規模養殖場口蹄疫免疫程序優化研究

楊蘭蘭，金衛華*，王安奎，高月娥，李金存，劉美艷

（1.昆明市動物疫病預防控制中心，云南昆明 650106；2.云南省草地動物科學研究院，云南昆明 650212；3.尋甸縣動物疫病預防控制中心，云南昆明 655200）

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的感染牛、羊等偶蹄動物的一種接觸性、急性和烈性傳染病，一旦發生疫情，將會給養殖業帶來巨大的經濟損失，我國將其規定為一類動物疫病和強制免疫病種，世界衛生組織也將其列為A 類傳染病之首。作為世界流行性的動物疫病，目前已發現了80多個口蹄疫病毒亞型，我國以O 型為主，少見A型。我國在養殖生產中對口蹄疫防控主要以預防為主，實施春秋兩季集中強制免疫口蹄疫疫苗，這是預防該病重要措施。

本研究前期通過在昆明市范圍內隨機選取42家規模養殖場（戶）、采集854 份血清樣品進行O型口蹄疫免疫抗體監測，群體免疫抗體合格率僅為68.7%，低于國家標準。一定程度上表明在實際生產過程中，因免疫間隔時間過長，僅靠春秋兩季集中免疫不能做到口蹄疫抗體保護水平常年維持在70%以上，可能存在發生口蹄疫疫情風險的隱患。因此，本研究通過在犢牛和能繁母牛中開展O 型口蹄疫免疫效果試驗，免疫前后定期采集牛只血清，采用ELISA 方法實時監測免疫抗體水平，準確掌握口蹄疫疫苗免疫效果，摸清口蹄疫抗體消長規律，進而制定科學的口蹄疫免疫程序并進行推廣應用，有效提高口蹄疫綜合防控水平。

1 材料與方法

1.1 試驗地點和時間

2021 年8 月—2022 年7 月，在昆明市某規模養殖場開展口蹄疫免疫程序優化試驗。該場嚴格落實生物安全措施，飼養管理規范，專人負責飼喂，實行定期消毒。每年3 月和9 月按國家要求實行口蹄疫強制免疫。

1.2 試驗動物及分組

選擇健康犢牛20 頭，90 日齡左右、未接種過口蹄疫疫苗、體重120kg 左右，隨機分成A 組和B 組2 個試驗組，每組10 頭；隨機選取胎次為2～5 胎的健康能繁母牛30 頭，試驗期間均正常采食和飲水，觀察并記錄試驗動物臨床表現。

1.3 試驗疫苗

口蹄疫O 型、A 型二價滅活疫苗（OHM/02株+AKT-Ⅲ株，2021016）均購自天康生物制藥有限公司。

1.4 試驗方法

1.4.1 免疫時間的確定

《2021 年國家動物疫病強制免疫計劃》中指出“口蹄疫群體免疫密度應常年保持在90%以上，其中應免畜禽免疫密度應達到100%，口蹄疫免疫抗體合格率應常年保持在70%以上”。因此，為確保養殖場牲畜群體常年處于抗體保護狀態，本研究將群體免疫抗體合格率降低至70%時作為為最佳免疫時間。

1.4.2 犢牛免疫程序試驗設計

首次免疫。采集試驗犢牛頸靜脈血進行口蹄疫O 型母源抗體監測，確定犢牛首免時間，免疫劑量分別為A 組1mL/頭、B 組2mL/頭。首免后第30、60、90 天采集頸靜脈血，進行口蹄疫O型免疫抗體監測。二次免疫。首免后根據免疫抗體水平消長情況，在群體免疫抗體合格率降低至70%時作為二免時間。A、B 組二免劑量均為2.0mL/頭。二免后第30、60、90、120 天采集頸靜脈血，進行口蹄疫O 型、A 型免疫抗體監測。加強免疫。二免后群體免疫抗體合格率降低至70%時作為加強免疫時間。A、B 組加強免疫劑量均為2.0mL/頭。加強免疫后第30、60、90、120天采集頸靜脈血，進行口蹄疫O 型、A 型免疫抗體監測。

1.4.3 能繁母牛免疫程序試驗設計

首次免疫。通過監測基礎抗體水平確定能繁母牛首免時間，首免免疫劑量為2mL/頭。首免后第30、60、70、80、90 天采集頸靜脈血，進行口蹄疫O 型免疫抗體監測。二次免疫。首免后根據免疫抗體水平消長情況，群體免疫抗體合格率降至70%時作為二免時間，二免免疫劑量為2mL/頭。二免后第30、60、90、120 天采集頸靜脈血，進行口蹄疫O 型免疫抗體監測。加強免疫。二免后群體免疫抗體合格率降至70%時作為加強免疫時間，加強免疫劑量為2mL/頭。加強免疫后第30、60、90、120、150 天采集頸靜脈血，進行口蹄疫O 型免疫抗體監測。

1.5 檢測試劑

口蹄疫O 型抗體ELISA 檢測試劑盒購自北京萬博百測生物科技有限公司聯合生產。

1.6 檢測方法及結果判定

應用O 型口蹄疫抗體阻斷ELISA 檢測試劑盒對牛血清進行O 型口蹄疫免疫抗體監測，具體檢測方法及結果判定均按照試劑盒說明進行操作。

2 結果與分析

2.1 犢牛免疫抗體監測結果

由表1 可知，犢牛在3 月齡時母源抗體合格率僅為15%，抗體水平幾乎為零。為確定免疫劑量對抗體水平的影響程度，本試驗設定A、B 兩組犢牛分別免疫口蹄疫疫苗1 和2mL。A、B 兩組犢牛首免后30d 群體抗體合格率分別為60%和70%，群體平均抗體合格率為65%，已低于70%的臨界抗體保護水平。B 組犢牛免疫抗體水平略高于A 組，在免疫時應注射劑量應選擇2mL為佳。首免后犢牛群體高抗體水平維護時間較短，應及時進行第二次免疫。

