上皮性卵巢癌組織POSTN、COL11A1表達變化及其與臨床病理特征和預后的關系

侯海俠，劉忠杰，賈衛靜，杜素果，李桂芬

衡水市人民醫院婦科，河北衡水053000

卵巢癌是女性生殖系統常見的惡性腫瘤之一，全球每年新發病例約24萬例、死亡病例達到15萬例［1］。上皮性卵巢癌（EOC）是卵巢癌最常見的病理類型，占90%以上。EOC起病隱匿，早期無明顯癥狀，大多數患者就診時已為中晚期，錯過了最佳治療時機，預后較差［2］。骨膜蛋白（POSTN）是一種分泌型細胞外基質蛋白，與整合素結合能夠促進上皮細胞的黏附和遷移，從而參與組織發育和骨再生、修復等生理過程［3］。有研究發現，POSTN能夠通過與腫瘤細胞表面的整合素受體結合，促進血管內皮生長因子C表達和淋巴管生成，繼而引起宮頸癌細胞的增殖、侵襲和遷移［4］。Ⅺ型膠原α1（COL11A1）蛋白是一種纖維狀膠原蛋白，也是細胞外基質最重要的組成成分。近年研究發現，在宮頸癌［5］、子宮內膜癌［6］中均存在COL11A1高表達現象，并且其高表達能夠促進腫瘤的侵襲和轉移。但目前POSTN、COL11A1表達與EOC的關系尚不完全清楚。本研究探討了EOC組織POSTN、COL11A1表達變化及其與臨床病理特征和預后的關系。現報告如下。

1.料與方法

1.1.床資料 選擇2018年1月—2019年12月衡水市人民醫院婦科收治的EOC患者122例。所有患者經術后組織病理學檢查明確診斷。納入標準：①符合EOC診斷標準；②初診，入院前未接受任何抗腫瘤治療；③接受外科手術治療；④臨床病理資料和隨訪資料完整；⑤年齡＞18歲。排除標準：①合并子宮內膜異位癥或多囊卵巢綜合征者；②合并其他部位惡性腫瘤者；③合并嚴重感染性疾病或自身免疫性疾病者；④妊娠期或哺乳期婦女。患者年齡30～78（56.67 ± 6.34）歲，其中≤60歲64例、＞60歲58例；病理類型：漿液性74例，非漿液性48例；腫瘤最大徑：＞3 cm 74例，≤3 cm 48例；FIGO分期：Ⅰ、Ⅱ期76例，Ⅲ期46例；組織分化程度：高中分化54例，低分化68例；有淋巴結轉移46例，無淋巴結轉移76例。同期另選在衡水市人民醫院婦科接受輸卵管切除術的輸卵管妊娠患者60例，年齡28～79（56.05 ± 6.11）歲，均經術后組織病理學檢查證實為正常輸卵管上皮組織，并排除子宮內膜異位癥、多囊卵巢綜合征、嚴重感染性疾病、自身免疫性疾病及其他部位惡性腫瘤者。兩組年齡具有可比性。本研究經衡水市人民醫院倫理委員會批準（批準文號：2018-0214）。所有研究對象或其家屬知情同意并簽署書面知情同意書。

1.2.OSTN、COL11A1蛋白表達檢測 采用免疫組化法。取術中獲取的EOC組織和正常輸卵管上皮組織，10%中性甲醛固定16 h，常規石蠟包埋，4 μm厚連續切片。在65 ℃烤箱中烤片2 h，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，在檸檬酸鹽抗原修復緩沖液中熱修復，3% H2O2去除內源性過氧化物酶。5%正常山羊血清封閉2 h，分別滴加POSTN、COL11A1兔單克隆抗體，4 ℃孵育過夜。次日，滴加辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔IgG二抗，室溫孵育2 h。DAB顯色，蘇木素復染，鹽酸乙醇分化，自來水沖洗返藍，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固，顯微鏡下拍照觀察。以PBS代替一抗作為陰性對照，以已知POSTN、COL11A1蛋白陽性表達的宮頸癌組織切片作為陽性對照。

