骨質(zhì)疏松癥環(huán)境下髕下脂肪墊源間充質(zhì)干細(xì)胞成骨成脂分化及淫羊藿苷的干預(yù)機(jī)制

葉梓軒， 秦佳佳， 劉海全

[1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院，廣東廣州 510006；2.暨南大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，廣東廣州 510632；3.廣州中醫(yī)藥大學(xué)惠州醫(yī)院（惠州市中醫(yī)醫(yī)院），廣東惠州 516001]

目前，隨著老齡化的加劇，骨質(zhì)疏松癥（osteoporosis，OP）的治療逐漸成為研究熱點(diǎn)。唑來膦酸、特立帕肽、地舒單抗等藥物[1]在治療OP方面雖已取得了顯著療效，但其副作用及藥物依賴性仍是OP 治療過程中需要解決的問題。自從Zuk 等[2]發(fā)現(xiàn)脂肪源性干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs），諸多研究證明，其在傷口愈合[3-4]、促進(jìn)周圍神經(jīng)生長[5]、治療骨關(guān)節(jié)炎[6]等方面均可發(fā)揮巨大作用。研究者們隨后對其獲取部位、方式等[7-8]進(jìn)行了不斷的探索。另外，中醫(yī)藥因在提高骨質(zhì)量方面具有療效顯著、副作用小的優(yōu)勢，被廣泛應(yīng)用于臨床OP 的治療[9]。淫羊藿為小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornuMaxim.、箭葉淫羊藿Epimedium sagittatum（Sieb.et Zucc.）Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescensMaxim.或朝鮮淫羊藿Epimedium koreanumNakai 的干燥葉，具有補(bǔ)腎壯陽、祛風(fēng)濕、強(qiáng)筋骨之功效，常被用于治療腎陽虛衰、筋骨痿軟、風(fēng)濕痹痛等證[10]。而淫羊藿苷（icariin，ICA）作為淫羊藿的主要生物活性物質(zhì)之一，具有調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、改善心腦血管功能、抗腫瘤等多重藥理作用[11]。已有諸多研究證明，淫羊藿苷可有效促進(jìn)骨髓干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化[12-14]。本實(shí)驗(yàn)擬通過取骨質(zhì)疏松癥患者脂肪組織，獲得培養(yǎng)髕下脂肪墊-脂肪源性干細(xì)胞（infrapatellar fat pad adipose- derived stem cells，IPFP-ADSCs），探究OP 環(huán)境下ADSCs 的成骨成脂分化趨勢及淫羊藿苷的干預(yù)機(jī)制，以期為淫羊藿苷協(xié)同ADSCs 臨床治療OP 提供相關(guān)理論支持，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑淫羊藿苷（分子式C33H40O15，分子量676.66，純度99%，中國食品藥品檢定研究院，批號：110737-201516）。Ⅰ型膠原酶（美國Sigma-Aldrich 公司）；DMEM 培養(yǎng)基（美國Hyclone公司）；胎牛血清（美國Invitrogen 公司）；人單克隆抗體CD34 PE（美國Biolegend 公司）；人單克隆抗體CD90（Thy1）FITC（美國Biolegend公司）；成脂分化試劑盒（美國Gibco 公司）；成骨分化試劑盒（美國Gibco 公司）；Taq 聚合酶（日本TaKaRa 公司）；miScript 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（德國Qiagen 公司）；堿性磷酸酶（ALP）抗體、Runt 相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（Runx2）抗體、過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）抗體（美國Boster公司）。

1.2 儀器HERAcell150i 細(xì)胞恒溫培養(yǎng)箱（美國Thermo Scientific 公司）；CKX41 倒置光學(xué)顯微鏡（日本Olympus 株式會社）；FACSDiva 流式細(xì)胞儀（美國BD 公司）；Alpha 個人型凝膠成像系統(tǒng)red（美國ProteinSimple 公司）；CFX96 熒光定量PCR儀、Bio-Rad Power PAC 200 電泳儀（美國Bio-Rad公司）。

1.3 IPFP-ADSCs的分離、培養(yǎng)和傳代

1.3.1 脂肪組織來源 所有OP 患者均來自廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院關(guān)節(jié)中心，納入標(biāo)準(zhǔn)[15-16]：①女性，年齡在45 歲以上，80 歲以下；②自上次月經(jīng)停經(jīng)以來至少36 個月；③患者腰椎雙能X 線檢查，骨密度低于正常值2.5個標(biāo)準(zhǔn)差以上（T 值＜-2.5）；④行人工全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)的患者；⑤患者了解本次研究內(nèi)容并簽署知情同意書。本研究方案經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院倫理委員會審核通過（批號：PJ-KY-20220523-008）。

