能靶向調控血管再生，促進血管成熟，可在急性心肌梗死發生、發展中起到一定作用［6］。本研究中探討了急性心肌梗死患者血清GRP78，HSP47，miR - 126 與心功能的相關性，以及對鑒別患者風險層級的診斷價值，以期為后續疾病的診斷與治療提供參考。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入標準：符合《急性心肌梗死診斷和治療指南》中急性心肌梗死的診斷標準［7］；年齡大于18歲；入院后24 h內完成體征、心電圖、實驗室指標等檢查，且檢查結果清晰；含ST 段抬高型心肌梗死、非ST 段抬高型心肌梗死。本研究方案已獲醫院醫學倫理委員會批準（倫審批件號為2021035），患者及家屬均簽署知情同意書。

排除標準：合并惡性腫瘤、肝腎功能異常；合并免疫功能疾病，多器官衰竭；存在腦血管疾病；合并全身感染性疾病；急性心肌梗死發病史；入組前1 個月內有開放性手術史或嚴重外傷史。

研究對象選擇與分組：選取我院2021 年6 月至2022 年6 月收治的急性心肌梗死患者80 例為觀察組，同時選取參加醫院體檢的健康者50 例為對照組。兩組研究對象一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。詳見表1。

1.2 方法

HSP47 和GRP78 水平檢測：于患者入院24 h 內取靜脈血4 mL，離心（轉速為3 000 r / min）10 min，置-20 ℃環境中待測，采用酶聯免疫吸附試驗檢測HSP47和GRP78水平。使用345-90328型酶標儀（北京平利洋醫療設備有限公司）進行檢測，試劑盒購自上海酶聯生物科技有限公司，操作步驟按說明書進行。

miR - 126 檢測：采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRT - PCR）檢測miR - 126 水平，取患者血清標本提取RNA，濃縮、洗滌、干燥后測RNA純度、完整度，逆轉錄得到互補脫氧核糖核酸（cDNA），實施qRT-PCR，正、反引物由上海恒斐生物科技有限公司設計合成，采用2-ΔΔCt法計算血清中miR-126的相對表達。

心功能指標檢測：于患者入院后12 h 內完成超聲心動圖檢查，獲得左室射血分數（LVEF）；采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清cTnI、肌酸激酶MB型同工酶（CK-MB）水平。使用345-90328型酶標儀（北京平利洋醫療設備有限公司）進行檢測，試劑盒購自上海酶聯生物科技有限公司，操作步驟按說明書進行。

心肌梗死患者危險分層：于患者入院24 h 內，采用全球急性冠狀動脈事件注冊研究（GRACE）評分［8］對觀察組患者進行危險分層，GRACE 評分＞140 分、109～140 分、≤108 分別對應高危組（12 例）、中危組（31 例）、低危組（37例）。

1.3 統計學處理

采用SPSS 22.0統計學軟件分析。計數資料以率（%）表示，行χ2檢驗；計量資料以X±s表示，行t檢驗。采用Pearson 相關系數法進行相關性分析，建立受試者操作特征曲線（簡稱ROC 曲線），評估血清HSP47，GRP78，miR-126水平鑒別急性心肌梗死患者高危險分層的價值。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清GRP78，HSP47，miR-126

與對照組比較，觀察組患者的GRP78 和HSP47 水平均顯著升高（P＜0.05），miR - 126 相對表達顯著降低（P＜0.05）。詳見表2。

表2 兩組研究對象血清GRP78，HSP47，miR-126比較（X±s）Tab.2 Comparison of serum GRP78，HSP47，and miR-126 between the two groups（X±s）

2.2 LVEF，cTnI，CK-MB 水平

與對照組比較，觀察組患者的LVEF顯著降低（P＜0.05），血清cTnI 和CK - MB 水平均顯著升高（P＜0.05）。詳見表3。

表3 兩組研究對象LVEF，cTnI，CK-MB水平比較（X±s）Tab.3 Comparison of LVEF，cTnI，and CK - MB levels between the two groups（X±s）

2.3 LVEF，cTnI，CK - MB 與血清GRP78，HSP47，miR-126 的相關性分析

相關性分析結果顯示，GRP78 與cTnI 和CK - MB均呈正相關（P＜0.05），與LVEF 呈負相關（P＜0.05）；HSP47 與cTnI 和CK - MB 均呈正相關（P＜0.05），與LVEF呈負相關（P＜0.05）；miR-126與cTnI和CK-MB均呈負相關（P＜0.05），與LVEF 呈正相關（P＜0.05）。詳見表4。

表4 LVEF，cTnI，CK-MB與血清GRP78，HSP47，miR-126相關性分析Tab.4 Correlation analysis of LVEF，cTnI and CK-MB with serum GRP78，HSP47 and miR-126

2.4 不同危險分層患者GRP78，HSP47，miR-126

GRP78 和HSP47 水平由低到高依次為低危組＜中危組＜高危組，miR-126 相對表達由高到低依次為低危組＞中危組＞高危組，差異有統計學意義（P＜0.05）。詳見表5。