采用雙盲法由兩位病理科醫師獨立閱片，結果不一致時協商解決。POSTN、COL11A1蛋白陽性染色定位于細胞質、細胞膜或細胞核，呈棕黃色顆粒。染色強度評分：以陽性細胞呈色反應為準，無色為0分、淺棕黃色為1分、深棕黃色為2分。隨機選取5個200倍視野，計數每視野陽性細胞數和細胞總數，計算陽性細胞比例。陽性細胞比例評分：無為0分，＜25%為1分，25%～50%為2分，＞50%為3分。根據染色強度和陽性細胞比例半定量分析，染色強度評分與陽性細胞比例評分乘積≥2為陽性。

1.3.訪 所有EOC患者出院后采取電話或門診復查形式定期隨訪3年，第1年每個月隨訪1次，第2年每3個月隨訪1次，第3年每3～6個月隨訪1次。隨訪截至2023年1月1日，隨訪終點為患者死亡或至隨訪截至日期，記錄患者生存時間。

1.4.計學方法 采用SPSS23.0統計軟件。計數資料比較采用χ2檢驗。相關性分析采用Spearman秩相關分析。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log-rank檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2.果

2.1.OC組織與正常輸卵管上皮組織POSTN、COL11A1蛋白表達比較 EOC組織POSTN、COL11A1蛋白陽性表達率分別為69.67%（85/122）、67.21%（82/122），正常輸卵管上皮組織分別為26.67%（16/60）、30.00%（18/60）。EOC組織POSTN、COL11A1蛋白陽性表達率均高于正常輸卵管上皮組織（χ2分別為30.118、22.499，P均＜0.01）。

2.2 EOC組織POSTN、COL11A1蛋白表達的關系 Spearman秩相關分析顯示，EOC組織POSTN蛋白表達與COL11A1蛋白表達呈正相關關系（r=0.722，P＜0.05）。

2.3.OC組織POSTN、COL11A1蛋白陽性表達與臨床病理特征的關系 見表1。

表1.OC組織POSTN、COL11A1蛋白陽性表達與臨床病理特征的關系

2.4.OC組織POSTN、COL11A1蛋白表達與預后的關系 122例EOC患者隨訪期間死亡41例，失訪3例，3年總體生存率為65.55%（78/119）。POSTN蛋白陽性表達者與陰性表達者3年累積生存率分別為65.60%、77.30%，二者生存曲線比較差異有統計學意義（Log-rankχ2=14.291，P＜0.05）。COL11A1蛋白陽性表達者與陰性表達者3年累積生存率分別為68.80%、79.60%，二者生存曲線比較差異有統計學意義（Log-rankχ2=13.870，P＜0.05）。見圖1。

圖1.OC組織不同POSTN、COL11A1蛋白表達者的生存曲線

3.論

卵巢癌是女性生殖系統常見的惡性腫瘤之一，在我國每年新發病例達5.2萬例、死亡病例達2.3萬例［7］。EOC是卵巢癌最常見的病理類型，占90%以上。由于卵巢位于盆腔深部，卵巢癌早期無特異性癥狀，大多數患者就診時已為中晚期，錯過了最佳治療時機，預后較差［2］。近年來，隨著醫療技術進步，EOC無論是在外科手術治療方案上還是在藥物治療方案上都在不斷優化，使患者預后得到明顯提升。但仍有部分患者出現腫瘤耐藥或治療抵抗，術后發生復發或轉移，導致預后不良［2］。目前，臨床上主要根據FIGO分期、組織分化程度等臨床病理特征評估EOC患者預后，尚無有效評估EOC預后的腫瘤標志物。因此，深入研究EOC的發病機制，尋找能夠預測EOC治療結局的腫瘤標志物，具有重要的臨床意義。

