基于Nrf2／HO-1 信號通路探討山楂葉總黃酮對多囊卵巢綜合征大鼠卵巢氧化應激的影響

劉桂宇，謝倩倩，陳希芬，元 麗，康雪敏

（1.河北師范大學職工醫院，河北 石家莊 050024；2.河北師范大學生命科學學院，河北 石家莊 050024）

多囊卵巢綜合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS） 主要以多囊卵巢形態、卵巢功能障礙以及高雄激素血癥為主要特征，是導致育齡女性不孕不育的常見代謝紊亂與生殖內分泌性疾病［1-3］。PCOS患者若未能得到及時合理的治療，會使子宮內膜癌、代謝綜合征、心血管疾病及2 型糖尿病的發病幾率增加［4-5］。因此，尋找安全有效及更加完善的PCOS 治療方案，是當前急需解決的難題。山楂具有抗氧化、抗炎、預防動脈粥樣硬化、治療心肌缺血及調節糖脂代謝紊亂等作用［6］。山楂中黃酮類化合物含量豐富，研究發現，山楂葉總黃酮可以使高脂血癥大鼠總膽固醇 （total cholesterol，TC）、甘油三酯 （triglyceride，TG） 及低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL） 水平降低，具有改善脂代謝紊亂作用［7］。山楂葉總黃酮也能夠使糖尿病大鼠血糖水平降低，改善脂代謝，同時可以降低血清丙二醛（malondialdehyde，MDA） 水平，升高超氧化物歧化酶 （superoxide dismutase，SOD）及過氧化氫酶（catalase，CAT） 活性，表現出了明顯的抗氧化損傷作用［8］。糖脂代謝異常及氧化應激是PCOS 發病的重要機制［9］，由此推測山楂葉總黃酮對于PCOS 的預防及治療具有潛在的應用價值。本研究采用高脂飼料喂食聯合灌胃來曲唑法建立大鼠PCOS 模型，并給予不同劑量山楂葉總黃酮干預，探討山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠的保護作用及潛在機制。

1 材料

1.1 動物 健康雌性SD 大鼠70 只，SPF 級，6周齡，具有正常動情周期，體質量180～220 g，由斯貝福（北京） 生物技術有限公司提供［實驗動物生產許可證號SCXK （京） 2019-0010］。大鼠飼養于河北中醫學院實驗動物中心［實驗動物使用許可證號SYXK （冀） 2022-010］，環境為相對濕度50%～60%，溫度22～23 ℃，12 h／12 h 晝夜循環交替，自由飲食及飲水。本實驗方案經河北師范大學動物倫理委員會審批 （倫理號2022LLSC023），符合實驗動物的3R 原則。

1.2 藥物與試劑 山楂葉總黃酮為山楂葉黃酮提取物（黃酮含量90.0%，批號20220125，陜西瑞沃生物科技有限公司）；二甲雙胍 （規格0.5 g／片，國藥準字H20023370，中美上海施貴寶制藥有限公司）。來曲唑（規格2.5 mg／片，國藥準字H20133109，浙江海正藥業股份有限公司）；蘇木精-伊紅（hematoxylin eosin，HE） 染色試劑盒（貨號WH2144，上海威奧生物科技有限公司）；卵泡刺激素（follicle stimulating hormone，FSH）、黃體生成素（luteinizing hormone，LH）、睪酮（testosterone，T）、抗繆勒管激素 （anti-mullerian hormone，AMH）、雌二醇（estradiol，E2） 檢測試劑盒 （貨號JEB-13680、JEB-13774、JEB-13693、JEB-13167、JEB-13691，南京金益柏生物科技有限公司）；空腹胰島素（fasting insulin，FINS） 檢測試劑盒（貨號H203-1-2，南京建成生物工程研究所）；SOD、谷胱甘肽過氧化物酶 （glutathione peroxidase，GSH-Px）、MDA 檢測試劑盒 （貨號ml095208、ml095263、ml094963，上海酶聯生物科技有限公司）；核因子紅細胞系2 相關因子2（nuclear factor erythroid 2 related factor，Nrf2）、血紅素氧合酶1 （heme oxygenase 1，HO-1） 多克隆抗體 （貨號ab137550、ab13243，英國Abcam 公司）；磷酸甘油醛脫氫酶（reduced glyceraldehyde phosphate dehydrogenase，GAPDH） 多克隆抗體、IgG 二抗（貨號R1210-1、HA1001，杭州華安生物技術有限公司）。

