核桃青皮化學成分的研究

周媛媛，孫 朝，王思琪，張雪柔，王 萍，方振興

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院，教育部北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江省中醫(yī)藥科學院，黑龍江 哈爾濱 150036；3.黑龍江省科學院自然與生態(tài)研究所，黑龍江 哈爾濱 150040）

核桃青皮是胡桃科胡桃屬植物核桃楸Juglans mandshricaMaxim.未成熟果實的外果皮，具有清熱解毒、止痛止痢的功效［1］，在我國民間已有廣泛的應(yīng)用基礎(chǔ)。現(xiàn)代藥理學研究表明，核桃青皮具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗腫瘤等作用［2-4］。近年來，國內(nèi)外許多學者對核桃青皮的化學成分進行了大量研究，從中發(fā)現(xiàn)了萘醌類、萜類、二芳基庚烷類、黃酮類、酚酸類［5-6］等成分。為進一步挖掘核桃青皮的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，充分利用該藥用資源，本實驗對核桃青皮二氯甲烷、乙酸乙酯部位進行化學成分研究，分離得到14 個化合物，且化合物1～7均為首次從該藥用部位中分離得到。

1 材料

N-1300V-WB 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本東京理化器械株式會社）；Bruker-600 型超導核磁共振儀（德國Bruker 公司）；HR-ESI-MS 高分辨質(zhì)譜儀、1525EF 半制備型高效液相色譜儀（美國Waters 公司）；200～300 目柱硅膠、薄層色譜硅膠（青島海洋化工廠）。胡蘿卜苷對照品為實驗室自制，批號20210615；甲醇為色譜純（美國Tedia 公司）；其余試劑為分析純 （天津市富宇精細化工有限公司）。

核桃青皮于2020 年7 月采自吉林省東南部長白山地區(qū)，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院楊炳友教授鑒定，確定其為胡桃科植物胡桃楸Juglans mandshuricaMaxim.的未成熟外果皮，即核桃青皮。植物標本（編號20200811） 現(xiàn)保存在黑龍江中醫(yī)藥大學中藥化學教研室。

2 提取與分離

取陰干的核桃青皮10.0 kg 粉碎，室溫下用8倍量95%乙醇浸泡7 d，收集濾液，重復3 次，減壓濃縮得到浸膏（688.8 g）。浸膏加適量蒸餾水分散后，用二氯甲烷、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，得到二氯甲烷部位（Fr.A，238.6 g）、乙酸乙酯部位（Fr.B，196.3 g）。

二氯甲烷部位（Fr.A） 經(jīng)200～300 目硅膠柱分離，以二氯甲烷-甲醇（100 ∶0～0 ∶100） 梯度洗脫，TLC 檢識合并，得到Fr.A1～Fr.A5。Fr.A1經(jīng)硅膠柱分離，以二氯甲烷-甲醇（50 ∶1～0 ∶1）梯度洗脫，得到化合物3 （6.8 mg）、4 （5.7 mg）、5 （6.4 mg）。Fr.A2 經(jīng)硅膠柱分離，以二氯甲烷-甲醇（30 ∶1～0 ∶1） 梯度洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20 柱，以甲醇-水（8 ∶1） 洗脫，得到化合物1 （5.3 mg）、13 （8.4 mg）。Fr.A4 經(jīng)硅膠柱分離，以二氯甲烷-甲醇（15 ∶1～0 ∶1） 梯度洗脫，得到化合物2 （6.6 mg）、8 （3.9 mg）。

乙酸乙酯部位（Fr.B） 經(jīng)200～300 目硅膠柱分離，以二氯甲烷-甲醇（100 ∶0～0 ∶100） 梯度洗脫，TLC 檢識合并，得到Fr.B1～Fr.B7。Fr.B1經(jīng)硅膠柱分離，以二氯甲烷-甲醇（100 ∶1～20 ∶1） 梯度洗脫，得到化合物10 （5.7 mg）、11 （7.2 mg）。Fr.B2 經(jīng)硅膠柱分離，以二氯甲烷-甲醇（50 ∶1～10 ∶1） 梯度洗脫，得到化合物6 （8.6 mg）、7 （3.7 mg）、12 （7.5 mg）。Fr.B5 經(jīng)硅膠柱分離，以二氯甲烷-甲醇（50 ∶1～0 ∶1） 梯度洗脫，經(jīng)Sephadex LH-20 柱，以甲醇-水（3 ∶1） 洗脫，再經(jīng)半制備HPLC，以甲醇-水（60 ∶40） 純化，得到化合物9 （4.5 mg，tR＝20.3 min）、14（4.6 mg，tR＝21.8 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色油狀物，HR-ESI-MSm／z：245.451 3 ［M+Na］+，分子式C15H26O。1H-NMR（CDCl3，600 MHz）δ：4.76 （1H，brs，H-11a），4.52 （1H，brs，H-11b），1.29 （6H，s，H-13～14），0.78 （3H，s，H-15）；13C-NMR （CDCl3，150 MHz）δ：151.9 （C-4），105.1 （C-11），72.8（C-12），50.1 （C-7），49.8 （C-5），41.5 （C-9），40.7 （C-1），37.2 （C-3），36.5 （C-10），27.5（C-14），27.1 （C-13），25.4 （C-6），23.8 （C-2），22.9 （C-8），16.8 （C-15）。以上數(shù)據(jù)與文獻［7］ 報道基本一致，故鑒定為β-桉葉醇。