表1 犢牛首免后口蹄疫O 型抗體檢測結果

選取犢牛首免后30d 作為二免時間。由表2可知，二免后犢牛的群體免疫抗體合格率迅速上升，在30d 時就達到很高水平，A、B 兩組分別為90%和100%，群體平均免疫抗體水平為95%；之后又逐漸升高，在60d 時達到頂峰，群體免疫抗體合格率均為100%，這種頂峰一直維持到90d；隨后又逐漸下降，A、B 兩組在120d 時群體抗體合格率分別降至70%和80%，群體免疫抗體合格率為75%，已接近70%的臨界保護水平，二免免疫期持續4 個月，這時應進行加強免疫。

表2 犢牛二免和加強免疫后口蹄疫O 型抗體檢測結果

選取犢牛二免后120d 作為加強免疫時間。由表2 可知，加強免疫后犢牛群體免疫抗體水平在30d 時就達到頂峰，一直維持到90d；之后逐漸下降，A、B 兩組在120d 時群體免疫抗體合格率分別降至80%和90%，群體平均抗體合格率為85%，免疫期持續了4 個月。

2.2 能繁母牛免疫抗體監測結果

由表3 可知，首次采樣時能繁母牛口蹄疫O型免疫抗體水平僅為63.3%，已低于70%的抗體保護水平，需盡早盡快進行免疫。在本試驗中，通過對30 頭能繁母牛進行口蹄疫首次免疫，在30d 時抗體合格率達到90%的高水平，之后在60d 降低至73.3%，70d 時降至66.7%，在第70d時進行二次免疫，提高抗體水平。

表3 能繁母牛首免后口蹄疫O 型抗體檢測結果

選取能繁母牛首免后60d 作為二免時間。由表4 可知，能繁母牛二免后30d 群體免疫抗體水平為83.3%，在60d 時快速升高至96.7%，隨后逐漸下降，在90d 時降至80%，120d 時達到70%的臨界保護水平，這時應及時進行加強免疫。二免免疫期持續了4 個月。

表4 能繁母牛二免后口蹄疫O 型抗體檢測結果

選取能繁母牛二免后120d 作為加強免疫時間。由表5 可知，能繁母牛在加強免疫后第30d、60d 群體免疫抗體水平逐漸上升，抗體合格率分別為83.3%和93.3%；在90d 時抗體水平達到最高峰，群體抗體合格率達為100%；隨后在120d和150d 逐漸下降，群體抗體合格率分別降至86.7%和73.3%，免疫期持續了4 個月。

表5 能繁母牛加強免疫后口蹄疫O 型抗體檢測結果

3 討論

口蹄疫免疫抗體監測是科學評價口蹄疫疫苗免疫質量的有效手段，也是科學制定口蹄疫免疫程序的重要依據。若體內抗體沒有達到保護水平也就是處于免疫空白期時，容易受到口蹄疫病毒的感染。犢牛出生后隨著母乳的持續攝入，體內會在一定時間內維持一定量的母源抗體，但隨著時間的延長，母源抗體水平會逐漸下降，甚至低于保護水平。為保障畜牧業生產安全、動物產品質量安全、公共衛生安全、生態安全“四個安全”，結合當地動物防疫實際，根據實時跟蹤監測犢牛和能繁母牛口蹄疫抗體水平，對現執行的口蹄疫免疫程序進行調整優化，提高規模養殖場牛群群體免疫保護力。

本研究表明，犢牛90 日齡母源抗體水平僅為15%，幾乎為零，存在較大的疫病感染風險，犢牛需盡快進行首免[1]。首免后30d A 組和B 組免疫抗體水平分別為60%和70%，說明首免后抗體在體內存在時間較短，這與王雪偉等[2]人研究結果基本一致，應及時進行第二次免疫，且免疫劑量以B 組的2mL 為最佳，后續A 組和B 組的免疫劑量均為2mL。二免后抗體水平迅速上升并在第60天時達到高峰100%，這與仇普斌等研究一致[3]，隨后逐漸下降，第120 天平均群體免疫抗體合格率降至75%，接近抗體臨近保護水平，這時可以進行加強免疫。加強免疫后高抗體水平維持時間較長，在第120 天時群體平均抗體合格率依然達85%。

該場按照國家要求執行春秋兩季集中強制免疫，首次采樣時能繁母牛群體免疫抗體合格率已低于臨界保護水平，首免后30d 群體抗體合格率為90%，在第70 天降至66.7%，這時進行第二次免疫，與王忠山等[4]研究存在一定差別，這可能與有些能繁母牛在生產后未能及時免疫，在這次免疫后免疫抗體水平維持時間短造成。二免和加強免疫后高抗體水平均能維持較長時間，一直到第120 天抗體水平才接近臨界保護值。

4 結論

從上述分析可以看出，規模場內90 日齡犢牛在首次免疫30d 后需進行第二次免疫，以后每隔4 個月免疫1 次。能繁母牛實施每年3 次的口蹄疫疫苗免疫，也就是每年3 月、7 月、11 月分別進行免疫，確保場內牛群可以常年處于高免狀態。