1.3 儀器 UXF40086 型超低溫冰箱 （美國Thermo Fisher Scientific 公司）；BSA2202S 型電子天平（德國Sartorius 公司）；KC-100 型酶標儀（安徽鴻眾醫療器械有限公司）；RM2135 型病理組織切片機 （德國Leica 公司）；NE930 型光學顯微鏡（寧波永新光學股份有限公司）；血糖試紙條、ACCU-CHEK 型血糖儀（瑞士Roche 公司）；BK-200VET 型全自動生化分析儀（濟南歐萊博科學儀器有限公司）；UV9000 型紫外可見分光光度儀（上海元析儀器有限公司）；Mini-PROTEAN Tetra型蛋白電泳及轉印系統 （美國Bio-Rad 公司）；3200-97001 型凝膠成像儀（上海勤翔科學儀器有限公司）。

2 方法

2.1 造模、分組及給藥 大鼠分為空白組（10只） 及造模組（60 只），空白組大鼠飼喂普通飼料，并灌胃 1% 羧甲基纖維素鈉 （sodium carboxymethyl cellulose，CMC-Na）；造模組大鼠飼喂高脂飼料，并用灌胃1 mg／kg 來曲唑混懸液（1%CMC-Na 配制），共21 d［10］。從第10 天開始行陰道涂片觀察，連續10 d，當出現動情周期紊亂、陰道上皮白細胞持續增多時，隨機選取5 只大鼠處死后取材，并通過HE 染色檢測卵巢組織病理變化以進一步判斷PCOS 模型是否成功建立。建模成功的大鼠分為模型組、二甲雙胍組（100 mg／kg） 及山楂葉總黃酮低、中、高劑量組（100、200、400 mg／kg），每組10 只。各給藥組按上述劑量灌胃，其中山楂葉總黃酮的灌胃劑量參考文獻［11］ 報道，灌胃體積均為10 mL／kg，每天1 次，持續21 d。給藥期間，大鼠動情周期的觀察繼續以陰道涂片法進行，連續14 d，以評價山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠動情周期的影響。

2.2 取材及體質量、子宮質量、卵巢質量測定 末次給藥結束后，禁食不禁水12 h，稱定體質量。使用10%水合氯醛（300 mg／kg） 麻醉大鼠，腹主動脈取血，分離血清。摘取雙角子宮和雙側卵巢，沖洗殘留血跡并拭干，稱定子宮及卵巢質量，將一側卵巢固定于多聚甲醛，另一側保存于-80 ℃冰箱。

2.3 卵巢組織病理變化檢測 取固定24 h 的卵巢組織，脫水后進行石蠟包埋，切片（4 μm），行常規HE 染色，觀察卵巢病理變化。

2.4 激素水平、糖代謝及脂代謝指標檢測 通過血糖儀檢測大鼠空腹血糖（fasting blood glucose，FBG），采用酶聯免疫吸附法檢測FINS 水平，并計算胰島素抵抗指數（homeostasis model assessment of insulin resistance，HOMA-IR），公式為HOMA-IR＝FBG × FINS／22.5。取凍存于-80 ℃冰箱中的血清，解凍后，按照試劑盒說明書，采用酶聯免疫吸附法檢測血清FSH、LH 活性及T、AMH、E2水平；通過全自動生化分析儀檢測血清脂代謝指標LDL、高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）、TC及TG 水平。

2.5 卵巢組織氧化應激水平檢測 取100 mg 卵巢組織，加入1 mL 預冷的生理鹽水，在冰水浴上用組織研磨器充分研磨，3 000 r／min 離心10 min，取上清液，按照試劑盒說明書，通過比色法檢測卵巢組織SOD、GSH-Px 活性及MDA 水平。