化合物 2：白色粉末，HR-ESI-MSm／z：257.137 6 ［M+Na］+，分子式C14H18O3。1H-NMR（CDCl3，600 MHz）δ：7.34 （2H，d，J＝8.6 Hz，H-3'，5'），6.88 （2H，d，J＝8.6 Hz，H-2'，6'），6.55 （1H，d，J＝16.8 Hz，H-1″），6.26（1H，dt，J＝16.8，6.0 Hz，H-2″），5.79 （1H，t，J＝6.8 Hz，H-3），4.58 （2H，d，J＝6.8 Hz，H-4），4.34 （2H，d，J＝6.0 Hz，H-3″），4.04（2H，s，H-1），1.78 （3H，s，H-5）；13C-NMR（CDCl3，150 MHz）δ：160.3 （C-1'），140.3 （C-2），131.5 （C-1″），130.1 （C-4'），128.2 （C-3'，5'），127.1 （C-2″），120.5 （C-3），114.9 （C-2'，6'），68.3 （C-1），64.4 （C-4），64.1 （C-3″），14.5 （C-5）。以上數(shù)據(jù)與文獻［8］ 報道基本一致，故鑒定為integrifoliodiol。

化合物3：淡黃色粉末，HR-ESI-MSm／z：281.271 5 ［M+Na］+，分子式C15H14O4。1H-NMR（CDCl3，600 MHz）δ：7.92 （1H，d，J＝9.2 Hz，H-4），6.68 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-4'），6.33（1H，s，H-8），6.12 （1H，d，J＝9.2 Hz，H-3），5.52 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-3'），3.89 （3H，s，7-OCH3），1.32 （6H，s，5'，6'-OCH3）；13C-NMR （CDCl3，150 MHz）δ：161.8 （C-2），158.8 （C-7），156.2 （C-9），150.0 （C-5），138.9 （C-4），128.0 （C-3'），116.5 （C-4'），111.1 （C-3），106.9 （C-6），103.2 （C-10），91.5 （C-8），77.9 （C-2'），56.4 （7-OCH3），28.3 （C-5'，6'）。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］ 報道基本一致，故鑒定為alloxanthoxyletin。

化合物4：淡黃色粉末，HR-ESI-MSm／z：281.112 6 ［M+ Na］+，分子式C15H14O4。1H-NMR（CDCl3，600 MHz）δ：7.98 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-4），6.74 （1H，d，J＝10.2 Hz，H-4'），6.24（1H，s，H-6），6.11 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-3），5.62 （1H，d，J＝10.2 Hz，H-3'），3.88 （3H，s，5-OCH3），1.51 （6H，s，5'，6'-CH3）；13C-NMR （CDCl3，150 MHz）δ：161.5 （C-2），157.0 （C-7），156.9 （C-5），150.5 （C-9），139.2 （C-4），127.6 （C-3'），114.3 （C-4'），110.5 （C-3），103.6 （C-10），102.3 （C-8），95.5 （C-6），77.6 （C-2'），55.8 （-OCH3），28.3（5'，6'-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［10］ 報道基本一致，故鑒定為5-methoxyseselin。

化合物5：棕黃色針晶（甲醇），HR-ESI-MSm／z：351.413 9 ［M+Na］+，分子式C20H24O4。1HNMR （CDCl3，600 MHz）δ：7.64 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-4），6.88 （1H，s，H-5），6.83 （1H，s，H-8），6.31 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-3），5.48（1H，t，J＝6.4 Hz，H-2'），5.09 （1H，t，J＝6.4 Hz，H-6'），4.66 （2H，d，J＝6.4 Hz，H-1'），3.91 （3H，s，6-OCH3），1.74 （3H，s，8'-CH3），1.65 （3H，s，9'-CH3），1.55 （3H，s，10'-CH3）；13C-NMR （CDCl3，150 MHz）δ：162.1（C-2），151.9 （C-7），150.5 （C-9），146.6 （C-6），143.2 （C-4），142.3 （C-3'），131.7 （C-7'），123.0 （C-6'），118.5 （C-2'），113.7 （C-3），111.5 （C-10），107.6 （C-5），101.5 （C-8），66.8 （C-1'），56.7 （6-OCH3），39.6 （C-4'），26.3 （C-5'），25.7 （8'-CH3），17.9 （10'-CH3），16.6 （9'-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［11］ 報道基本一致，故鑒定為7-香葉氧基-6-甲氧基香豆素。

