嗎替麥考酚酯片與原研制劑溶出行為一致性評價

伊磊,劉慶曉,鄭華,盧紅華,張貴民

(魯南制藥集團股份有限公司 國家手性制藥工程技術研究中心,山東 臨沂 273400)

嗎替麥考酚酯是麥考酚酸(MPA)的2-乙基酯類衍生物。MPA是高效、選擇性、非競爭性、可逆性的次黃嘌呤單核苷酸脫氫酶(IMPDH)抑制劑,可抑制鳥嘌呤核苷酸的經典合成途徑,抑制有絲分裂和同種特異性刺激物引起的T和B淋巴細胞增殖,還可抑制B淋巴細胞產生抗體,抑制淋巴細胞和單核細胞糖蛋白的糖基化,因此可抑制白細胞進入炎癥和移植物排斥反應部位[1]。嗎替麥考酚酯片由羅氏(Roche)研發,與皮質類固醇以及環孢素或他克莫司同時應用,適用于治療接受同種異體腎臟、肝臟移植的患者中預防器官的排斥反應,以及適用于III-V型成人狼瘡性腎炎患者的誘導期治療和維持期治療[2-4]。嗎替麥考酚酯片先后在美國、歐盟、日本和中國等國家上市,商品名為Cellcept?,規格為0.5 g。之后,原研地產化也在中國獲批上市,商品名為驍悉?,規格為0.5 g。

固體藥物的溶出對吸收具有重要影響,因此藥物在體外的溶出行為有可能預測其體內行為,同時藥物體外溶出行為能夠在一定程度上反映出制劑的質量[5]。本研究對自研制劑和原研制劑在模擬人體消化道內體液的四種溶出介質中的溶出曲線進行研究,并對其進行體外溶出行為的一致性評價。

1 儀器與材料

1.1 儀器

UDT-812A-12型智能溶出儀(祿亙儀器設備有限公司);FADT-1200RC型智能溶出儀(上海富科思分析儀器有限公司);MDS-600PL型真空脫氣機(祿亙儀器設備有限公司);Evolution 300型紫外可見分光光度計(型號:,賽默飛世爾科技有限公司);XS205型電子天平(梅特勒托利多科技有限公司);MS 204 TS型電子天平(梅特勒托利多科技有限公司);Sevencompact 型pH計(梅特勒托利多科技(中國)有限公司)。

1.2 試藥與試劑

嗎替麥考酚酯對照品(含量:99.8%,中檢院);嗎替麥考酚酯片原研制劑(商品名:驍悉?,規格:0.5 g,批號:M3567B01,上海羅氏制藥有限公司);嗎替麥考酚酯片(規格:0.5 g,批號:ZY01,ZY02,ZY03,魯南制藥集團股份有限公司)。

乙腈為色譜純(Merk);鹽酸,氫氧化鈉,乙酸鈉,冰醋酸,磷酸二氫鉀等均為分析純;水為純化水。

2 方法與結果

2.1 溶出測定方法的建立

參考FDA和PMDA公布的原研制劑信息,經一系列研究,初步建立了體外溶出測定方法。具體方法如下。

取本品,照溶出度與釋放度測定法(中國藥典2020年版第四部通則0931第二法),分別以pH值1.0鹽酸溶液、pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液(含0.8%SDS)和水(含0.8%SDS)各900 mL為溶出介質,轉速為50 r/min,依法操作,取溶液適量,棄去初濾液2 mL,精密量取續濾液1 mL,置20 mL容量瓶中,用溶出介質稀釋至刻度,搖勻,照紫外-可見分光光度法(中國藥典2020年版第四部通則0401),在250 nm的波長處測定吸光度;另取嗎替麥考酚酯對照品適量,精密稱定,加乙腈-水(V乙腈∶V水=50∶50)溶解并稀釋制成每1 mL中約含2.7 mg的溶液,搖勻,精密量取1 mL,置100 mL容量瓶中,用溶出介質稀釋至刻度,搖勻,同法測定,計算每片的溶出量。

2.2 方法學驗證

2.2.1 專屬性

取本品空白輔料適量(相當于本品1片)置1 000 mL容量瓶中,加900 mL溶出介質稀釋,超聲溶解。精密量取續濾液1 mL,置20 mL容量瓶中,加溶出介質稀釋至刻度,搖勻,依法測定。結果表明,空白輔料不干擾本品溶出度的檢測。

2.2.2 線性與范圍

取嗎替麥考酚酯對照品適量,精密稱定,加乙腈-水(V乙腈∶V水=50∶50)溶解并稀釋制成每1 mL中約含2.7 mg的溶液,作為對照品溶液。精密量取1 mL,置10 mL容量瓶中,加溶出介質稀釋至刻度,搖勻,作為線性溶液。再分別精密量取0.1,0.2,0.4,0.8,1.0,1.2 mL,各置10 mL容量瓶中,加溶出介質稀釋至刻度,搖勻,依法測定。結果見表1。

表1 線性與范圍試驗結果

結果表明,r≥0.990截距≤2.0%,四種溶出介質中嗎替麥考酚酯質量濃度在2.77～32.86 μg/mL范圍內線性關系良好。

2.2.3 中間精密度試驗

取本品,由不同試驗人員,在不同時間采用不同實驗儀器依法測定,計算12份供試品溶出度的RSD值,結果見表2。結果表明本方法中間精密度良好。

表2 中間精密度結果(n=12)