表5 3組患者血清GRP78，HSP47，miR-126比較（X±s）Tab.5 Comparison of serum GRP78，HSP47，and miR-126 among the three groups（X±s）

2.5 ROC 曲線分析GRP78，HSP47，miR - 126 在急性心肌梗死高危患者中的診斷價值

GRP78，HSP47，miR - 126 鑒別急性心肌梗死高危患者曲線下面積（AUC）分別為0.743，0.808，0.897（P＜0.05）。詳見表6 和圖1。采用Logistic 回歸分析，通過回歸系數擬合上述3 項指標聯合數據的計算模型，ROC曲線顯示，3項聯合預測的AUC為0.928，高于各指標單項檢測結果，預測價值較高。

圖1 GRP78，HSP47，miR-126診斷急性心肌梗死高危患者的ROC曲線Fig.1 ROC curves of GRP78，HSP47，and miR-126 in the diagnosis of high-risk patients with acute myocardial infarction

表6 GRP78，HSP47，miR-126診斷急性心肌梗死高危患者的預測價值Tab.6 Predictive value of GRP78，HSP47，and miR-126 in the diagnosis of high-risk patients with acute myocardial infarction

3 討論

我國每10 萬城市人口急性心肌梗死病死人數為58.69人，略低于農村的74.72人［9］。急性心肌梗死患者發病較急、預后較差，目前臨床常用心肌肌鈣蛋白等標志物進行疾病的診斷與評估，但慢性冠狀動脈疾病患者常出現假陽性結果。因此，進一步探索與急性心肌梗死病情發生、發展相關指標對后續治療方式、靶點的選擇具有臨床意義。

據報道，內質網應激與缺血再灌注損傷有緊密聯系，內質網應激介導的細胞凋亡通路可加重心肌再灌注損傷，從而影響急性心肌梗死患者預后［10］。由于急性心肌梗死患者早期可造成心肌組織缺氧、缺血，產生大量氧自由基，破壞Ca2+穩態，均能引發內質網功能障礙，由此導致內質網應激。當機體持續處于內質網應激狀態時，細胞會在其影響下出現凋亡、死亡。GRP78 是內質網應激過程中較關鍵的因子。饒蘭蘭等［11］在研究前列腺素E1通過抑制內質網應激保護心肌梗死模型大鼠的心臟時發現，心肌梗死模型大鼠GRP78 水平顯著升高，給予前列腺素E1干預可抑制內質網應激且伴隨GRP78 下降，實現對膠原的增生與心肌功能的改善。本研究中觀察組患者GRP78 水平顯著高于對照組，與LVEF，cTnI，CK - MB 均有一定聯系，且不同危險分層患者GRP78 水平存在顯著差異，表明GRP78 可能參與了急性心肌梗死的發生與發展。

HSP47是一個與膠原特異性合成有關的伴侶分子。田倪妮等［12］研究發現，健康者與急性心肌梗死患者的HSP47表達水平差異顯著，且與病變血管數目有一定聯系。本研究中觀察組患者HSP47 表達水平顯著高于對照組，且與LVEF，cTnI，CK - MB 均有一定聯系，表明HSP47 也可參與急性心肌梗死的發生與發展。推測原因，HSP47 特異性底物為膠原，在膠原蛋白分泌細胞內質網中，HSP47能與膠原結合，參與膠原的裝配、折疊等功能，病情越嚴重，HSP47表達水平越高。

miRNA 在多種疾病診斷、評估中發揮了重要作用，尤其是對心血管疾病。miR-126主要在血管內皮細胞中表達，能調節機體內皮細胞的增殖、遷移，維持功能穩定，抑制急性心肌梗死患者內皮細胞分泌的miR-126［13-15］。本研究中觀察組患者的miR - 126 相對表達顯著低于對照組，且低危組、中危組、高危組患者的miR-126呈持續降低趨勢，表明miR-126 可通過調控血管穩態參與急性心肌梗死的發生與發展。

本研究結果顯示，GRP78，HSP47，miR - 126 均與心肌梗死相關標志物LVEF，cTnI，CK - MB 具有相關性，提示GRP78，HSP47，miR - 126 與心肌梗死的發生存在聯系。ROC 曲線分析結果顯示，GRP78，HSP47，miR - 126 鑒別急性心肌梗死高危患者AUC分別為0.743，0.808，0.897，表明三者對臨床鑒別疾病危險分層有一定參考價值。將上述3 項指標納入Logistic 回歸分析，通過回歸系數擬合3 項指標聯合數據的計算模型，ROC 曲線顯示，3 項聯合預測的AUC為0.928，高于各指標單項檢測結果，預測價值較高。

綜上所述，急性心肌梗死患者血清GRP78 和HSP47存在異常高表達，miR-126存在異常低表達，且3 項指標與心功能均有一定相關性，單獨或聯合分析時對臨床鑒別的患者風險層級有參考價值。