化合物6：白色油狀物，HR-ESI-MSm／z：303.249 3 ［M+Na］+，分子式C18H32O2。1H-NMR（CDCl3，600 MHz）δ：7.23 （1H，s，1-OH），5.36～5.38 （4H，m，H-9～10，12～13），2.84（2H，t，J＝6.6 Hz，H-11），2.25 （2H，t，J＝6.8 Hz，H-2），0.86 （3H，t，J＝7.8 Hz，18-CH3）；13C-NMR （CDCl3，150 MHz）δ：172.0（C-1），129.1 （C-13），128.4 （C-9），127.7 （C-12），127.4 （C-10），33.8 （C-2），31.0 （C-16），29.6 （C-7），29.4 （C-15），29.1 （C-6），29.0（C-5），28.7 （C-4），26.7 （C-8），26.6 （C-14），25.0 （C-11），24.2 （C-3），23.2 （C-17），14.5（C-18）。以上數(shù)據(jù)與文獻［12］ 報道基本一致，故鑒定為亞油酸。

化合物7：淡黃色粉末，HR-ESI-MSm／z：217.206 3 ［M+Na］+，分子式C10H10O4。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.52 （1H，d，J＝16.0 Hz，H-7），7.06 （1H，d，J＝1.6 Hz，H-2），6.88 （1H，dd，J＝8.0，1.6 Hz，H-6），6.68（1H，d，J＝8.0 Hz，H-5），6.21 （1H，d，J＝16.0 Hz，H-8），3.68 （3H，s，-OCH3）；13C-NMR （CD3OD，150 MHz）δ：166.8 （C-9），147.2 （C-4），145.4 （C-3），143.7 （C-7），128.2 （C-1），122.7 （C-6），115.8 （C-5），115.0 （C-2），113.4 （C-8），50.6 （-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［13］ 報道基本一致，故鑒定為咖啡酸甲酯。

化合物8：淡黃色油狀物，HR-ESI-MSm／z：247.215 3 ［M+Na］+，分子式C13H20O3。1H-NMR（CDCl3，600 MHz）δ：5.93 （1H，d，J＝1.2 Hz，H-4），5.84 （1H，dd，J＝16.2，5.6 Hz，H-8），5.76 （1H，d，J＝16.2 Hz，H-7），4.54 （1H，dq，J＝6.6，5.6 Hz，H-9），2.28 （1H，d，J＝16.8 Hz，H-2a），2.26 （1H，d，J＝16.8 Hz，H-2b），1.93 （3H，d，J＝1.2 Hz，H-13），1.32（3H，d，J＝6.6 Hz，H-10），1.09 （3H，s，H-11），0.98 （3H，s，H-12）；13C-NMR （CDCl3，150 MHz）δ：200.1 （C-3），162.8 （C-5），135.2（C-8），128.8 （C-7），126.5 （C-4），78.7 （C-6），68.2 （C-9），49.6 （C-2），40.8 （C-1），24.2 （C-11），23.8 （C-12），22.5 （C-10），19.4 （C-13）。以上數(shù)據(jù)與文獻［14］ 報道基本一致，故鑒定為吐葉醇。

化合物9：白色針晶 （甲醇），HR-ESI-MSm／z：221.173 2 ［M+Na］+，分子式C9H10O5。1HNMR （CD3OD，600 MHz）δ：7.23 （2H，s，H-2，6），3.84 （6H，s，3，5-OCH3）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：168.5 （-COOH），147.4（C-3，5），140.2 （C-4），120.1 （C-1），107.5（C-2，6），55.9 （3，5-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［15］ 報道基本一致，故鑒定為丁香酸。

化合物 10：白色粉末，HR-EI-MSm／z：191.423 5 ［M + H］+，分子式C8H8O4。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.58 （1H，dd，J＝8.4，1.8 Hz，H-6），7.52 （1H，d，J＝1.8 Hz，H-2），6.81 （1H，d，J＝8.2 Hz，H-5），3.85 （3H，s，4-OCH3）；13C-NMR （CD3OD，150 MHz）δ：170.5 （-COOH），153.2 （C-4），148.3 （C-3），125.7 （C-1），123.2 （C-6），116.6 （C-2），113.7 （C-5），56.9 （4-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［5］ 報道基本一致，故鑒定為異香草酸。

