p53 和B 細胞淋巴瘤/白血病-2 蛋白在彌漫性大B 細胞淋巴瘤中的表達及與預后的關系

董娜，王曉娟，劉世瓊

河南科技大學臨床醫學院/河南科技大學第一附屬醫院1病理科，2創傷外科，河南 洛陽 471000

彌漫性大B 細胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL）屬于非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma，NHL）的一種，其病因及發病機制較為復雜，目前臨床尚未完全明確，考慮與遺傳有關[1]。化療是臨床用于治療該病的主要方法，但數據顯示，通過化療緩解病情的患者不超過60%，且化療后患者出現復發和轉移的可能性較大，預后欠佳[2]。目前臨床主要根據免疫組化法將DLBCL 分為生發中心（germinal center，GCB）型和非生發中心（non-germinal center，non-GCB）型兩種，相關研究發現GCB 型DLBCL 患者的預后相較于non-GCB 型患者更好[3]，但也有大量與之相反結論的研究。研究發現，p53 和B 細胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2，Bcl-2）蛋白在DLBCL 患者中表達異常，可能與DLBCL 的發生、發展和預后存在一定關聯[4]。基于此，本研究探討p53 和Bcl-2 蛋白在DLBCL 中的表達及與預后的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017 年1 月至2021 年1 月河南科技大學第一附屬醫院收治的DLBCL 患者的病歷資料。納入標準：符合《WHO 造血與淋巴組織腫瘤分類（2016）》[5]中的相關診斷標準；病理檢查確診為DLBCL；臨床資料完整；體重指數（body mass index，BMI）≥20 kg/m2；接受潑尼松+多柔比星+環磷酰胺+長春新堿（CHOP）方案治療。排除標準：合并免疫性或代謝性疾病；合并其他惡性腫瘤；患有嚴重器質性疾病；存在化療禁忌證。根據納入、排除標準，共納入72 例DLBCL 患者，其中，男性39 例，女性33 例；年齡18～80 歲，平均（45.54±4.65）歲；BMI 為20～28 kg/m2，平均（24.54±1.21）kg/m2；臨床分期：Ⅰ期22 例，Ⅱ期20 例，Ⅲ期16 例，Ⅳ期14例；Hans 分型：GCB 型32 例，non-GCB 型40 例；血清乳酸脫氫酶（lactic dehydrogenase，LDH）水平：正常33 例，升高39 例；無結外累及30 例，有結外累及42 例；有骨髓侵犯40 例，無骨髓侵犯32 例；原發部位：淋巴結內34 例，淋巴結外38 例。本研究經醫院倫理委員會批準通過，所有患者均知情同意。

1.2 檢測方法

切片前蠟塊預冷，選擇合適刀片，切片時注意組織層次、紋理、纖維、肌肉等方向與切片刀平行，切片大小約2 cm，厚度不超過3 mm，置于4%甲醛緩沖溶液中固定，常規脫水后進行石蠟包埋，蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，根據HE 切片選擇典型病灶區域，制成3 μm 厚切片，采用鼠抗Bcl-2、鼠抗p53 單克隆抗體和BenchMark XT 全自動免疫組化染色機進行免疫組化染色，嚴格按照說明書進行相關操作。

免疫組化結果判讀：于顯微鏡下（×400）隨機對每張切片的5 個視野進行觀察，計數陽性細胞，并對單位面積內陽性細胞比例進行計算。Bcl-2 定位于細胞質，界值為50%；p53 定位于細胞核，以50%為界值。

1.3 隨訪

兩組患者均通過電話或微信等方式進行隨訪，隨訪時間持續至患者死亡。

1.4 統計學方法

采用SPSS 20.0 統計軟件進行數據分析，計數資料以例數及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；符合正態分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示；影響因素分析采用Cox 回歸分析；以P﹤0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Bcl-2、p53 的表達情況

DLBCL 組織中Bcl-2 陽性表達率為47.22%（34/72），p53 陽性表達率為52.78%（38/72）。

2.2 不同臨床特征DLBCL 患者DLBCL 組織中p53、Bcl-2 表達情況的比較

不同年齡、性別、BMI、原發部位、LDH、結外累及情況DLBCL 患者的DLBCL 組織中Bcl-2 陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P﹥0.05）；non-GCB 型、有骨髓侵犯、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期DLBCL患者的DLBCL 組織中Bcl-2 陽性表達率均明顯高于GCB 型、無骨髓侵犯及臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期患者，差異均有統計學意義（P﹤0.01）。不同年齡、性別、BMI、原發部位、結外累及情況、骨髓侵犯情況DLBCL 患者的DLBCL 組織中p53 陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P﹥0.05）；non-GCB 型、LDH 水平升高、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期DLBCL 患者DLBCL 組織中p53 陽性表達率均明顯高于GCB型、LDH 正常及臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期患者，差異均有統計學意義（P﹤0.01）。（表1）