2.6 卵巢組織Nrf2、HO-1 蛋白表達檢測 取100 mg 卵巢組織，加入1 mL 預冷的裂解液，在冰水浴上用組織研磨器充分研磨。離心后取上清液，蛋白定量試劑盒進行定量分析。蛋白樣本經SDS-PAGE電泳，濕轉法轉移至PVDF 膜，用5%牛血清白蛋白室溫封閉2 h，TBST 洗膜3 次，分別加入Nrf2、HO-1 （1 ∶1 000）、GAPDH （1 ∶2 500） 一抗，4 ℃冰箱孵育過夜，TBST 洗膜3 次，加入二抗（1 ∶5 000） 室溫孵育2 h，TBST 洗膜3 次，ECL顯色，曝光，通過Image J 1.8.0 軟件分析各條帶灰度值。

2.7 統計學分析 通過SPSS 20.0 軟件進行處理，數據以（±s） 表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD 檢驗。P＜0.05 表示差異具有統計學意義。

3 結果

3.1 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠動情周期的影響 SD大鼠一般以4～5 d 為一個動情周期，其中動情前期（proestrus，P） 以有核上皮細胞為主，呈膨大、橢圓形；動情期（estrus，E） 主要為無核角化細胞，且形態不規則；動情后期（metestrus，M） 可見白細胞和有核上皮、角化細胞，且數量相當；間期（diestrus，D） 主要的細胞類型為白細胞，見圖1A。經過連續14 d 對動情周期變化的動態監測繪制動情周期折線圖，見圖1B，發現空白組大鼠有規律的動情周期；模型組大鼠動情周期完全紊亂；二甲雙胍組及山楂葉總黃酮各劑量組大鼠動情周期均有逐漸恢復的趨勢，表明山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠動情周期的紊亂具有改善作用。

圖1 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠動情周期的影響Fig．1 Effects of hawthorn leaves flavonoids on estrous cycle in PCOS rats

3.2 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠體質量、子宮及卵巢質量的影響 如表1 所示，干預前與干預后，模型組大鼠體質量均高于空白組（P＜0.01）；干預前，與模型組比較，二甲雙胍組及山楂葉總黃酮各劑量組大鼠體質量無明顯變化（P＞0.05）；干預后，與模型組比較，二甲雙胍組及山楂葉總黃酮中、高劑量組大鼠體質量降低 （P＜0.05，P＜0.01），山楂葉總黃酮低劑量組大鼠體質量無明顯變化（P＞0.05）。與空白組比較，模型組大鼠子宮質量降低 （P＜0.01），卵巢質量升高 （P＜0.01）；與模型組比較，二甲雙胍組及山楂葉總黃酮各劑量組大鼠子宮質量升高 （P＜0.05，P＜0.01），卵巢質量降低（P＜0.01）。

表1 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠體質量、子宮及卵巢質量的影響（±s，n＝10）Tab．1 Effects of hawthorn leaves flavonoids on body weight，uterus and ovary weight in PCOS rats （±s，n＝10）

表1 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠體質量、子宮及卵巢質量的影響（±s，n＝10）Tab．1 Effects of hawthorn leaves flavonoids on body weight，uterus and ovary weight in PCOS rats （±s，n＝10）

注：與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別體質量／g干預前干預后子宮質量／mg卵巢質量／mg空白組251.39±30.48306.19±36.30529.62±69.4864.13±7.45模型組297.04±28.91**415.22±55.74**363.10±31.29**117.54±13.01**二甲雙胍組306.48±35.44352.58±42.51＃＃446.15±45.42＃＃78.09±8.56＃＃山楂葉總黃酮低劑量組312.13±27.05389.37±40.17398.41±40.21＃92.30±11.73＃＃山楂葉總黃酮中劑量組314.26±34.17371.33±36.24＃420.83±42.18＃＃85.46±8.31＃＃山楂葉總黃酮高劑量組298.62±31.29334.27±34.52＃＃455.96±53.61＃＃73.38±9.95＃＃