化合物11：白色無定形粉末，HR-ESI-MSm／z：231.238 1 ［M+Na］+，分子式C11H12O4。1H-NMR（DMSO-d6，600 MHz）δ：7.47 （1H，d，J＝16.4 Hz，H-7），7.05 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-2），7.01 （1H，d，J＝8.8 Hz，H-5），6.79 （1H，dd，J＝8.8，2.1 Hz，H-6），6.34 （1H，d，J＝16.4 Hz，H-8），4.22 （3H，s，4-OCH3），3.69 （3H，s，9-OCH3）；13C-NMR （DMSO-d6，150 MHz）δ：167.5 （C-9），150.2 （C-6），148.3 （C-1），145.6 （C-7），122.2 （C-3），121.1 （C-4），117.4 （C-8），115.2 （C-5），114.1 （C-2），60.3（4-OCH3），51.3 （9-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［16］ 報道基本一致，故鑒定為異阿魏酸甲酯。

化合物12：無色針晶（甲醇），Liebermann-Burchard 反應(yīng)呈陽性，HR-ESI-MSm／z：479.671 1［M+Na］+，分子式C30H48O3。1H-NMR （CD3OD，600 MHz）δ：5.22 （1H，t，J＝3.4 Hz，H-12），3.23 （1H，dd，J＝4.5，11.1 Hz，H-3），2.84（1H，dd，J＝3.8，13.6 Hz，H-18），1.17 （3H，s，H-27），0.95 （3H，s，H-23），0.91 （3H，s，H-29），0.90 （3H，s，H-24），0.93 （3H，s，H-30），0.81 （3H，s，H-25），0.74 （3H，s，H-26）；13C-NMR （CDCl3，150 MHz）δ：183.2 （28-COOH），143.3 （C-13），122.9 （C-12），78.8（C-3），55.4 （C-5），47.7 （C-9），46.2 （C-19），45.5 （C-17），41.8 （C-14），41.1 （C-18），39.1（C-8），38.9 （C-4），38.5 （C-1），37.4 （C-10），34.1 （C-21），32.9 （C-30），32.5 （C-22），32.2（C-7），30.8 （C-20），28.4 （C-23），27.5 （C-15），27.1 （C-2），26.2 （C-27），23.7 （C-29），23.2 （C-16），22.8 （C-11），18.0 （C-6），17.3（C-26），15.4 （C-25），15.1 （C-24）。以上數(shù)據(jù)與文獻［17］ 報道基本一致，故鑒定為齊墩果酸。

化合物13：白色針晶（氯仿），Liebermann-Burchard 反應(yīng)為陽性，HR-EI-MSm／z：437.721 4［M+Na］+，分子式C29H50O。1H-NMR （CDCl3，600 MHz）δ：5.34 （1H，d，J＝5.2 Hz，H-6），1.07（3H，s，H-19），0.91 （3H，d，J＝6.8 Hz，H-2），0.92 （3H，d，J＝7.2 Hz，H-21），0.82（3H，d，J＝6.8 Hz，H-26），0.71 （3H，s，H-18）；13C-NMR （CDCl3，150 MHz）δ：140.8 （C-5），122.1 （C-6），71.6 （C-3），57.1 （C-14），56.5 （C-17），49.7 （C-9），45.4 （C-24），42.8（C-4），42.6 （C-13），39.6 （C-12），37.5 （C-1），36.5 （C-10），36.4 （C-20），32.3 （C-7），31.5 （C-22），31.4 （C-8），29.9 （C-25），28.3（C-23），28.2 （C-16），26.5 （C-2），24.0 （C-15），23.3 （C-28），21.1 （C-11），19.7 （C-27），19.6 （C-18），18.9 （C-29），18.5 （C-21），12.5（C-26），11.5 （C-19）。以上數(shù)據(jù)與文獻［18］ 報道基本一致，故鑒定為β-谷甾醇。

化合物14：白色粉末，Liebermann-Burchard反應(yīng)陽性，5% 硫酸乙醇溶液顯紫紅色，HR-ESIMSm／z：599.842 1 ［M+Na］+，表明其相對分子質(zhì)量為576。采用TLC 法，與胡蘿卜苷對照品Rf值及顯色行為一致，故鑒定為胡蘿卜苷。

4 討論

本實驗從核桃青皮中分離得到14 個化合物，包括3 個萜類、3 個苯丙素類、4 個酚酸類、3 個其他類，其中化合物1～7 為首次從核桃青皮中分離得到，進一步豐富了核桃青皮的化學成分，為今后開展核桃青皮抗腫瘤活性研究提供重要的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。