1.3.2 髕下脂肪墊的獲取 剔除髕下脂肪組織內(nèi)的血管、滑膜及其他非脂肪組織，剪碎至約1 mm3大小。PBS 清洗后加入0.075%I 型膠原酶，振蕩消化1 h。加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基（低糖DMEM 培養(yǎng)基，10%胎牛血清，100 U/mL 青霉素，100 U/mL 鏈霉素，pH7.2）中和消化液并稀釋細(xì)胞，以140×g離心10 min，棄上清和殘留脂肪，加基礎(chǔ)培養(yǎng)液重懸后將細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿內(nèi)，于37 ℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2 ～3 d 視情況進(jìn)行換液。待細(xì)胞匯集率達(dá)到約80%以上時，通過0.25%胰酶消化并進(jìn)行傳代培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。

1.3.3 流式鑒定 取第3 代ADSCs，經(jīng)PBS 清洗后，取細(xì)胞濃度為1×107個/mL的細(xì)胞懸液100 μL，分別加入CD34 抗體、CD90 抗體，空白對照組不加抗體。室溫下，避光孵育20 min。PBS 清洗，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞各表面標(biāo)志物的表達(dá)情況。

1.3.4 成骨、成脂能力檢測 將第3 代ADSCs 對數(shù)生長期的融合度達(dá)到60%～80%時分為2 組，吸棄培養(yǎng)基，加胰蛋白酶使細(xì)胞脫落，離心后接種于培養(yǎng)皿中，于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)2 h 至4 d，分別換成成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基和成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每3 ～4 d 換液1 次。于誘導(dǎo)的第7、14、21 天觀察干細(xì)胞分化情況。成骨分化組進(jìn)行茜素紅37 ℃染色30 min，成脂分化組進(jìn)行油紅O 37 ℃染色30 min，PBS 清洗3 次后進(jìn)行顯微鏡下觀察。

1.4 淫羊藿苷誘導(dǎo)ADSCs 將第3代ADSCs以1 ×104個/孔的密度接入6孔板，并分為3組，即對照組、成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基組、成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基+100 μmol/L淫羊藿苷組。培養(yǎng)21 d后，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.5 觀察指標(biāo)與方法

1.5.1 實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）法檢測細(xì)胞ALP、Runx2 及PPARγ mRNA 的表達(dá) 采用TRIzol 法提取各組細(xì)胞總RNA，嚴(yán)格遵照反轉(zhuǎn)錄試劑盒的說明，將總RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，設(shè)計堿性磷酸酶（ALP）、Runt 相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（Runx2）、過氧化物酶體增殖體激動受體γ（PPARγ）以及內(nèi)參甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）的引物序列（見表1）。擴(kuò)增程序?yàn)椋?4 ℃、3 min，循環(huán)1 次；94 ℃、30 s，60 ℃、30 s，72 ℃、30 s，循環(huán)30次；72 ℃、10 min 循環(huán)1 次。擴(kuò)增結(jié)束后，用2-△△CT法計算目的基因相對表達(dá)量，并進(jìn)行分析。

表1 PCR引物序列Table 1 Primer sequences of PCR

1.5.2 Western Blot 法檢測細(xì)胞Runx2、ALP 及PPARγ 蛋白表達(dá) 取各組的IPFP-ADSCs，用PBS清洗2次，加全蛋白裂解液進(jìn)行裂解，提取總蛋白并定量。10%SDS-PAGE 電泳后，進(jìn)行轉(zhuǎn)膜、封閉，加入Runx2、ALP 及PPARγ一抗（1∶3 000）4 ℃搖床孵育過夜。次日，用TBST 洗膜，加二抗（1∶6 000），室溫孵育2 h，洗膜后ECL 顯色，拍攝蛋白條帶，以ImageJ 軟件進(jìn)行灰度定量分析。以α微管蛋白（α-Tubulin）為內(nèi)參。

1.6 統(tǒng)計方法采用SPSS 25.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，以GraphPad Prism 8.0 軟件繪制相關(guān)統(tǒng)計圖。實(shí)驗(yàn)計量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組之間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IPFP-ADSCs 形態(tài)觀察與鑒定倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞，原代IPFP-ADSCs 培養(yǎng)至第5 天，細(xì)胞貼壁生長，并逐漸變成長梭形生長，清晰可見較大的細(xì)胞核，見圖1-A。傳至第3 代后，可見ADSCs 呈長梭型或多邊形，增殖速度較快，密集生長，呈旋渦狀排列，見圖1-B。流式細(xì)胞技術(shù)檢測第3 代ADSCs 的表面標(biāo)志物CD34 和CD90 表達(dá)，結(jié)果顯示，CD34 的表達(dá)率為0.23%，CD90 的表達(dá)率為91.73%，見圖2。由此說明，成功從OP 患者的髕下脂肪墊中分離得到ADSCs。