3.3 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠卵巢組織病理變化的影響 空白組大鼠卵巢組織未發生病理損傷變化，卵母細胞結構清晰，顆粒細胞排列整齊、緊密；模型組大鼠卵巢組織內可見囊性擴張卵泡及閉鎖卵泡，顆粒細胞層數減少且排列疏松；二甲雙胍組及山楂葉總黃酮各劑量組大鼠囊性擴張卵泡及閉鎖卵泡減少，顆粒細胞層數增加且排列較為緊密，其中二甲雙胍組及山楂葉總黃酮高劑量組對卵巢病理損傷變化的改善最為明顯，見圖2。

圖2 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠卵巢組織病理變化的影響（HE，×200）Fig．2 Effects of hawthorn leaves flavonoids on ovarian pathological changes in PCOS rats （HE，×200）

3.4 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠血清激素水平的影響 如表2 所示，與空白組比較，模型組大鼠血清FSH 活性及E2水平降低（P＜0.01），LH 活性及T、AMH 水平升高（P＜0.01）；與模型組比較，二甲雙胍組及山楂葉總黃酮各劑量組大鼠血清FSH活性及E2水平升高（P＜0.01），LH 活性及T、AMH 水平降低（P＜0.05，P＜0.01）。

表2 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠血清激素水平的影響（±s，n＝10）Tab．2 Effects of hawthorn leaves flavonoids on serum hormone levels in PCOS rats （±s，n＝10）

表2 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠血清激素水平的影響（±s，n＝10）Tab．2 Effects of hawthorn leaves flavonoids on serum hormone levels in PCOS rats （±s，n＝10）

注：與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別FSH／（U·L-1）LH／（U·L-1）T／（ng·L-1）AMH／（ng·L-1）E2／（pmol·L-1）空白組10.87±1.2325.14±3.31152.73±18.642 084.32±198.3549.32±5.60模型組5.42±0.48**46.22±5.20**281.92±30.36**3 675.24±415.49**23.66±2.78**二甲雙胍組9.68±1.02＃＃31.83±3.25＃＃175.68±19.81＃＃2 426.08±261.53＃＃46.31±5.12＃＃山楂葉總黃酮低劑量組7.59±0.87＃＃37.31±4.66＃＃254.01±25.38＃3 157.12±402.11＃40.75±3.36＃＃山楂葉總黃酮中劑量組9.30±1.16＃＃34.18±4.15＃＃206.89±17.10＃＃2 961.94±327.60＃＃42.34±4.65＃＃山楂葉總黃酮高劑量組10.25±1.41＃＃28.39±3.86＃＃193.17±21.84＃＃2 542.69±284.57＃＃45.40±4.18＃＃

3.5 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠糖代謝的影響 如表3 所示，與空白組比較，模型組大鼠FBG、FINS 水平及HOMA-IR 值均升高（P＜0.01）；與模型組比較，二甲雙胍組及山楂葉總黃酮各劑量組大鼠FBG、FINS 水平及HOMA-IR 值均降低 （P＜0.05，P＜0.01）。

表3 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠糖代謝的影響（±s，n＝10）Tab．3 Effects of hawthorn leaves flavonoids on glucose metabolism in PCOS rats （±s，n＝10）

表3 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠糖代謝的影響（±s，n＝10）Tab．3 Effects of hawthorn leaves flavonoids on glucose metabolism in PCOS rats （±s，n＝10）

注：與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別FBG／（mmol·L-1）FINS／（mIU·L-1）HOMA-IR空白組5.09±0.5215.46±1.403.49±0.41模型組7.64±0.67**20.90±2.52**7.09±0.87**二甲雙胍組5.27±0.41＃＃17.82±2.05＃＃4.17±0.42＃＃山楂葉總黃酮低劑量組6.74±0.89＃18.57±1.83＃5.56±0.61＃＃山楂葉總黃酮中劑量組6.58±0.57＃＃18.16±2.19＃5.31±0.58＃＃山楂葉總黃酮高劑量組5.39±0.71＃＃16.65±1.94＃＃3.98±0.42＃＃