2.2.4 準確度試驗

精密量取“2.2.2線性與范圍”項下對照品溶液1 mL,置100 mL容量瓶中,加溶出介質稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液。

稱取空白輔料適量(相當于0.5 g嗎替麥考酚酯),置100 mL容量瓶中,加溶出介質超聲溶解并稀釋至刻度,搖勻,濾過,作為空白輔料溶液。

供試品溶液配制:精密量取“2.2.2線性與范圍”項下對照品溶液和空白輔料溶液各1 mL,置100 mL容量瓶中,加溶出介質稀釋至刻度,搖勻,作為100%濃度供試品溶液,同法分別配制10%,40%,80%,120%濃度的供試品溶液,每個濃度配制3份。

分別取對照品溶液和供試品溶液,依法測定。結果見表3。

表3 回收率試驗結果

結果表明,本法測定溶出度的回收率均值在95%～105%,RSD均小于2.0%,準確度好。

2.2.5 濾膜吸附性試驗

取本品1片,置1 000 mL容量瓶中,分別加溶出介質900 mL,超聲使溶解;分別取離心(轉速:8 000 r/min)的上清液及用濾膜(材料:水系PES;規格:0.45 μm;廠家:津隆?)棄去1,2,3,4,5,6 mL初濾液后的續濾液1 mL,置20 mL容量瓶中,用溶出介質稀釋至刻度,搖勻,依法測定。將經過離心處理的樣品吸光度作為100%,過濾處理的樣品吸光度與之進行對比。結果見表4。

表4 濾膜吸附性試驗結果

結果表明,嗎替麥考酚酯在四種溶出介質中棄去2 mL時,變化值小于2%,說明嗎替麥考酚酯在四種溶出介質中棄去2 mL 即可達到飽和。

2.2.6 溶液穩定性

取嗎替麥考酚酯對照品適量,精密稱定,加乙腈-水(V乙腈∶V水=50∶50)溶解并稀釋制成每1 mL中約含2.7 mg的溶液,精密量取1 mL,置100 mL容量瓶中,加溶出介質稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液,室溫放置。

取本品1片,置1 000 mL容量瓶中,加溶出介質900 mL超聲使溶解,濾過,取續濾液1 mL,置20 mL容量瓶中,作為供試品溶液,室溫放置。

對照品溶液和供試品溶液分別于0,2,4,12,24 h測定,記錄吸光度,計算RSD值。結果表明:室溫條件下,對照品溶液和供試品溶液24 h內吸光度的RSD均小于2%,溶液在24 h內穩定。

2.2.7 溶出儀耐用性

按照“2.1溶出測定方法的建立”項下方法,通過改變溶出儀的轉速及水溫,考察溶出儀的耐用性,具體試驗條件為:A、改變波長:245,255 nm;B、改變轉速:48,52 r/min;C、改變水溫:36,38 ℃。結果顯示,改變轉速和水溫時,于各溶出介質溶出終點取樣,精密量取續濾液1 mL,置20 mL容量瓶中,加溶出介質稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。實驗結果表明,與標準條件相比,改變溶出儀的轉速及水溫,溶出度無明顯差異。說明本品的溶出度受溶出儀參數波動影響較小,耐用性良好。

2.3 自研制劑與原研制劑溶出曲線比較

取自研制劑(批號:ZY01、ZY02、ZY03)及原研制劑(批號:M3567B01)每批樣品各12片,照“2.1溶出測定方法的建立”項下方法測定四種溶出介質中的溶出度,繪制溶出曲線,如圖1～4所示,并比較自研制劑與原研制劑溶出行為的相似性。

圖1 自研制劑與原研制劑溶出曲線(pH值1.0鹽酸溶液)

圖2 自研制劑與原研制劑溶出曲線(pH值4.5醋酸鹽緩沖液)

圖3 自研制劑與原研制劑溶出曲線(pH值6.8磷酸鹽緩沖液(含0.8%SDS))

圖4 自研制劑與原研制劑溶出曲線(水(含0.8%SDS))

自研制劑與原研制劑對應介質的溶出曲線采用f2因子計算相似性。自研制劑和原研制劑在pH值1.0鹽酸溶液中15 min溶出度大于85%,無需比較f2,對自研制劑和原研制劑在pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液(含0.8%SDS)和水(含0.8%SDS)溶出結果比較f2,結果見表5。結果顯示,三批自研制劑和原研制劑在pH值1.0鹽酸溶液中15 min溶出度大于85%,相似。三批自研制劑在pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液(含0.8%SDS)和水(含0.8%SDS)四種溶出介質中相似因子均大于50(f2≥50),說明自研制劑與原研制劑在四種溶出介質中的溶出行為均相似。

表5 相似性(f2)結果

3 討論

藥物體外溶出試驗是評價口服固體制劑質量的一種重要手段,藥物體外溶出程度對人體吸收有著重要的影響[6]。本研究建立了可靠的體外溶出測定方法,對自研制劑與原研制劑體外溶出行為進行了一致性評價。經研究,自研制劑與原研制劑在pH值1.0鹽酸溶液、pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液(含0.8%SDS)和水(含0.8%SDS)中溶出曲線均相似。通過評價自研制劑與原研制劑體外溶出的一致性,可以更好地控制其質量,保證與原研制劑的安全性及有效性[7]。