圖1 鏡下觀察IPFP-ADSCs形態(tài)（10×20）Figure 1 Observation of morphological features of IPFP-ADSCs under microscope（10×20）

圖2 流式細(xì)胞技術(shù)檢測IPFP-ADSCs表面標(biāo)志物CD34和CD90Figure 2 Detection of surface markers CD34 and CD90 on IPFP-ADSCs by flow cytometry

2.2 IPFP-ADSCs成骨分化能力鑒定第3 代IPFP-ADSCs 加入成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基后，分別在第7、14、21 天進(jìn)行茜素紅染色，光鏡下觀察。結(jié)果顯示：在成骨誘導(dǎo)第7 天時僅可見少量鈣化點(diǎn)出現(xiàn)，見圖3-a；誘導(dǎo)第14天，鈣化點(diǎn)較前增大，并有部分鈣化點(diǎn)被染成鮮紅色，見圖3-b；誘導(dǎo)第21 天時，可見大面積鮮紅色細(xì)鈣化斑出現(xiàn)，見圖3-c。由此可見，源自O(shè)P 患者的IPFP-ADSCs 可被誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞。

圖3 成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后的IPFP-ADSCs（茜素紅染色，10×20）Figure 3 IPFP-ADSCs after osteogenic induction（alizarin red staining，10×20）

2.3 IPFP-ADSCs 成脂分化能力鑒定第3 代IPFP-ADSCs 加入成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基后，分別在第7、14、21 天進(jìn)行油紅O 染色并鏡下觀察。結(jié)果顯示：成脂誘導(dǎo)第7 天時可見有部分脂滴出現(xiàn)，見圖4-a；誘導(dǎo)第14天，細(xì)胞團(tuán)較前增大，并有部分細(xì)胞內(nèi)呈現(xiàn)紅色脂滴，見圖4-b；誘導(dǎo)第21 天，可見細(xì)胞團(tuán)內(nèi)含有大量深紅色脂滴，見圖4-c。由此可見，源自O(shè)P 患者的IPFP-ADSCs 可被誘導(dǎo)分化為成脂細(xì)胞。

圖4 成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)后的IPFP-ADSCs（油紅O染色，10×20）Figure 4 IPFP-ADSCs after adipogenic induction（oil red O staining，10×20）

2.4 各組細(xì)胞Runx2、ALP 和PPARγ 的mRNA表達(dá)比較表2 結(jié)果顯示：與空白對照組比較，Runx2與ALP mRNA 在單純成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基組和成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基+100 μmol/L 淫羊藿苷組內(nèi)的表達(dá)均上升（P＜0.01），且成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基+100 μmol/L 淫羊藿苷組內(nèi)Runx2與ALP mRNA表達(dá)水平顯著高于單純成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基組（P＜0.01）。而PPARγ mRNA在空白對照組內(nèi)的表達(dá)顯著高于其在單純成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基組和成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基+100 μmol/L 淫羊藿苷組內(nèi)的表達(dá)（P＜0.01），且成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基+100 μmol/L 淫羊藿苷組內(nèi)PPARγ mRNA 的表達(dá)顯著低于成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基組（P＜0.01）。

表2 各組細(xì)胞中Runx2、ALP及PPARγ 的mRNA相對表達(dá)量比較Table 2 Comparison of the relative mRNA expressions of Runx2，ALP and PPARγ among each group of cells（±s；n=3）

表2 各組細(xì)胞中Runx2、ALP及PPARγ 的mRNA相對表達(dá)量比較Table 2 Comparison of the relative mRNA expressions of Runx2，ALP and PPARγ among each group of cells（±s；n=3）

注：①P＜0.01，與空白對照組比較；②P＜0.01，與成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基組比較

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2.5 各組細(xì)胞Runx2、ALP 和PPARγ 的蛋白表達(dá)比較表3、圖5 結(jié)果顯示：與空白對照組比較，成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基組和成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基+100 μmol/L淫羊藿苷組中Runx2 與ALP 蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.01），且成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基+100 μmol/L 淫羊藿苷組蛋白表達(dá)水平高于成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基組（P＜0.01）。相反，與空白對照組比較，PPARγ 蛋白表達(dá)水平在該兩組均降低（P＜0.01），且成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基+100μmol/L 淫羊藿苷組PPARγ 蛋白表達(dá)水平低于成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基組（P＜0.01）。