3.6 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠脂代謝的影響如表4 所示，與空白組比較，模型組大鼠血清LDL、TC 及TG 水平升高（P＜0.01），HDL 水平降低（P＜0.05）；與模型組比較，二甲雙胍組及山楂葉總黃酮各劑量組大鼠血清LDL、TG 水平降低（P＜0.05，P＜0.01），HDL 水平均無明顯變化（P＞0.05），山楂葉總黃酮中、高劑量組大鼠血清TC 水平降低（P＜0.05，P＜0.01）。

表4 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠脂代謝的影響（mmol／L，±s，n＝10）Tab．4 Effects of hawthorn leaves flavonoids on lipid metabolism in PCOS rats （mmol／L，±s，n＝10）

表4 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠脂代謝的影響（mmol／L，±s，n＝10）Tab．4 Effects of hawthorn leaves flavonoids on lipid metabolism in PCOS rats （mmol／L，±s，n＝10）

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別LDLHDLTCTG空白組0.21±0.031.02±0.081.78±0.210.87±0.09模型組0.39±0.04**0.90±0.11*2.27±0.24**2.14±0.22**二甲雙胍組0.26±0.02＃＃0.95±0.132.05±0.331.52±0.18＃＃山楂葉總黃酮低劑量組0.34±0.05＃0.92±0.102.19±0.301.89±0.21＃山楂葉總黃酮中劑量組0.33±0.04＃＃0.96±0.121.96±0.25＃1.73±0.26＃＃山楂葉總黃酮高劑量組0.28±0.04＃＃0.94±0.151.91±0.12＃＃1.54±0.17＃＃

3.7 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠卵巢組織氧化應激水平的影響 如表5 所示，與空白組比較，模型組大鼠卵巢組織SOD、GSH-Px 活性降低 （P＜0.01），而MDA 水平升高（P＜0.01）；與模型組比較，二甲雙胍組及山楂葉總黃酮各劑量組大鼠卵巢組織SOD、GSH-Px 活性升高 （P＜0.01），而MDA 水平降低（P＜0.05，P＜0.01）。

表5 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠卵巢組織氧化應激的影響（±s，n＝10）Tab．5 Effects of hawthorn leaves flavonoids on oxidative stress in ovarian tissue of PCOS rats （±s，n＝10）

表5 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠卵巢組織氧化應激的影響（±s，n＝10）Tab．5 Effects of hawthorn leaves flavonoids on oxidative stress in ovarian tissue of PCOS rats （±s，n＝10）

注：與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

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3.8 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠卵巢組織Nrf2／HO-1 信號通路的影響 如圖3、表6 所示，與空白組比較，模型組大鼠卵巢組織Nrf2、HO-1 蛋白表達降低（P＜0.01）；與模型組比較，二甲雙胍組及山楂葉總黃酮各劑量組大鼠卵巢組織Nrf2、HO-1 蛋白表達升高（P＜0.05，P＜0.01）。

表6 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠卵巢組織Nrf2／HO-1 信號通路的影響（±s，n＝3）Tab．6 Effects of hawthorn leaves flavonoids on Nrf2／HO-1 signaling pathway in ovarian tissue of PCOS rats（±s，n＝3）

表6 山楂葉總黃酮對PCOS 大鼠卵巢組織Nrf2／HO-1 信號通路的影響（±s，n＝3）Tab．6 Effects of hawthorn leaves flavonoids on Nrf2／HO-1 signaling pathway in ovarian tissue of PCOS rats（±s，n＝3）

注：與空白組比較，**P ＜0.01；與模型組比較，＃P ＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別Nrf2／GAPDHHO-1／GAPDH空白組0.93±0.101.07±0.12模型組0.18±0.02**0.15±0.02**二甲雙胍組0.71±0.06＃＃0.56±0.05＃＃山楂葉總黃酮低劑量組0.38±0.04＃＃0.25±0.03＃山楂葉總黃酮中劑量組0.66±0.08＃＃0.44±0.05＃＃山楂葉總黃酮高劑量組0.75±0.07＃＃0.52±0.06＃＃

圖3 各組大鼠卵巢組織Nrf2 及HO-1 蛋白表達Fig．3 Nrf2 and HO-1 protein expressions in rat ovarian tissue of each group