表1 不同臨床特征DLBCL 患者DLBCL 組織中p53、Bcl-2 表達情況的比較

2.3 不同Bcl-2、p53 表達情況DLBCL 患者預后的比較

不同Bcl-2、p53 表達情況的DLBCL 患者總生存率（overall survival，OS）和無進展生存率（progression-free survival，PFS）比較，差異均有統計學意義（P﹤0.01）。（表2）

表2 不同Bcl-2、p53 表達情況DLBCL 患者預后的比較

2.4 DLBCL患者預后影響因素的Cox回歸分析

Cox回歸分析結果顯示，p53陽性表達為DLBCL患者OS、PFS 的危險因素（P﹤0.05）。（表3）

表3 DLBCL患者預后影響因素的Cox回歸分析

3 討論

DLBCL 屬于臨床常見的高度異質性惡性腫瘤，目前有大量研究認為該病的發生可能與遺傳學和分子水平異質性有關，且DLBCL 的不同Hans分型均存在高度異質性，研究發現其異質性與臨床治療效果及預后均存在關聯[6]。目前臨床主要通過免疫組化法將其分為GCB 型和non-GCB 型，但免疫組化結果在評估DLBCL 預后方面存在較大的爭議[7]。因此，分析與DLBCL 分型及預后相關的指標，對其治療方案的選擇及預后的判斷可發揮至關重要的作用，且目前國內外對這方面的研究也在不斷增多[8-9]。

近幾年臨床對于Bcl-2、p53 蛋白在預后評估中的研究較多，但結論未統一[10]。Bcl-2是一種腫瘤凋亡抑制基因，具有調節DLBCL 細胞對免疫療法和化療敏感性的作用，相關數據顯示，30%～60%的DLBCL 患者Bcl-2 呈現高表達的狀態[11-12]。p53 蛋白屬于腫瘤蛋白p53（tumor protein p53，TP53）基因編碼蛋白產物之一，而TP53屬于腫瘤抑制基因的一種，能將損害DNA 的細胞殺滅，從而發揮出抑制腫瘤的作用[13-14]。p53基因的異常形態多以基因突變、雙微體或單核苷酸多態性為主，與DLBCL 的發病機制及預后均存在一定關聯[15-16]。本研究發現，Bcl-2、p53 表達均與DLBCL 分型存在關聯，說明根據Bcl-2、p53 表達情況可對DLBCL 的分型進行預測，一定程度上為后續治療提供了良好的依據。但吳晨陽等[17]的研究發現，p53、c-Myc 表達與DLBCL 患者的臨床特征均不具有相關性，與本研究不一致，分析原因可能與患者地域差異、不同治療方法及不同p53 界值有關，建議后續研究采集相同治療方案、相同p53 界值及處于同一地域的患者進行分析。本研究發現，p53 是DLBCL 患者OS、PFS 的危險因素。閆文麗等[18]在Cox 回歸模型中納入myc、Bcl-2、p53、myc/Bcl-2、myc/p53 及治療方案6 個獨立因素后也發現，p53 是患者OS、PFS 的危險因素，該研究結果進一步驗證了本研究結果的可靠性。提示p53 表達與DLBCL 預后存在關聯，其表達升高可提示預后不良。分析主要是因為p53作為一種腫瘤抑制基因，一旦出現失活的情況，其腫瘤抑制功能將會缺失，導致腫瘤細胞大量增殖，加快腫瘤的進展速度，進而加大了預后不良的可能性[19-20]。

本研究不足之處：①單中心采樣，樣本量少；②僅進行回顧性分析。建議臨床在后續研究中于多中心進行采樣，并加大樣本量，同時加強前瞻性分析，才能進一步提升研究結果的可信度。

綜上所述，Bcl-2、p53 表達與DLBCL 患者的臨床特征存在一定關聯，且p53 蛋白可對DLBCL 患者的預后進行預測，有助于為后續治療提供科學的參考依據，以便臨床醫師根據評估結果為患者制訂針對性的治療方案，進而達到提高患者臨床治療效果及改善預后的目的。