圖5 Runx2、ALP及PPARγ蛋白的Western Blot結(jié)果Figure 5 Western Blot results of Runx2，ALP and PPARγ proteins

表3 各組細(xì)胞Runx2、ALP和PPARγ的蛋白相對表達(dá)量比較Table 3 Comparison of the relative protein expressions of Runx2，ALP and PPARγ among each group of cells（±s；n=3）

表3 各組細(xì)胞Runx2、ALP和PPARγ的蛋白相對表達(dá)量比較Table 3 Comparison of the relative protein expressions of Runx2，ALP and PPARγ among each group of cells（±s；n=3）

注：①P＜0.01，與空白對照組比較；②P＜0.01，與成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基組比較

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3 討論

作為人體主要干細(xì)胞之一的脂肪源性干細(xì)胞（ADSCs），在特定培養(yǎng)條件的誘導(dǎo)下，同其他來源的干細(xì)胞一樣具有可以向成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、成脂細(xì)胞等方向分化的能力。與骨髓和臍帶血等來源的間充質(zhì)干細(xì)胞相比，ADSCs 不僅具有單位體積獲取量大，且分離過程簡單等諸多優(yōu)點(diǎn)[17]，還具有較強(qiáng)的增殖能力和較弱的免疫排斥反應(yīng)，也是自體或者異體干細(xì)胞移植過程中良好的種子細(xì)胞[18]。本研究將ADSCs 作為研究對象。ADSCs 臨床常用的獲取部位包括腹部、大腿、上肢及腰部等，臨床常用的脂肪組織采集有多種方式，如吸脂手術(shù)、直接切除、局部穿刺等技術(shù)直接獲取[19-20]。在取材過程中供體的年齡、性別、部位、取材方式以及體質(zhì)量指數(shù)（BMI）等均是影響所獲取的ADSCs 數(shù)量、質(zhì)量、增殖和分化的重要因素[21-23]。本研究采用直接切除髕下脂肪墊的方式，并盡量控制供體年齡、BMI 指數(shù)相近，性別相同，僅存在是否患有骨質(zhì)疏松癥這唯一變量來減少不利因素對本實(shí)驗(yàn)的影響。

髕下脂肪墊（IPFP）作為ADSCs 的重要儲存區(qū)，可以在多種膝關(guān)節(jié)手術(shù)中較容易地獲得，如全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)、膝關(guān)節(jié)鏡手術(shù)等。在此類手術(shù)中為充分暴露術(shù)野，均會去除部分髕下脂肪墊，但不會影響手術(shù)正常進(jìn)程。雖然部分研究認(rèn)為在人工全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)中去除髕下脂肪墊可能會增加其術(shù)后的疼痛[24-25]，但仍有研究認(rèn)為在人工全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)中去除髕下脂肪墊不會增加創(chuàng)傷和出血，甚至?xí)行Ц纳企x骨高度[26-27]。有研究[28-30]表明，從髕下脂肪墊分離的ADSCs 可以通過多次傳代純化顯示出穩(wěn)定的分化潛能，且具有更強(qiáng)的向成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞方向分化的能力。已有部分研究通過關(guān)節(jié)腔注射IPFP-ADSCs 的方式，改善了兔和大鼠膝關(guān)節(jié)的軟骨損傷[7，31]。還有研究應(yīng)用人IPFP-ADSCs 治療大鼠骨關(guān)節(jié)炎也取得了較好的療效[32]。

本研究從全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)切除的髕下脂肪墊中成功地分離ADSCs，并進(jìn)行傳代培養(yǎng)。ADSCs經(jīng)培養(yǎng)傳代后，呈長梭形，良好的貼壁狀態(tài)。就ADSCs 表型，國際脂肪應(yīng)用技術(shù)協(xié)會認(rèn)為經(jīng)體外培養(yǎng)的ADSCs 表型為CD31-/CD34-/CD44+/CD45-/CD73+/CD90+/CD105+[33-35]。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇CD34和CD90 指標(biāo)對ADSCs 進(jìn)行細(xì)胞表型鑒定，流式分析顯示，OP環(huán)境下的ADSCs高表達(dá)CD90，且不表達(dá)CD34，結(jié)果符合ADSCs 細(xì)胞表型特征。李聰聰?shù)萚15]研究對IPFP-ADSCs 細(xì)胞表面標(biāo)志物CD44、CD45、CD105 進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，從髕下脂肪墊分離的ADSCs 表面抗原與其他間充質(zhì)干細(xì)胞具有相似性。

