厚樸酚對便秘型腸易激綜合征大鼠5-HT 通路及腸道菌群的影響

劉 暢，王 瀟，劉 芳*，張芮苑，傅超美*，付賢華，周 奇

[1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，四川 成都 611137；2.平武縣匡合厚樸種植專業(yè)合作社，四川 綿陽 622550；3.華潤三九（黃石） 藥業(yè)有限公司，湖北 黃石 435003]

腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS） 是常見的功能性胃腸道疾病，臨床多見于因胃腸蠕動障礙、腸道分泌紊亂等因素導(dǎo)致的持續(xù)性或間接性腹痛、腹脹及排便習(xí)慣、大便性狀異常癥狀［1］。便秘型腸易激綜合征（IBSC） 是其主要亞型之一，表現(xiàn)為無胃腸道器質(zhì)性病變的胃腸動力和內(nèi)臟感覺異常［2］。目前對IBS-C 的研究較少，其發(fā)病機(jī)制尚不明確。研究表明，IBS-C 的發(fā)生與5-HT 水平變化及腸道菌群都有著緊密聯(lián)系［3-4］。5-HT 是廣泛存在于大腦和消化道的重要神經(jīng)遞質(zhì)，參與調(diào)節(jié)多項(xiàng)腸道運(yùn)動和內(nèi)分泌活動，其表達(dá)異常可導(dǎo)致多種胃腸道疾病的發(fā)生［5］；而腸道菌群作為龐大復(fù)雜的微生態(tài)系統(tǒng)，其菌群組成結(jié)構(gòu)的改變也會影響產(chǎn)生胃腸道疾病［6］。

厚樸為木蘭科植物厚樸MagnoliaofficinalisRehd.et Wils.或凹葉厚樸M．officinalisRehd.et Wils.var.bilobaRehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮［7］，具下氣除滿、燥濕消痰之功，常用于治療脘痞吐瀉、食積氣滯、痰飲喘咳及腹脹便秘等［8-9］。厚樸酚作為厚樸的主要有效成分之一，現(xiàn)代研究表明，厚樸酚在促進(jìn)胃排空和腸推進(jìn)、抗腹瀉等方面都有顯著作用［10］。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，厚樸酚對胃腸道疾病的治療作用可能與5-HT 通路有關(guān)［11］。本研究建立IBS-C 大鼠模型，從5-HT 信號通路及腸道菌群角度探討厚樸酚治療IBS-C 的作用機(jī)制。

1 材料

1.1 動物 SPF 級雄性SD 大鼠，24 只，體質(zhì)量200～220 g，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司［實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號SCXK （湘） 2019-0004］，飼養(yǎng)于成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院［實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號SYXK （川） 2020-124］，環(huán)境室溫20～23 ℃，相對濕度50%，自然晝夜節(jié)律飼養(yǎng)，自由飲食飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周。

1.2 藥物與試劑 厚樸酚（純度≥98%，批號P1193536，上海阿達(dá)瑪斯試劑有限公司），取厚樸酚粉末分散于純化水中配制成4 mg／mL 的厚樸酚混懸液。5-HT、SP ELISA 試劑盒（批號78L4B82FT7、CRDEMXZ5JR，武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司）；TRIzol （批號15596018，美國Invitrogen 公司）；EvaGreen Express 2× qPCR MasterMix-No Dye、5 × All-In-One MasterMix （批號 0194844830001、G492，上海愛必夢生物科技有限公司）。

1.3 儀器 PL-203 型電子天平［梅特勒托利多（上海）儀器有限公司］；JY92-IIn 型超聲細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；Neofuge 15R 型臺式高速冷凍離心機(jī)（上海力申科學(xué)儀器有限公司）；Epoch 型酶標(biāo)檢測儀（美國BioTek 公司）；SLAN-96S 型全自動醫(yī)用PCR 分析系統(tǒng)（上海宏石醫(yī)療科技有限公司）；K2800 型核酸分析儀（北京凱奧科技發(fā)展有限公司）；FBZ2001-up-p 型標(biāo)準(zhǔn)試劑型純水儀（青島富勒姆科技有限公司）；MX-F 型渦旋混合器（美國Scilogex 公司）；KH-Ⅲ型全自動研磨儀（武漢賽維爾生物科技有限公司）；TL-420D 型水浴鍋（江蘇天力醫(yī)療器械有限公司）。

