紫外分光光度法對藥物中人參皂苷Rb1含量的測定

蔣麗萍,孫月新,陳波,干鈺珅

(浙江海運職業技術學院,浙江 舟山 316021)

人參皂苷是一種固醇類的化合物,主要存在于一些中草藥中,這些中草藥中有效活性成分人參皂苷類化合物種類多種多樣,其中人參皂苷Rb1 是多種人參皂苷中較豐富和較有生物活性的大分子化合物,研究表明人參皂苷Rb1具有調節血糖、消炎、抗氧化和保護神經組織等多種藥理活性,具有增強膽堿系統的功能,增加乙酰膽堿的合成和釋放以及改善記憶力作用。它屬于三萜皂苷類化合物,主要分布于五加科植物人參、三七、西洋參等中草藥中,具有抗衰老、抗腦缺血損傷、促進周圍神經細胞再生、改善學習記憶功能、抗腫瘤、降血糖和抗應激等作用[1],尤其是在神經系統、心血管系統、免疫系統以及抗腫瘤、抗肝損傷等方面具有很好的藥用價值[2-3]。除了藥用,近年來人參用在護膚保養方面的效果尤為突出,多位學者研究證實人參中的多種活性成分對皮膚有非常好的保護和保養作用。人參皂苷對自由基所造成的細胞組織代謝反應有著延長和減少的作用,并且可以改善細胞、組織、器官和機體功能,幫助皮膚保持活力,延緩衰老。對皮膚美白、抗氧化、清除自由基、防輻射都有著非常好的作用[4-5]。

目前隨著科技的發展,人參皂苷檢測方法越來越多,也越來越先進,常見的人參皂苷測定方法有很多[6],張俏等人采用薄層色譜法[7-9]對復視明膠囊中人參皂苷Rb1等進行定性鑒別與含量,薄層色譜斑點顯色清晰,陰性對照無干擾;楊艷文等利用高效液相色譜法[10-14]對存在于人參制劑中的20種人參皂苷進行含量測定;李佳等用膠束電動毛細管色譜法[15-16]在214 nm波長處對西洋參中所含的人參皂苷Rg1、Re及Rb1進行分離測定;石婧婧等采用超快速液相色譜質譜連用[17-18]對處于不同貯藏條件下的紅參中人參皂苷Rc、Rb2、Rb1、Rd、Re、Rg1 等多種皂苷類成分同時進行含量測定;孟軍等采用MS和核磁共振譜法[19]對人參葉里分離得到的 5個未知微量化合物進行結構鑒定;杜金鳳等用比色法[20]對人參保健飲料中人參總皂苷含量進行了測定。本試驗選用紫外可見分光光度法測定人參皂苷Rb1的含量,紫外可見分光光度法有簡單易操作和檢測快速實用等多種優點[21],應用范圍非常廣泛,是日常常用的快速分析和檢測方法之一。

1 試藥與儀器

人參皂苷Rb1標準品(成都曼斯特生物科技有限公司),參苓白術丸(山東孔圣堂制藥有限公司),實驗所用的試劑均為分析純,水為超純水。

紫外可見分光光度計(北京普西T6),去離子純水機(力康Heal Force Easy15),離心機(賽默飛ST16),分析天平(奧豪斯 PR124ZH/E)等。

2 方法

2.1 標準品溶液的制備

本試驗考察了超純水和多種有機溶劑對人參皂苷Rb1溶解度和吸光度的影響,人參皂苷Rb1在水、甲醇和乙醇中溶解度較大,吸光度在超純水中比較大,且安全性較好,也符合日常使用人參皂苷的生活習慣,最終選擇超純水做為溶劑。

在分析天平上準確稱取0.200 0 g人參皂苷Rb1標準品,用超純水配置成50.00 mL溶液。然后準確移取適量該溶液,用超純水配置成800.00 μg/ml的溶液作為標準溶液。

2.2 測定波長的選擇

將配置好的人參皂苷Rb1標準溶液稀釋至適宜的濃度,用紫外可見分光光度計在190～250 nm波長范圍內對該溶液的吸光度進行測量,檢測結果如圖1所示,待測物標準品在波長λ=200 nm處有最大吸收值,因此本試驗選用200 nm為人參皂苷Rb1的紫外檢測波長。

圖1 人參皂苷Rb1標準品紫外吸收光譜圖

2.3 標準曲線的繪制

從人參皂苷Rb1標準溶液中分別移取不同量的溶液進行稀釋,分別得到溶液濃度為8.00,40.00,80.00,160.00,320.00,480.00 μg/mL的人參皂苷Rb1溶液。然后用紫外可見分光光度計對其吸光度進行了測定,并繪制標準曲線,試驗結果如圖2所示,人參皂苷Rb1含量在8.00～480.00 μg/mL時吸光度與濃度呈成較好的線性關系。該線性方程為A=0.003 93c+0.033 19,R=0.998 7。

圖2 人參皂苷Rb1標準曲線

3 結果與分析

3.1 藥品中人參皂苷的測定

取含有人參皂苷Rb1的藥物適量,用研缽將其研磨,準確稱取適當的質量,用超純水在超聲破碎儀中超聲提取數小時,然后定容至一定體積,再用離心機離心,經過濾器過濾后,用紫外分光光度計于200 nm處,測定其吸光度。通過試驗對藥品參苓白術丸中人參皂苷Rb1進行檢測(表1),平行測定6次,人參皂苷Rb1的平均含量為24.40 mg/g,相對標準偏差為0.45%。

表1 藥品中人參皂苷的含量

3.2 加樣回收率實驗

如表2對試樣進行了加標回收試驗,測得回收率在95.5%～102.0%之間,此方法的回收率良好,適用于對人參皂苷Rb1的檢測。

表2 回收率試驗結果

4 結論

通過試驗可知,人參皂苷Rb1在波長為200 nm 處吸光度與其濃度呈良好的線性關系,樣品的加標回收率在95.5%～102.0%之間,此方法回收率較好,操作簡單方便快速,所用試劑綠色環保,是檢測人參皂苷Rb1簡單方便快速的優良方法之一。