在已有的相關(guān)研究中關(guān)于OP 環(huán)境對ADSCs 的成骨分化能力是否有影響方面缺乏一致性。Park等[36]研究顯示，OP 環(huán)境對ADSCs 的成骨能力無明顯影響，但可能通過調(diào)節(jié)旁分泌作用降低ADSCs的活性，影響其免疫應(yīng)答。而Wang 等[37]研究認(rèn)為，OP 環(huán)境下小鼠ADSCs 增殖能力和成骨潛能受損。Zhang 和Peng 等[38-39]也認(rèn)為，糖尿病骨質(zhì)疏松癥環(huán)境下ADSCs 成骨分化能力減弱。本研究對OP環(huán)境下ADSCs 進(jìn)行成骨誘導(dǎo)和成脂誘導(dǎo)，觀察ADSCs 分化趨勢的變化，結(jié)果顯示OP 環(huán)境下ADSCs 同樣具有向成骨細(xì)胞和成脂細(xì)胞分化的能力。本實(shí)驗(yàn)雖未進(jìn)一步探究ADSCs 在OP 環(huán)境下，其成骨分化能力是否會降低，但本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明ADSCs 在OP 環(huán)境下仍具有向成骨細(xì)胞和成脂細(xì)胞分化的能力。

淫羊藿苷對干細(xì)胞的影響已有諸多學(xué)者進(jìn)行了探索。既往通過對不同濃度淫羊藿苷干預(yù)ADSCs成骨分化的研究[40]，結(jié)果顯示濃度為100 μmol/L 的淫羊藿苷可以更好地促進(jìn)ADSCs 向成骨細(xì)胞方向分化。故本實(shí)驗(yàn)在此基礎(chǔ)上對研究方法進(jìn)行補(bǔ)充調(diào)整，直接選取濃度100 μmol/L 的淫羊藿苷加入成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基，對OP 環(huán)境下的ADSCs 進(jìn)行干預(yù)，并設(shè)置對照組和單純成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基組。在培養(yǎng)至第21 天，對干細(xì)胞成骨分化和成脂分化相關(guān)的基因蛋白進(jìn)行檢測。ALP是成骨細(xì)胞分化時分泌的一種糖蛋白酶，其主要作用是在堿性條件下被激活，可水解多種磷酸酯并轉(zhuǎn)磷酸基，是成骨細(xì)胞分化特異性因子[41]。Runx2能通過Wnt和Notch等信號通路調(diào)節(jié)骨代謝，是重要的成骨轉(zhuǎn)錄因子，是早期成骨分化的標(biāo)志物[42]。PPARγ對脂肪細(xì)胞分化和脂質(zhì)代謝有重要的調(diào)節(jié)作用，是控制間充質(zhì)干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化的關(guān)鍵基因[43]。Wei等[13]通過淫羊藿苷對BMSCs 干預(yù)的研究證明，淫羊藿苷可上調(diào)成骨相關(guān)蛋白中的Runx2、ALP 表達(dá)；劉海全等[44]應(yīng)用淫羊藿含藥血清對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥大鼠BMSCs 成脂分化進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果表明淫羊藿含藥血清可抑制成脂相關(guān)蛋白中PPARγ 的mRNA 表達(dá)，抑制BMSCs 成脂分化。因此，本研究以Runx2、ALP及PPARγ作為檢測細(xì)胞成骨和成脂分化的相關(guān)指標(biāo)，觀察淫羊藿苷對OP 環(huán)境下ADSCs成骨分化趨勢的影響，結(jié)果顯示，100 μmol/L的淫羊藿苷可顯著提高細(xì)胞內(nèi)Runx2和ALP基因及蛋白表達(dá)，可抑制PPARγ 基因及蛋白表達(dá)。表明淫羊藿苷可有效抑制OP 環(huán)境下ADSCs 向成脂細(xì)胞方向分化的趨勢，并促進(jìn)其向成骨細(xì)胞方向分化。

綜上所述，ADSCs 具有易于獲取、體內(nèi)儲量大及增殖能力強(qiáng)等優(yōu)勢，可為臨床干細(xì)胞治療疾病提供有利的基礎(chǔ)。但由于ADSCs 多向分化能力使其被臨床應(yīng)用時不能達(dá)到穩(wěn)定的趨向性分化，且OP 環(huán)境可能影響ADSCs 的分化能力，而本研究通過體外實(shí)驗(yàn)已證明，淫羊藿苷具備促進(jìn)OP 環(huán)境下IPFP-ADSCs 向成骨細(xì)胞分化以及抑制其向成脂細(xì)胞分化的能力。