老年人群不同性別間淋巴細(xì)胞亞群及細(xì)胞因子的檢測分析

彭聰,王亮,肖漓,肖軍,張金花,王天天,翟武杰,馬偉鳳,李春暉,湯玉萌,張明,程鵬,謝金鳳,程代玉,孫正中

1.河北北方學(xué)院研究生學(xué)院,張家口 075000;2.中國人民解放軍總醫(yī)院第八醫(yī)學(xué)中心,a 老年醫(yī)學(xué)科,b 呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)部研究所 北京市器官移植與免疫調(diào)節(jié)重點實驗室

隨著增齡與衰老的發(fā)展,老年人群不同性別間出現(xiàn)了差異性的免疫系統(tǒng)失調(diào),即存在不同類型的細(xì)胞亞型及細(xì)胞因子的表達(dá)異常。研究[1-2]發(fā)現(xiàn),與免疫系統(tǒng)相關(guān)的多種疾病中,結(jié)核、潰瘍性結(jié)腸炎、銀屑病、乙型肝炎及其他感染性疾病均不同程度體現(xiàn)了男性人群多發(fā);而自身免疫性肝炎、幽門螺桿菌感染及系統(tǒng)性紅斑狼瘡則表現(xiàn)為女性高發(fā)[3-4]。老年人群性別間的免疫差異評價對預(yù)測不同性別存在的危險因素及疾病發(fā)展、探討老年人群不同性別間的機體差異及免疫衰老等十分重要。本文對老年人群不同性別間淋巴細(xì)胞亞群+細(xì)胞因子進(jìn)行檢測與分析,為老年患者診療及科研,提供更多角度的研究。

1 資料與方法

1.1 研究資料 回顧性分析2021年12月23日至2022年3月24日于中國人民解放軍總醫(yī)院第八醫(yī)學(xué)中心老年醫(yī)學(xué)科就診的109例患者病歷資料。記錄既往病史(高血壓、糖尿病、冠心病、惡性腫瘤、骨折、急危重癥病史、輸血史、免疫功能缺陷等),年齡,性別,身高,體重,體重指數(shù)(BMI)。按性別分為男性組57例,女性組52例。2組患者身高、體重比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。2組年齡、體重指數(shù)(BMI)比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。見表1。本研究通過中國人民解放軍總醫(yī)院第八醫(yī)學(xué)中心倫理審查委員會批準(zhǔn)。

表1 2組患者一般情況比較

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):患者為大于60歲的老年人群。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)既往存在以骨性損害為特征的骨科疾病;(2)原發(fā)性免疫功能障礙性疾病、獲得性免疫功能缺陷性疾病、血液系統(tǒng)疾病、精神障礙疾病、3個月內(nèi)存在重型感染或異體輸血;(3)惡性腫瘤及主要臟器功能衰竭或器官移植患者;(4)1年內(nèi)服用免疫調(diào)節(jié)制劑及糖皮質(zhì)激素或其他激素補充治療的患者等。

1.3 淋巴細(xì)胞亞群檢測 將20 μL淋巴細(xì)胞亞群檢測試劑(CD3/CD8/CD45/CD4/CD16+56/CD19)加到絕對計數(shù)管的底部;采用反向移液法吸取50 μL充分混勻的EDTA抗凝全血,加入到絕對計數(shù)管底部;震蕩混勻后室溫避光孵育15 min;每管加入450 μL溶血素(FACS Lysing solution：蒸餾水=1：10),充分混勻后,室溫避光孵育15 min;利用FACS Canto Plus流式細(xì)胞儀(美國BD)獲取和分析淋巴細(xì)胞亞群百分比和絕對數(shù)。

1.4 細(xì)胞因子檢測 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測,向樣品管中加入25 μL實驗緩沖液,再加入25 μL血漿和25 μL檢測抗體;再加入25 μL捕獲微球抗體;室溫[(25±1)℃]避光震蕩孵育2 h(400～500 r/min);加入25 μL SA-PE;室溫[(25±1)℃]避光震蕩孵育0.5 h(400～500 r/min);加入500 μL 1×洗滌緩沖液,渦旋數(shù)秒,300～500 g離心5 min,緩慢傾倒出液體,倒扣于吸水紙上;根據(jù)FACS Canto Plus流式細(xì)胞儀(美國BD)需求,向每管中加入120 μL洗滌緩沖液;渦旋10 s將微球重懸后立即上機檢測,檢測后數(shù)據(jù)導(dǎo)入LEGEND plex v8.0軟件進(jìn)行分析獲取。

