皮子藥化學成分的研究

王 琴，劉冬梅，趙平華，許 玲，李長江，王啟硯*，何梟宇*

（1.荊門市中心醫院，湖北 荊門 448000；2.荊門市食品藥品質量檢驗所，湖北 荊門 448000；3.成都草源康生物科技有限公司，四川 成都 611130）

皮子藥（麻口皮子藥） 為蕓香科植物野花椒ZanthoxylumsimulansHance 的干燥干皮及枝皮，主要分布于湖南、貴州、江西、江蘇、浙江、安徽等省，具有祛風散寒、活血止痛、解毒消腫的功效，臨床用于治療風寒濕痹、腹痛泄瀉、咽喉疼痛、牙齦腫痛、無名腫毒、跌打損傷、毒蛇咬傷、吐血、衄血［1-2］。目前，從該植物中分離得到的化學成分為木脂素、苯丙素、生物堿、甾醇、揮發油、黃酮等［3-6］，但對該植物干皮和枝皮的系統研究較少，為明確該藥用資源的藥效物質基礎，本研究采用多種色譜技術對皮子藥的乙醇提取物開展全面的化學成分研究，從中分離得到8 個化合物，其中化合物1 為新化合物，化合物3、8 為首次從該植物中分離得到。

1 材料

Bruker Avance Ⅲ600MHz 核磁共振波譜儀（德國Bruker 公司）；AB SCIEX TripleTOF TM5600+四極桿-飛行時間串聯質譜（美國AB Sciex 公司）；Ultimate 3000 高效液相色譜儀（美國Thermo Fisher Scientific 公司）；LC-100 半制備型液相色譜儀（上海伍豐科學儀器有限公司）。

Sephadex G-10 制備型C18色譜柱（300 mm×15 mm，10 μm） （大連依利特分析儀器有限公司）；反相色譜硅膠（RP-18，德國Merck 公司）；Sephadex LH-20 葡聚糖凝膠 （美國GE 公司）；D101 型大孔吸附樹脂（國藥集團化學試劑有限公司）；柱用正相硅膠（200～300 目）、TLC 硅膠板GF254（青島海洋化工廠）。甲醇為色譜純（國藥集團化學試劑有限公司）；其余試劑均為分析純。

皮子藥于2021 年購自成都草源康生物科技有限公司，經荊楚理工學院楊成雄教授鑒定為ZanthoxylumsimulansHance 的干皮及枝皮，植物樣本（編號PZY-JCLG-202105） 存放在荊楚理工學院協同創新平臺重點實驗室。

2 提取與分離

取皮子藥8 kg，陰干后粉碎過篩，用7 倍量95%乙醇回流提取3 次，每次4 h，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得浸膏775 g。加水分散，依次用二氯甲烷、醋酸乙酯進行萃取，每部分萃取3次，合并萃取液，減壓濃縮后得二氯甲烷部位、醋酸乙酯部位，剩余水溶液用1%醋酸正丁醇萃取2次，減壓蒸干溶劑，得正丁醇部位。

二氯甲烷部位（54 g） 加適量石油醚、乙酸乙酯溶解，經硅膠柱，以石油醚-醋酸乙酯（50 ∶1～1 ∶1） 梯度洗脫，TLC 檢識合并，得到Fr.A～Fr.D。Fr.D 經 Sephadex LH-20，以氯仿-甲醇（2 ∶1） 洗脫，得到Fr.D-1～Fr.D-2。Fr.D-1 經凝膠柱，以氯仿-甲醇（1 ∶1） 洗脫，得到化合物5（24.3 mg）。Fr.D-2 經硅膠柱，以氯仿-甲醇（5 ∶1～1 ∶1） 梯度洗脫，得到化合物6 （30.2 mg）、7（35.4 mg）。

醋酸乙酯部位（107 g） 加適量氯仿、甲醇溶解，經硅膠柱，以氯仿-甲醇（10 ∶1～1 ∶1） 梯度洗脫，TLC 檢識合并，得到Fr.E～Fr.H。Fr.F～Fr.G 經Sephadex LH-20，以氯仿-甲醇（1 ∶2） 分離，再經RP-18 柱，以甲醇-1%醋酸水（60 ∶40）純化，得到化合物4 （22.0 mg）、8 （18.7 mg）。