POSTN基因定位于人染色體13q13.3，其編碼蛋白是一種可溶性細胞外基質蛋白，能夠與細胞外基質結合，從而參與炎癥、心血管疾病、腫瘤等病理生理過程［3］。近年研究發現，宮頸癌組織POSTN高表達，其高表達能夠促進淋巴管生成以及腫瘤細胞淋巴結轉移［4］。鑒于淋巴結轉移是EOC較為常見的病理特征之一［8］。我們推測POSTN在EOC的發生、發展中可能發揮重要作用。本研究結果發現，EOC組織POSTN蛋白陽性表達率顯著高于正常輸卵管上皮組織；FIGO分期Ⅲ期、有淋巴結轉移的EOC組織POSTN蛋白陽性表達率高于FIGO分期Ⅰ、Ⅱ期及無淋巴結轉移的EOC組織。提示POSTN能夠參與EOC的發生、發展。在EOC組織中POSTN表達上調可能與轉錄調控異常有關。有研究報道，EOC組織轉錄因子TWIST1表達明顯升高，TWIST1能夠通過與POSTN基因啟動子結合，在轉錄水平上促進POSTN表達［9］。LIN等［10］研究報道，POSTN還能通過自分泌作用與EOC細胞表面的整合素β受體結合，激活細胞外信號調節激酶和核因子κB，促進腫瘤細胞增殖和侵襲。此外，POSTN還能趨化THP-1細胞，促進其向M2型巨噬細胞極化，促進腫瘤細胞免疫逃逸，導致腫瘤進展［10］。本研究結果顯示，POSTN蛋白陽性表達者與陰性表達者3年累積生存率分別為65.60%、77.30%，二者生存曲線比較差異有統計學意義。提示POSTN蛋白陽性表達的EOC患者預后相對較差。究其原因，POSTN蛋白表達升高能夠促進EOC進展和耐藥性形成，導致患者預后不良。有學者在原代漿液性卵巢癌細胞系中發現，對阿霉素和甲氨蝶呤耐藥的腫瘤細胞POSTN蛋白表達明顯升高，敲低POSTN后，腫瘤細胞恢復對化療藥物的敏感性［11］。因此，POSTN有可能成為評估EOC預后的腫瘤標志物，并且以POSTN為靶點的治療有可能成為EOC新的治療策略。

COL11A1基因定位于人染色體1p21.1，其編碼蛋白屬于膠原蛋白家族成員，能夠參與構成細胞外基質骨架及骨形成和發育等生物學過程。研究表明，在卵巢癌腫瘤微環境中COL11A1蛋白陽性的腫瘤相關成纖維細胞浸潤增加并能促進細胞外基質產生，導致腫瘤化療抵抗形成，與患者預后不良有關［12］。本研究結果顯示，EOC組織COL11A1蛋白陽性表達率顯著高于正常輸卵管上皮組織；FIGO分期Ⅲ期、有淋巴結轉移的EOC組織COL11A1蛋白陽性表達率高于FIGO分期Ⅰ、Ⅱ期及無淋巴結轉移的EOC組織。提示COL11A1能夠參與EOC的發生、發展。EOC組織COL11A1表達升高可能與miRNA表達調控有關。研究發現，miR-335能夠結合COL11A1 mRNA的3'非編碼區，降低COL11A1 mRNA穩定性，抑制COL11A1蛋白表達，而在卵巢癌細胞中miR-335表達顯著降低，導致COL11A1蛋白表達升高［13］。有研究證實，在EOC中COL11A1能夠激活細胞外信號調節激酶，誘導p65易位進入細胞核，p65與胰島素樣生長因子結合蛋白2啟動子結合，誘導轉化生長因子β表達，促進EOC細胞增殖和侵襲［14］。本研究結果顯示，COL11A1蛋白陽性表達者與陰性表達者3年累積生存率分別為68.80%、79.60%，二者生存曲線比較差異有統計學意義。提示COL11A1蛋白陽性表達的EOC患者預后相對較差。究其原因，一方面是COL11A1蛋白表達升高能夠通過促進EOC細胞TWIST1表達，促進腫瘤細胞發生上皮間質轉化，繼而導致腫瘤侵襲和轉移［15］；另一方面，COL11A1蛋白表達升高能夠增強EOC細胞對化療藥物的耐藥性，降低化療效果，導致患者預后不良［16］。因此，COL11A1有可能成為評估EOC預后的腫瘤標志物。

本研究Spearman秩相關分析發現，EOC組織POSTN蛋白表達與COL11A1蛋白表達呈正相關關系，提示二者在EOC的發生、發展中可能存在協同作用。PARK等［17］研究表明，在胰腺癌腫瘤微環境中腫瘤相關成纖維細胞能夠分泌POSTN和酸性分泌蛋白，促進基質結締組織COL11A1沉積，導致胰腺癌進展。但目前二者在EOC中的協同作用機制尚不清楚，有待于進一步研究。

綜上所述，EOC組織POSTN、COL11A1高表達，二者表達變化與FIGO分期、淋巴結轉移以及預后密切相關。但本研究尚存在一定不足之處，如樣本量較小、未對不同病理類型的EOC分層分析，有待于今后進一步研究。