2 方法

2.1 造模、分組及給藥 大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組及厚樸酚組，每組8 只，采用冰水混合物灌胃法建立IBS-C大鼠模型，大鼠每天準(zhǔn)時(shí)灌胃給予0～4 ℃冰水混合物2 mL，造模共計(jì)14 d。造模時(shí)，每天灌胃前稱量大鼠體質(zhì)量，并記錄每組大鼠糞便粒數(shù)，觀察糞便形態(tài)硬度，檢測糞便含水量。若見大鼠糞便堅(jiān)硬、形狀縮小、含水量減少，大鼠易激惹暴躁，可認(rèn)為造模成功［12-13］。造模成功后厚樸酚組灌胃給予厚樸酚混懸液（40 mg／kg），對照組及模型組灌胃給予等量蒸餾水，每天1 次，連續(xù)12 d。

2.2 樣本收集 給藥結(jié)束后，收集大鼠糞便于滅菌凍存管中，液氮速凍后轉(zhuǎn)移至-80 ℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩４笫蠼巢唤?4 h，腹腔注射10%水合氯醛（4 mL／kg） 麻醉［14］，腹主動脈取血后處死，收集結(jié)腸于滅菌凍存管中，液氮速凍后轉(zhuǎn)移至-80 ℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 大鼠排便情況測定 每天測定糞便顆粒數(shù)及糞便含水量。收集每組大鼠灌胃24 h 后的糞便，記錄糞便顆粒數(shù)；使用電子天平稱量糞便濕重，于105 ℃烘箱中烘干糞至恒重后稱量干重，計(jì)算糞便含水率。公式為糞便含水率＝［（濕重-干重）／濕重］ ×100%。

2.4 大鼠結(jié)腸病理組織改變 取大鼠結(jié)腸組織，于10%甲醛溶液中固定，依次進(jìn)行浸泡、脫水、包埋、均勻連續(xù)切片等操作后，行常規(guī)HE 染色，封片后于高倍顯微鏡下觀察結(jié)腸組織病理變化情況。

2.5 結(jié)腸組織5-HT、SP 水平檢測 取大鼠結(jié)腸組織，按照相應(yīng)ELISA 試劑盒說明書檢測結(jié)腸組織5-HT、SP 水平。

2.6 結(jié)腸組織TPH-1、SERTmRNA 表達(dá)檢測 取大鼠結(jié)腸組織，采用TRIzol 法提取組織總RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法檢測結(jié)腸組織TPH-1、SERTmRNA 表達(dá)，根據(jù)各組CT值，運(yùn)用2-ΔΔCT法計(jì)算mRNA 相對表達(dá)量。

2.7 腸道菌群16S rRNA 基因測序分析 根據(jù)E.Z.N.A.? soil 試劑盒說明書進(jìn)行總DNA 抽提，DNA 濃度和純度利用NanoDrop2000 進(jìn)行檢測，利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA 提取質(zhì)量；用338F （5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3'） 和806R （5'-GGACTACHVGGGTWT CTAAT-3'） 引物對V3-V4 可變區(qū)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，擴(kuò)增程序?yàn)?5 ℃預(yù)變性3 min，27 個(gè)循環(huán)（95 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s），最后72 ℃延伸10 min；使用2%瓊脂糖凝膠回收PCR 產(chǎn)物，利用AxyPrep DNA Gel Extraction Kit 進(jìn)行純化，Tris-HCl 洗脫，2% 瓊脂糖電泳檢測；使用QuantiFluorTM-ST 進(jìn)行檢測定量；使用Miseq PE300 平臺進(jìn)行測序。