2 結(jié)果

2.1 2組淋巴細(xì)胞亞群比較 男性組中自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)百分比顯著高于女性組(P=0.01),而女性組中B細(xì)胞百分比與絕對值顯著高于男性組(P<0.001),其余細(xì)胞亞群差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。見表2。

表2 2組患者淋巴細(xì)胞亞群的比較[M(P25,P75)]

2.2 2組細(xì)胞因子比較 2組白細(xì)胞介素、干擾素等細(xì)胞因子比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

本研究顯示,在男性人群中NK細(xì)胞比例顯著高于女性組,NK細(xì)胞是一類大顆粒淋巴細(xì)胞,廣泛存在于人體外周組織中,可以分化為具有各種功能的亞型[5-6];NK細(xì)胞也可行使防御感染、破壞腫瘤細(xì)胞等功能,car-NK細(xì)胞治療就是基于其存在的免疫學(xué)機制[7];NK細(xì)胞是無須預(yù)刺激就可直接溶解破壞腫瘤細(xì)胞或感染細(xì)胞;NK細(xì)胞通過各種途徑[8-10]降解靶定細(xì)胞的細(xì)胞膜,破壞靶細(xì)胞完整性,進(jìn)而發(fā)揮溶細(xì)胞效應(yīng)。因此,老年女性人群因其NK細(xì)胞較老年男性人群更低,導(dǎo)致NK細(xì)胞介導(dǎo)的多種反應(yīng)活動下降,這致使老年女性會進(jìn)一步暴露在NK細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)中,如感染、腫瘤發(fā)生以及獲得性免疫反應(yīng)失調(diào)等。

本研究中,老年女性組B細(xì)胞絕對值與比例顯著高于老年男性組,B淋巴細(xì)胞來源于骨髓多能干細(xì)胞,其主要分布在淋巴結(jié)皮質(zhì)淺層淋巴小結(jié)和脾臟淋巴小結(jié),B淋巴細(xì)胞在抗原刺激下可進(jìn)一步分化為漿細(xì)胞,漿細(xì)胞可合成和分泌抗體,B淋巴細(xì)胞在機體內(nèi)主要參與各種免疫活動。研究表明,人類B淋巴細(xì)胞百分比和數(shù)量隨著年齡的增長而顯著降低[11-12]。B細(xì)胞通常被分為B1與B2亞型,B2細(xì)胞通常參與體液免疫應(yīng)答,而B1細(xì)胞則在機體內(nèi)出現(xiàn)較早,且不依賴于骨髓細(xì)胞,產(chǎn)生后會進(jìn)一步成為具有自我更新能力的長壽細(xì)胞,B1細(xì)胞本身就能產(chǎn)生多種自身抗原的抗體,故多與自身免疫性疾病相關(guān)[13]。B2細(xì)胞及通常意義的B細(xì)胞,在抗原刺激及Th細(xì)胞輔助下被活化為B細(xì)胞,行使體液免疫功能,B2細(xì)胞還具有抗原提呈和免疫調(diào)節(jié)功能[14]。因此,B淋巴細(xì)胞增殖異常可能介導(dǎo)不同群體在抗原提呈功能、免疫調(diào)節(jié)功能、自身免疫性疾病誘發(fā)功能、黏膜免疫應(yīng)答功能等方面失調(diào),進(jìn)一步使人群暴露于各種高發(fā)及易感風(fēng)險中。

綜上所述,本研究通過比較老年人群不同性別之間的免疫衰老后的失調(diào),觀察到了不同性別的老年人所暴露的危險因素不盡相同,而這些可以被觀察到的失調(diào)差異表達(dá),可進(jìn)一步指導(dǎo)我們評價老年人群的免疫風(fēng)險及患病風(fēng)險。