亞臨床肝性腦病患者腸道菌群和炎癥因子水平變化及黃連素的干預作用*

徐華棟 張玉婷

肝性腦病是一種精神異常綜合征，預后不佳，病死率高，是威脅肝硬化患者生命安全的重要危險因素之一[1-2]。亞臨床肝性腦?。╯ubclinical hepatic encephalopathy，SHE）是指肝硬化患者雖沒有肝性腦病臨床表現癥狀，甚至部分患者代謝良好，可以照常工作，但系統性神經心理操作測試會提示檢查結果異常[3]。機體內腸道菌群失去平衡，腸道屏障受損，一些有害物質包括氨、內毒素等會通過破壞屏障進入人體，從而誘發肝性腦病出現。近年來也有學者認為炎癥反應是引發肝硬化相關肝性腦病發生的原因之一，炎癥因子對星形細胞生理功能的調節具有重要作用，促炎因子表達水平升高會加劇對生理功能的損害，會讓疾病治療更加復雜[4]。因此，在疾病治療時需要加強對患者腸道菌群的觀察，還需要關注機體炎癥因子表達水平的變化。針對該疾病，目前尚無特效藥，主要以肝功能調節、抗感染等治療為主。黃連素也被稱之為小檗堿，是從含有小檗堿的植物藥物黃連、黃柏等中提煉的生物堿，其不僅具有清熱解毒功效，還能調節機體腸道菌群[5-6]。鑒于此，本文分析SHE 患者腸道菌群及血清炎癥因子的變化，并探討黃連素的應用價值，具體內容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021 年3 月—2023 年2 月宜春市人民醫院收治的78 例SHE 患者作為病例組，并以同期進行健康體檢的50 名志愿者作為對照組。（1）納入標準：①入院檢查時病例組患者確診為SHE；②年齡30～65 歲，性別不限；③具備良好認知及語言表達能力；④配合完成整個療程治療。（2）排除標準：①檢查結果提示病例組疾病已發展為臨床型肝性腦病；②合并神經及精神系統疾??；③病例組對象入組治療前已經使用鎮靜劑治療。本次研究經本院醫學倫理委員會批準審核同意。研究對象及家屬對本次研究內容充分知情，并自愿簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 腸道菌群測定：無菌采集新鮮糞便約2 g，放入無菌離心管，使用脫氧核糖酸提取試劑盒（上海躍騰生物技術有限公司，KB019-100T）提取標準菌株脫氧核糖酸，測定其濃度，并計算標 準 品 聚 合 酶 鏈 反 應（polymerase chain reaction，PCR）片段拷貝數，并采取相同方法提取細菌總脫氧核糖酸，采用自行設計的引物對糞便細菌脫氧核糖酸進行熒光定量PCR 檢查，而后根據反應后的擴增曲線計算細菌拷貝數。血清炎癥因子測定：患者血液檢測前保持空腹狀態，遵循無菌操作原則抽取靜脈血3 mL，離心條件為：3 000 r/min，離心半徑5 cm，離心處理10 min 后，使用酶聯免疫吸附法檢測腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、白細胞介素-8（interleukin-8，IL-8），所有檢測試劑盒均購自上海恒源生物科技有限公司。

1.2.2 治療方法 病例組治療：在保持低鹽飲食及護肝治療基礎上，服用黃連素（生產廠家：太極集團四川綿陽制藥有限公司，批準文號：國藥準字Z51020212，規格：每片含鹽酸小檗堿30 mg）進行治療，每日3 次，每次2 片，連續治療1 個月。

1.3 觀察指標

（1）腸道菌群：病例組治療前，對比觀察兩組腸桿菌、梭菌、糞腸球菌、雙歧桿菌、乳桿菌菌落數值。（2）血清炎癥因子：病例組治療前，對比觀察兩組血清炎癥因子指標數據，包括IL-6、IL-8、TNF-α。（3）腸道菌群、炎癥因子變化：對比觀察病例組患者治療前后腸道菌群、血清炎癥因子指標變化。

1.4 統計學處理

采用SPSS 26.0 統計學軟件對研究對象腸道菌群檢測結果等數據進行統計分析。計量資料用（±s）表示，組間比較采用獨立樣本t 檢驗，組內比較采用配對t 檢驗；計數資料用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較

對照組男29 例，女21 例；年齡30～65 歲，平均（48.63±3.14）歲。病例組男45 例，女33 例；年齡30～64 歲，平均（48.64±3.28）歲；肝硬化病史1～9 年，平均（4.26±0.48）年。兩組性別、年齡比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

2.2 兩組腸道菌群數量差異比較

病例組腸桿菌、梭菌、糞腸球菌均高于對照組，雙歧桿菌、乳桿菌均低于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 兩組腸道菌群數量差異比較[lg CFU/g，（±s）]

表1 兩組腸道菌群數量差異比較[lg CFU/g，（±s）]

組別 腸桿菌 梭菌 糞腸球菌 雙歧桿菌 乳桿菌對照組（n=50） 7.05±0.16 5.75±0.16 7.15±0.13 9.17±1.46 9.46±1.28病例組（n=78） 10.25±1.26 9.78±1.26 9.12±1.48 7.26±0.43 7.53±0.49 t 值 17.841 22.469 9.376 10.863 12.033 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 兩組血清炎癥因子表達水平比較

病例組炎癥因子表達水平均高于對照組（P＜0.05），見表2。

表2 兩組血清炎癥因子表達水平比較[ng/L，（±s）]