在QIIME2 平臺將原始序列fastq 文件進(jìn)行去噪拼接，得到了最終的特征序列表格［15］；運(yùn)用QIIME2 featureclassifier 插件將97%相似度的序列進(jìn)行OTU 聚類，并剔除所有污染性的線粒體和葉綠體序列，得到各組OTU 在微生物門、綱、目、科、屬、種分類水平下的菌群數(shù)信息；通過菌群組成分析、α 多樣性分析、β 多樣性分析等方法對糞便腸道菌群進(jìn)行解析［16］。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過SPSSAU 軟件進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以（±s） 表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 厚樸酚對IBS-C 大鼠體質(zhì)量的影響 如圖1A 所示，各組大鼠體質(zhì)量呈增長趨勢。給藥結(jié)束后，與對照組比較，模型組大鼠體質(zhì)量降低（P＜0.01）；與模型組比較，厚樸酚組大鼠體質(zhì)量略增加，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

圖1 厚樸酚對IBS-C 大鼠體質(zhì)量（A）、糞便數(shù)（B） 及糞便含水率（C） 的影響（±s，n＝8）

3.2 厚樸酚對IBS-C 大鼠糞便數(shù)及含水率的影響 大鼠糞便數(shù)及含水率直觀反應(yīng)了IBS-C 模型造模成功與否及厚樸酚給藥后的藥效。如圖1B～1C 所示，與對照組比較，給藥前后模型組大鼠糞便數(shù)及含水率均降低（P＜0.01），說明IBS-C 模型造模成功；與模型組比較，給藥后厚樸酚組大鼠糞便數(shù)及含水率均升高（P＜0.01）。

3.3 厚樸酚對IBS-C 大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)改變的影響 如圖2 所示，對照組、模型組和厚樸酚組大鼠結(jié)腸組織黏膜結(jié)構(gòu)完整，未見明顯黏膜炎癥以及淋巴細(xì)胞浸潤和間質(zhì)水腫，說明IBS-C 模型及厚樸酚給藥均未引起大鼠結(jié)腸組織炎癥反應(yīng)。

圖2 厚樸酚對IBS-C 大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)改變的影響

3.4 厚樸酚對IBS-C 大鼠結(jié)腸組織5-HT、SP 水平和TPH-1、SERTmRNA 表達(dá)的影響 如表1 所示，與對照組比較，模型組大鼠結(jié)腸組織5-HT、SP 水平升高（P＜0.05），TPH-1、SERTmRNA 表達(dá)無明顯變化（P＞0.05）；與模型組比較，厚樸酚組大鼠結(jié)腸組織5-HT、SP 水平及SERTmRNA表達(dá)均升高 （P＜0.05），TPH-1 mRNA 表達(dá)無明顯變化（P＞0.05），提示厚樸酚能通過調(diào)節(jié)5-HT 信號通路因子表達(dá)起到治療IBS-C 的作用。

表1 厚樸酚對IBS-C 大鼠結(jié)腸組織5-HT、SP 水平和TPH-1、SERT mRNA 表達(dá)的影響（±s，n＝6）

表1 厚樸酚對IBS-C 大鼠結(jié)腸組織5-HT、SP 水平和TPH-1、SERT mRNA 表達(dá)的影響（±s，n＝6）

注：與對照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別5-HT／（ng·mL-1）SP／（pg·mL-1）TPH-1 mRNASERT mRNA對照組4.00±0.9729.93±9.881.00±0.001.00±0.00模型組9.72±1.29△△51.92±13.00△0.95±0.071.06±0.08厚樸酚組15.23±2.74**74.46±9.25*0.99±0.101.43±0.51*