正丁醇部位（116 g） 加水混懸，經D101 大孔樹脂柱，以10%、30%、50%、70% 乙醇梯度洗脫，得到Fr.J～Fr.M。Fr.L 經RP-18 柱，以甲醇-2%醋酸水（50 ∶50） 分離，再經半制備HPLC，以甲醇-2%醋酸水（40 ∶60） 純化，得到化合物3（15.3 mg，tR＝11.4 min）；Fr.K 經半制備HPLC，以甲醇-2%醋酸水（10 ∶90～20 ∶80） 梯度洗脫，得到化合物1 （11.4 mg，tR＝18.6 min）、2 （19.0 mg，tR＝13.7 min）。

3 結構鑒定

化合物1：白色無定形粉末，［α］D10＝-23.9（c0.1，CH3OH），紫外光譜λCH3OH max （logε）為278.3 nm （3.42），IR （KBr）νmax為3 454、1 632、1 401、1 216、1 119 cm-1，HR-ESI-MSm／z：395.097 7 ［M+Na］+，373.115 8 ［M+H］+（計算值為C16H20O10Na，C16H21O10），推測分子式C16H20O10，不飽和度為7，1H-NMR、13C-NMR數據見表1。1H-NMR 中顯示1 組苯環氫信號δH7.32（2H，brs），表明存在1 個1，3，4，5-四取代苯環結構，δC147.4、140.5、147.4 進一步表明其為氧取代苯環；HMBC 譜顯示，δH3.90 （6H，s） （2個-OCH3片段） 與δC147.4 相關，δH7.32 （2H，brs） 與δC165.9 相關，故確定為丁香酰基；通過譜學數據對比，發現化合物1 與已知化合物綠原酸的高場信號相似，故推測為奎寧酸母核；HMBC 譜中，δH5.41 （1H，q，J＝6.2 Hz） 與δC165.9 相關，由此可確定丁香酰基和奎寧酸母核的連接方式。最終確定化合物1 為新化合物，命名為3-O-丁香酰奎寧酸，其結構式和HMBC 相關見圖1。

圖1 化合物1 的結構和主要關聯HMBC 圖譜Fig．1 Structure and key HMBC correlations of compound 1

表1 化合物1 的1H-NMR、13C-NMR數據Tab．1 1H-NMR and 13C-NMR data on compound 1

化合物2：類白色粉末，HR-ESI-MSm／z：373.113 4 ［M+H］+，分子式C16H18O9。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.56 （1H，d，J＝15.9 Hz，H-7'），7.05 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-2'），6.95 （1H，dd，J＝8.2，2.0 Hz，H-6'），6.78（1H，d，J＝8.2 Hz，H-5'），6.26 （1H，d，J＝15.9，1.6 Hz，H-8'），5.33 （1H，td，J＝9.0，4.5 Hz，H-3），4.17 （1H，td，J＝3.2，2.5 Hz，H-5），3.73 （1H，dd，J＝8.5，3.2 Hz，H-4），2.20 （2H，m，H-2），2.07 （2H，m，H-6）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：175.6 （C-7），167.3 （C-9'），148.2 （C-4'），145.7 （C-3'），145.4 （C-7'），126.4 （C-1'），121.6 （C-6'），115.1 （C-5'），113.8 （C-2'），113.7 （C-8'），74.7 （C-1），72.0 （C-3），70.6 （C-4），69.9（C-5），37.3 （C-6），36.8 （C-2）。以上數據與文獻［7］ 報道基本一致，故鑒定為綠原酸。

化合物3：白色針狀結晶，HR-ESI-MSm／z：342.171 5 ［M+H］+，分子式C20H24NO4。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.72 （1H，d，J＝8.0 Hz，H-8），6.58 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-9），6.54 （1H，s，H-3），3.85 （1H，m，H-6），3.83（3H，s，2-OCH3），3.77 （3H，s，10-OCH3），3.49 （1H，dd，J＝12.1，5.8 Hz，H-5a），3.24（3H，s，N-CH3），3.23 （1H，m，overlapped，H-5b），3.16 （1H，m，H-7a），2.97 （1H，m，H-7b），2.78 （3H，s，N-CH3），2.61 （1H，m，H-4a），2.38 （1H，m，H-4b）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：150.8 （C-2），149.6 （C-10），146.2 （C-11），145.8 （C-1），124.9 （C-7a），121.1 （C-8），120.8 （C-3a），119.9 （C-11a），117.2 （C-1a），116.7 （C-8），109.7 （C-9），108.7 （C-3），69.3 （C-6），60.7 （C-5），55.0（10-OCH3），54.8 （2-OCH3），52.6，42.2 （NCH3），30.1 （C-7），23.2 （C-4）。以上數據與文獻［8-9］ 報道基本一致，故鑒定為木蘭花堿。