表2 兩組血清炎癥因子表達水平比較[ng/L，（±s）]

組別 IL-6 IL-8 TNF-α對照組（n=50） 0.45±0.11 40.26±3.45 1.22±0.22病例組（n=78） 1.42±0.18 74.26±7.26 2.37±0.49 t 值 34.203 30.921 15.601 P 值 0.000 0.000 0.000

2.4 病例組患者治療前后腸道菌群、炎癥因子比較

治療后病例組患者腸桿菌、梭菌、糞腸球菌均低于治療前，雙歧桿菌、乳桿菌均高于治療前，炎癥因子表達水平均低于治療前（P＜0.05），見表3。

表3 病例組78例患者治療前后腸道菌群、炎癥因子水平比較（±s）

表3 病例組78例患者治療前后腸道菌群、炎癥因子水平比較（±s）

TNF-α（ng/L）治療前 10.25±1.26 9.78±1.26 9.12±1.48 7.26±0.43 7.53±0.49 1.42±0.18 74.26±7.26 2.37±0.49治療后 7.76±0.75 7.26±0.45 7.45±0.49 9.19±0.53 9.08±1.15 1.33±0.28 50.16±4.11 1.51±0.16 t 值 14.997 16.634 9.461 24.975 10.951 2.388 25.011 14.735 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.018 0.000 0.000時間 腸桿菌（lg CFU/g）梭菌（lg CFU/g）糞腸球菌（lg CFU/g）雙歧桿菌（lg CFU/g）乳桿菌（lg CFU/g）IL-6（ng/L）IL-8（ng/L）

3 討論

SHE 發病機制較為復雜，其中以氨中毒最為常見。因患者肝臟不能正常運作，會導致大量有害物質不能在肝臟完成解毒作用，且肝臟受病情影響無法合成機體所需大量營養物質，會出現一系列不同程度精神異常癥狀，需要加強對SHE 的重視，并選擇有效治療方式積極改善患者預后[7-8]。

一般情況下，人體腸道菌群處于平衡狀態，且數量相對穩定，能刺激腸蠕動，維持腸道生物屏障穩定，在疾病治療、預防方面有重要作用[9-10]。不少研究提到，罹患肝臟疾病患者會有不同程度腸道菌群紊亂現象，分析原因主要是因肝臟結構與腸道起源于同一胚層，存在一定功能上的聯系。當肝臟發生病變時，受門靜脈高壓影響，會導致患者腸管壁呈充血水腫狀態，患者腸黏膜屏障功能進一步受損，腸道清除異物能力下降，會導致諸多致病菌大量繁殖，腸道微生態失去平衡，進一步引起腸源性毒素產生增多[11-12]。本研究結果指出，病例組腸桿菌、梭菌、糞腸球菌均高于對照組，雙歧桿菌、乳桿菌均低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05），可見SHE 患者存在腸道菌群失衡情況。因SHE 患者腸道中致病菌較多，特別是革蘭氏陰性菌大量繁殖，會增加腸源性氨的含量，雙歧桿菌、乳桿菌明顯減少，腸腔內pH 值升高，氨排出過程受阻，而肝臟對氨清除減少，會導致其透過血腦屏障進入中樞神經系統與谷氨酸結合，引發中樞神經系統細胞死亡，引起肝性腦病發生[13-14]。因此臨床在加強對SHE 患者降低血氨水平治療外還需要調節患者的腸道功能，調節腸道菌群。

SHE 患者消化道淤血水腫現象嚴重，會增加腸道黏膜的通透性，再加上SHE 患者腸道黏膜屏障功能受損嚴重，清除致病菌能力顯著降低，會為致病菌快速繁殖提供機會，進而增加內毒素血癥發生風險，肝細胞受炎癥刺激發生異位，進入門靜脈，導致肝功能損傷加重，并極易形成惡性循環，因此血清炎癥因子與SHE 的發生密切相關[15-16]。本研究結果表示，病例組IL-6、IL-8、TNF-α 均高于對照組（P＜0.05）。SHE 的發生會形成內毒素血癥，刺激肝細胞分泌大量炎癥因子，TNF-α、IL-6、IL-8表達水平升高會引起基質金屬蛋白酶1 升高，破壞血腦屏障，還會誘導T 細胞、自然殺傷細胞產生γ干擾素，破壞中樞神經系統小膠質細胞，造成神經元損傷，誘發免疫系統細胞毒性作用，加重病情[17]。

當前針對該疾病主要以對癥支持治療為主。黃連素是從中藥黃連、黃柏中提取的異喹啉類生物堿，可有效抑制細菌核酸合成，能夠發揮抑菌作用[18]。此外其在腸道菌群中還具有調控作用，能有效影響有益菌與病原菌生長繁殖，可抑制大腸桿菌中色氨酸酶活性，促使菌體內可利用的色氨酸減少，最終降低大腸桿菌活力，促使患者腸道菌群得到改善，而腸道益生菌生長能夠改善SHE 患者肝功能、腸道菌群，阻止氨等有害物質的合成釋放[19-20]。因此給予患者黃連素治療，可到達較為顯著的臨床效果，有利于修復受損黏膜，從而有助于改善患者的生理功能。

本次研究存在一定不足，如研究樣本數量少，缺乏黃連素在SHE 中大量作用機制報道論述，今后將加以改進，旨在控制SHE 病情進展，改善患者預后。

綜上所述，SHE 患者診治過程中發現，患者存在腸道菌群紊亂及血清炎癥因子水平上升情況，予以患者黃連素治療能促使病情轉歸。