3.5 厚樸酚對IBS-C 大鼠腸道菌群的影響

3.5.1 共有物種分析 提取糞便樣品基因組DNA 并測序，共產(chǎn)生了1 675 718 條高質(zhì)量序列。用QIIME 軟件對原始測序數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，經(jīng)同源比對和聚類分析，共獲得6 448 個(gè)OTU。根據(jù)每組OTU 的分類結(jié)果繪制Venn 圖，如圖3 所示，所有組的共享OTU 總數(shù)為781 個(gè)，對照組特有OTU 數(shù)為1 171 個(gè)，多于模型組的987 個(gè)；經(jīng)厚樸酚給藥后，厚樸酚組有更多的特有OTU，為1 123 個(gè)。

圖3 共有物種Venn 圖

3.5.2 不同分類水平菌群豐度變化 如圖4A 所示，在門水平上，各組大鼠糞便中菌群豐度排名前十的為厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門 （Bacteroidetes）、螺旋體門（Spirochaetes）、變形菌門 （Proteobacteria）、放線菌門（Actinobacteria）、軟壁菌門（Tenericutes）、非特異性細(xì)菌門（Unspecified Bacteria）、TM7、梭菌門 （Fusobacteria）、藍(lán)藻門（Cyanobacteria）。其中，對照組豐度排名前四的細(xì)菌門為厚壁菌門（63.41%）、擬桿菌門（24.90%）、螺旋體門（8.76%）、變形菌門（1.85%）；模型組為厚壁菌門（54.07%）、擬桿菌門（26.29%）、螺旋體門（12.13%）、變形菌門（4.22%）；厚樸酚組為厚壁菌門（61.53%）、擬桿菌門 （25.30%）、螺旋體門 （7.58%）、變形菌門（4.22%）。其中對照組厚壁菌門相對豐度占比超過50%，可以認(rèn)為是優(yōu)勢菌種；而模型組厚壁菌門相對豐度占比降低（P＜0.05）；厚樸酚組厚壁菌門相對豐度占比趨于對照組。

圖4 各組門水平（A） 及科水平（B） 上的物種相對豐度柱形圖

如圖4B 所示，在科水平上，各組大鼠糞便中菌群豐度排名前十的為乳酸菌科（Lactobacillaceae）、S24_7、螺旋體科（Spirochaetaceae）、瘤胃球菌科（Ruminococcaceae）、毛螺旋體科（Lachnospiraceae）、Unspecified_Clostridiales、Paraprevotellac、Erysipelotrichaceae、Bacteroidaceae、Unspecified_Bacteroidales。其中，對照組豐度排名前四的細(xì)菌科為乳酸菌科（34.57%）、S24_7 （8.85%）、螺旋體科（8.76%）、瘤胃球菌科 （8.67%）；模型組為乳酸菌科 （29.90%）、S24_7 （9.00%）、螺旋體科 （12.13%）、瘤胃球菌科（8.09%）；厚樸酚組為乳酸菌科 （30.85%）、S24_7（11.05%）、螺旋體科（7.57%）、瘤胃球菌科（8.82%）。在科水平，各組間優(yōu)勢菌種變化差異不顯著，但厚樸酚組螺旋體科相對豐度占比降低，菌群結(jié)構(gòu)趨近于對照組。以上結(jié)果表明，厚樸酚能夠調(diào)節(jié)IBS-C 大鼠腸道菌群，通過調(diào)節(jié)腸道菌群組成結(jié)構(gòu)維持大鼠機(jī)體健康。

3.5.3 特征菌群差異性分析 圖5 顯示，LEfSe 分析采用線性判別分析（LDA 柱狀圖） 評估每個(gè)物種豐度對差異效果影響的大小。利用該分析（LDA＝3.0） 篩選出各組特征性菌屬，對照組特征菌屬為鏈球菌（Streptococcaceae）、鏈球菌（Streptococcus）；模型組特征菌屬為變形菌、氣單胞菌、琥珀酸弧菌、厭氧螺菌、變形桿菌；厚樸酚組特征菌屬為梭狀芽孢桿菌、梭狀芽孢桿菌、ε-變形菌、曲桿菌、螺桿菌、螺桿菌、變形菌、脫硫弧菌、脫硫弧菌、脫硫弧菌。