化合物4：無色油狀物，HR-ESI-MSm／z：359.149 7 ［M+H］+，分子式C20H22O6。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.96 （1H，d，J＝1.7 Hz，H-2），6.94 （1H，d，J＝1.7 Hz，H-2'），6.81 （1H，dd，J＝8.1，1.7 Hz，H-6），6.79（1H，dd，J＝8.1，1.7 Hz，H-6'），6.77 （1H，d，J＝8.1 Hz，H-5），6.76 （1H，d，J＝8.1 Hz，H-5'），4.83 （1H，d，J＝6.2 Hz，H-7），4.41（1H，d，J＝7.0 Hz，H-7'），4.09 （1H，brd，J＝9.4 Hz，H-9a），3.85 （3H，s，3-OCH3），3.84（3H，s，3'-OCH3），3.82 （1H，dd，J＝9.4，6.2 Hz，H-9b），3.77 （1H，dd，J＝8.7，8.5 Hz，H-9'a），3.27 （1，dd，J＝8.7，8.5 Hz，H-9'b），3.36 （1H，m，H-8），2.91 （1H，m，H-8）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：147.7 （C-3），147.4 （C-3'），146.0 （C-4），145.2 （C-4'），132.5 （C-1），129.9 （C-1'），118.8 （C-6），118.0 （C-6'），114.7 （C-5），114.6 （C-5'），109.4 （C-2），109.1 （C-2'），88.1 （C-7），82.1（C-7'），70.6 （C-9），69.2 （C-9'），55.0 （3，3'-OCH3），54.2 （C-8），49.9 （C-8'）。以上數據與文獻［10-12］ 報道基本一致，故鑒定為表松脂酚。

化合物5：白色無定形粉末，HR-ESI-MSm／z：447.202 7 ［M+H］+，分子式C24H30O8。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.68 （4H，s，J＝1.7 Hz，H-2），4.75 （2H，d，J＝4.2 Hz，H-7，7'），4.29 （2H，dd，J＝9.2，6.9 Hz，H-9a，9'a），3.93 （2H，dd，J＝9.2，3.6 Hz，H-9b，9'b），3.84 （12H，s，3，3'，5，5'-OCH3），3.74 （6H，s，4，4'-OCH3），3.12 （2H，m，H-8，8'）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：153.3 （C-3，3'，5，5'），137.4 （C-4，4'），137.0 （C-1，1'），102.7 （C-2，2'，6，6'），85.9 （C-7，7'），71.6 （C-9，9'），59.7 （4，4'-OCH3），55.2 （3，3'，5，5'-OCH3），54.3 （C-8，8'）。以上數據與文獻［13-14］ 報道基本一致，故鑒定為鵝掌楸樹脂酚B 二甲醚。

化合物6：無色膠狀物，HR-ESI-MSm／z：353.140 7 ［M-H2O+H］+，分子式C21H20O6。1HNMR （600 MHz，CD3OD）δ：6.97 （1H，brs，H-2'），6.91 （1H，brs，H-5'），6.90 （1H，brs，H-6'），6.88 （1H，d，J＝1.6 Hz，H-2），6.84（1H，dd，J＝8.0，1.6 Hz，H-6），6.77 （1H，d，J＝8.0 Hz，H-5），5.92 （2H，s，-O-CH2-O-），4.71 （1H，d，J＝5.2 Hz，H-7），4.70 （1H，d，J＝5.2 Hz，H-7'），4.22 （2H，dd，J＝9.1，6.9 Hz，H-9a，9'a），3.84 （2H，dd，J＝9.1，4.3 Hz，H-9b，9'b），3.83 （3H，s，4'-OCH3），3.81（3H，s，3'-OCH3），3.10 （2H，m，H-8，8'）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：150.2 （C-3'），149.1 （C-4'），148.3 （C-3），147.6 （C-4），135.2 （C-1），133.8 （C-1），119.9 （C-6），119.0 （C-6'），112.1 （C-5'），110.3 （C-2'），108.9 （C-5），107.4 （C-2），101.5 （-O-CH2-O-），86.1 （C-7），86.0 （C-7'），72.2 （C-9），72.1 （C-9'），56.8 （4'-OCH3），56.7 （3'-OCH3），54.7 （C-8'），54.5 （C-8）。以上數據與文獻［15-16］ 報道基本一致，故鑒定為去甲檳郎堿。