4 討論

本研究通過高脂飼料喂食及灌胃來曲唑法成功復制了大鼠PCOS 模型，并證實山楂葉總黃酮能夠使PCOS 大鼠紊亂的動情周期恢復，減輕卵巢組織病理損傷變化。激素水平失衡是引起代謝紊亂和生殖功能障礙的重要原因，其中FSH、LH、T、AMH及E2等激素對卵巢正常功能的發揮具有關鍵性的影響［12］。FSH 的主要作用為促進卵泡成熟，LH 可以調節月經周期及促進合成雌激素、雄激素；T 能夠影響卵泡成熟的生理過程，其水平增加會使卵泡的發育成熟過程被抑制，并能降低卵母細胞數量；AMH 的水平與竇狀卵泡數呈正比，E2具有較強的抗雄激素作用［13］。本研究結果發現，山楂葉總黃酮能夠增加血清FSH 活性及E2水平，降低LH 活性及T、AMH 水平，可以通過影響體內激素水平改善PCOS 大鼠卵巢內環境。

糖代謝紊亂是PCOS 病因研究中公認的重要發病機制之一，FBG、FINS 及HOMA-IR 是反映糖代謝紊亂的常用指標，具體表現為FBG、FINS 水平及HOMA-IR 值升高［14］。糖代謝紊亂可以對下丘腦-垂體-卵巢軸造成影響，干擾卵子的生成及排出過程，進而引起女性內分泌系統和生殖功能的持久性損傷；糖代謝紊亂也可以通過抑制性激素結合球蛋白的合成，升高游離T 水平，使卵巢合成雄激素增加并促進釋放，導致PCOS 發生［15］。本研究結果發現，山楂葉總黃酮組大鼠FBG、FINS、LDL、TG、TC 水平及HOMA-IR 值均有不同程度的降低，表明山楂葉總黃酮具有改善PCOS 大鼠糖脂代謝紊亂作用，進而緩解PCOS 癥狀。

氧化應激不僅在各種代謝性疾病、衰老、腫瘤及慢性炎癥中發揮著重要作用，同時也參與了PCOS 的發生及發展［16］。研究發現，卵巢的內分泌功能可以受到氧化應激的影響，導致卵泡發育受損、卵泡閉鎖及成熟障礙；氧化應激也可使卵巢雄激素相關合成酶的表達增加，促進雄性激素的生成和分泌，從而加速PCOS 的發生及進展［17］。因此，抑制氧化應激是預防和治療PCOS 的潛在手段。周少英等［18］研究發現，山楂葉總黃酮可以減輕糖尿病大鼠肝組織損傷，該作用與提高機體抗氧化酶活性，進而使氧化應激損傷降低有關。在大鼠肺缺血再灌注損傷模型中，山楂葉總黃酮可以升高SOD、CAT 活性和降低MDA 水平，通過增加自由基清除能力及減輕氧化應激損傷發揮保護肺組織損傷作用［19］。Nrf2／HO-1 信號通路是機體抗氧化反應的主要調節通路，Nrf2 具有調節氧化應激反應作用，而HO-1 是Nrf2 發揮抗氧化活性的重要媒介［20］。研究證實，HO-1 的高表達與PCOS 發病風險的增加密切相關［21］。Li 等［22］研究發現，NADPH 氧化酶4 缺失可能通過激活Nrf-2／HO-1 信號通路，減輕氧化應激，從而改善PCOS。本研究結果發現，山楂葉總黃酮組大鼠卵巢組織SOD、GSH-Px 活性及Nrf2、HO-1 蛋白表達升高，MDA 水平降低，表明山楂葉總黃酮能夠活化PCOS 大鼠Nrf2／HO-1 信號通路進而發揮抗氧化應激作用。

綜上所述，山楂葉總黃酮能夠活化PCOS 大鼠卵巢組織Nrf2／HO-1 信號通路發揮抗氧化應激作用，改善糖脂代謝異常及胰島素敏感性，調節激素水平，減輕卵巢病理變化，恢復紊亂的動情周期。本研究結果可為山楂葉總黃酮預防和治療PCOS 提供科學依據，也有助于擴展山楂葉總黃酮的應用范圍，但對于作用機制及靶點的研究還有待深入。