圖5 LEfSe 分析LDA 柱形圖

3.5.4 α 多樣性分析 稀釋曲線是以測序數(shù)據(jù)量與物種多樣性來構(gòu)建的曲線，用來說明樣品的測序數(shù)據(jù)量是否合理。曲線的平緩程度反映測序深度對觀測樣本多樣性的影響，曲線越平緩，表明測序結(jié)果已足夠反映當(dāng)前樣本所包含的多樣性。圖6 顯示，提取的樣本數(shù)量達(dá)標(biāo)，并且測序數(shù)據(jù)的深度基本上包括了足夠的樣本種類。

圖6 各組樣本稀釋曲線圖

α 多樣性指數(shù)通常評估某個(gè)樣本的物種多樣性，指數(shù)越高，表明樣本的多樣性越復(fù)雜。其中，Shannon、Simpson指數(shù)用于反映樣本群落多樣性，Chao1、Observed species 指數(shù)用于反映樣本細(xì)菌群落豐富度。由表2 可知，與對照組比較，模型組各指數(shù)均無明顯變化（P＞0.05）；與模型組比較，厚樸酚組Shannon、Simpson 指數(shù)升高（P＜0.05），Chao1、Observed species 指數(shù)無明顯變化（P＞0.05）。結(jié)果表明，用冰水灌胃法制備IBS-C 大鼠模型對其腸道菌群的豐富度、多樣性沒有顯著影響；厚樸酚主要干預(yù)腸道菌群的多樣性，對群落豐富度無明顯影響。

表2 α 多樣性指數(shù)比較（±s，n＝8）

表2 α 多樣性指數(shù)比較（±s，n＝8）

注：與模型組比較，*P＜0.05。

組別ShannonSimpsonChao1Observed species對照組6.15±0.390.94±0.02618.93±91.1333.89±6.00模型組6.19±0.260.94±0.02614.82±60.4832.99±5.29厚樸酚組6.74±0.34*0.96±0.02*657.57±76.0435.81±7.25

3.5.5 β 多樣性分析 β 多樣性分析是對不同樣品間的微生物群落構(gòu)成進(jìn)行比較。無度量多維標(biāo)定法（NMDS） 統(tǒng)計(jì)是一種適用于生態(tài)學(xué)研究的排序方法，類似于PCoA。NMDS 為非線性模型，其能克服線性模型排序方法（如PCoA） 的缺點(diǎn)，更好地反映生態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)。圖7 為基于Unweighted Unifrac 距離進(jìn)行的NMDS 分析，結(jié)果顯示，對照組、模型組及厚樸酚組未明顯分離，但厚樸酚組大鼠菌群結(jié)構(gòu)更靠近對照組。