化合物7：無色針狀結晶，HR-ESI-MSm／z：353.140 0 ［M-H2O+H］+，分子式C21H22O6。1HNMR （600 MHz，CD3OD）δ：6.99 （1H，d，J＝1.3 Hz，H-2'），6.94 （1H，d，J＝8.2 Hz，H-5'），6.92 （1H，dd，J＝8.2，1.3 Hz，H-6'），6.88 （1H，d，J＝1.6 Hz，H-2），6.85 （1H，dd，J＝7.9，1.6 Hz，H-6），6.77 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-5），5.93 （2H，s，-O-CH2-O-），4.87（1H，d，J＝6.1 Hz，H-7），4.42 （1H，d，J＝6.9 Hz，H-7'），4.11 （1H，brd，J＝9.4 Hz，H-9a），3.85 （1H，dd，J＝9.4，6.3 Hz，H-9b），3.84 （3H，s，4'-OCH3），3.82 （3H，s，3'-OCH3），3.78 （1H，dd，J＝9.1，8.2 Hz，H-9'a），3.40 （1H，m，H-8），3.24 （1H，dd，J＝9.1，8.2 Hz，H-9'b），2.90 （1H，m，H-8'）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：149.5 （C-3），148.7 （C-4），148.6 （C-3'），147.9 （C-4'），135.8 （C-1'），132.0 （C-1），120.3 （C-6'），118.0 （C-6），111.7 （C-5），109.8 （C-2），108.9 （C-5'），107.1 （C-2'），101.5 （-O-CH2-O-），88.5 （C-7'），82.7 （C-7），71.5 （C-9'），70.3 （C-9），56.3 （3-OCH3），56.4 （4-OCH3），55.1 （C-8'），50.9 （C-8）。以上數據與文獻［17］ 報道基本一致，故鑒定為辛夷脂素。

化合物8：無色油狀物，HR-ESI-MSm／z：449.195 1 ［M+Na］+，分子式C25H30O6。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.98 （1H，d，J＝1.5 Hz，H-2'），6.97 （1H，d，J＝1.5 Hz，H-2），6.91 （1H，d，J＝8.2 Hz，H-5'），6.89 （1H，dd，J＝8.2，1.5 Hz，H-6'），6.80 （1H，dd，J＝8.1，1.5 Hz，H-6），6.77 （1H，d，J＝8.1 Hz，H-5），5.46 （1H，brt，H-2″），4.85 （1H，d，J＝6.1 Hz，H-7），4.54 （2H，brd，J＝6.7 Hz，H-1″），4.44 （1H，d，J＝7.0 Hz，H-7'），4.12（1H，brd，J＝9.6 Hz，H-9a），3.86 （3H，s，3-OCH3），3.84 （1H，m，H-9b），3.83 （3H，s，3'-OCH3），3.79 （1H，brt，H-9'a），3.38 （1H，m，H-8'），3.28 （1H，brt，H-9'b），2.93 （1H，m，H-8），1.77 （3H，brs，H-4″），1.73 （3H，brs，H-5″）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：149.8 （C-3），147.8 （C-4），147.4 （C-3'），145.2 （C-4'），137.4 （C-3″），134.2 （C-1），129.9 （C-1'），119.8 （C-2″），118.4 （C-6），118.0 （C-6'），114.6 （C-5），113.7 （C-5'），109.8 （C-2），109.1 （C-2'），87.8 （C-7），82.1（C-7'），70.6 （C-9），69.3 （C-9'），65.6 （C-1″），55.0 （3'-OCH3），54.9 （3-OCH3），54.3（C-8'），49.9 （C-8），24.5 （C-4″），16.8 （C-5″）。以上數據與文獻［17-18］ 報道基本一致，故鑒定為planispine A。

4 討論

課題組前期研究發現，皮子藥醋酸乙酯部位和正丁醇部位具有抗氧化作用，因此，本研究采用多種色譜分離方法與波譜技術從皮子藥中分離得到8個化合物，其中化合物1～2 為有機酸類，化合物3為生物堿類，化合物4～8 為木脂素類，該系列化合物可為其藥效物質基礎和生物活性研究提供參考，并可為其進一步開發利用提供依據。