圖7 各組樣本NMDS 模型圖

4 討論

4.1 厚樸酚對IBS-C 大鼠5-HT 信號通路的影響 IBS-C 作為臨床常見的消化道疾病之一，其病理基礎(chǔ)主要包括胃腸動力障礙及內(nèi)臟感覺異常等［17］，由于病癥較輕微、病程長且反復(fù)發(fā)作等原因，困擾著許多人的生活。5-HT 是5-HT信號通路的核心，它既是神經(jīng)遞質(zhì)，又是胃腸激素，絕大部分5-HT 都存在于胃腸道內(nèi)，其主要功能包括促進(jìn)胃腸道的運(yùn)動、血管舒張及胰液的分泌等［18］。有研究表明，5-HT分泌的增多能促進(jìn)腸道平滑肌蠕動收縮，從而改善IBS-C患者便秘癥狀［19］。SP 同樣擁有胃腸激素和神經(jīng)遞質(zhì)雙重屬性，可以促進(jìn)腸道蠕動，并誘導(dǎo)5-HT 的釋放［20］。5-HT 合成限速酶TPH-1 主要在EC 細(xì)胞表達(dá)，主要催化EC 細(xì)胞中的色氨酸反應(yīng)生成5-HT，是合成5-HT 的重要指標(biāo)［21］。單胺類轉(zhuǎn)運(yùn)體SERT 是與5-HT 有高度親和力的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，主要任務(wù)為回收5-HT，終止其作用，從而使得胃腸道的5-HT 水平減少，作為5-HT 失活最關(guān)鍵的蛋白，SERT 是影響5-HT 信號通路的重要指標(biāo)之一［22-23］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組大鼠糞便粒數(shù)及含水率減少，結(jié)腸組織5-HT 及SP 水平上升，推測原因?yàn)?-HT 過量導(dǎo)致5-HT4R 脫敏，引發(fā)胃腸運(yùn)動障礙所致［5］。厚樸酚給藥后，大鼠糞便粒數(shù)及含水率升高，5-HT 及SP 水平進(jìn)一步上升，SERTmRNA 表達(dá)上調(diào)，提示厚樸酚能促進(jìn)5-HT 及SP 分泌，提高5-HT 受體敏感度，并且可以通過調(diào)節(jié)SERT表達(dá)來調(diào)控5-HT 水平，進(jìn)而影響5-HT 信號通路發(fā)揮促進(jìn)調(diào)節(jié)胃腸蠕動的作用，其中厚樸酚能促進(jìn)5-HT 水平這一結(jié)果與前期研究一致［11］。

4.2 厚樸酚對IBS-C 大鼠腸道菌群的影響 人體腸道是一個(gè)龐大復(fù)雜的微生態(tài)系統(tǒng)，細(xì)菌間通過相互作用參與機(jī)體的生長發(fā)育過程，維持腸道微生態(tài)平衡與機(jī)體穩(wěn)定，許多疾病如IBS-C 等的發(fā)生發(fā)展也與菌群的變化有著直接或間接的影響［24-25］。本實(shí)驗(yàn)中，共有物種分析表明，與對照組比較，模型組特有OTU 數(shù)減少；厚樸酚給藥后，特有OTU數(shù)增加，且LDA≥3 的特征菌屬種類增加，提示厚樸酚可能通過增加特征菌屬種類實(shí)現(xiàn)對IBS-C 的治療。門水平菌群差異性分析表明，各組菌群的總體菌群物種組成沒有差異；而模型組厚壁菌門相對豐度低于對照組及厚樸酚組，有害菌群螺旋體門相對豐度增加；厚樸酚給藥后菌群結(jié)構(gòu)趨近于對照組，提示厚樸酚治療IBS-C 的機(jī)制可能與其調(diào)節(jié)菌群結(jié)構(gòu)組成比有關(guān)。其中厚壁菌屬能參與如丁酸鹽、乙酸鹽在內(nèi)的短鏈脂肪酸（short chain fatty acid，SCFA） 等成分的代謝合成，達(dá)到抗炎和抑制免疫等作用［26-27］。有研究表明，SCFA 作為腸道菌群的主要代謝產(chǎn)物之一，可以促進(jìn)結(jié)腸5-HT 水平升高，增強(qiáng)胃腸運(yùn)動能力［28-30］，這與本研究發(fā)現(xiàn)厚樸酚組促進(jìn)5-HT 水平上升的結(jié)果吻合。本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠菌群豐富度、多樣性均無明顯變化；厚樸酚組菌群多樣性增加，且β 多樣性分析結(jié)果也顯示厚樸酚組大鼠菌群結(jié)構(gòu)更靠近對照組，但與模型組未明顯分離，提示由于IBS-C 模型大鼠腸道無質(zhì)性病變和炎癥反應(yīng)，其對大鼠菌群的改變主要為紊亂菌群組成結(jié)構(gòu)比例，對菌群多樣性及豐度影響不顯著，且無明顯致病菌滋生，而厚樸酚主要通過調(diào)整、改善菌群構(gòu)成，降低有害菌種比例及干預(yù)菌群多樣性到達(dá)治療效果。

綜上所述，厚樸酚可通過改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)5-HT 通路，從而發(fā)揮治療IBS-C 的作用。