一例雞傳染性貧血和法氏囊病混合感染的診斷

毛東風，姚慧敏，喬洋，孫法良，褚素欣，張磊，任巖峰，付國平，侯立軍

（1.齊魯動物保健品有限公司，山東 濟南 250000；2.石家莊市畜牧技術推廣站，河北 石家莊 050000；3.石家莊市農業綜合行政執法支隊 河北 石家莊 050000；4.河北舒雋科技有限公司，河北 石家莊 050000；5.石家莊正大鴻福牧業有限公司，河北 石家莊 050000；6.廊坊市畜牧站，河北 廊坊 065000)

雞傳染性法氏囊?。↖BD）是由雞傳染性法氏囊病病毒引起的危害雛雞的一種急性、高度接觸性的傳染?。浑u傳染性貧血?。–AV）是由雞傳染性貧血病毒引起的，病雞表現為貧血、骨髓黃染、免疫機能受損。IBD 和CAV 均可直接導致病雞死亡、雞群生產性能降低，還可導致雞群免疫抑制，進而促使雞群并發或繼發其它疫病。2018年6 月份，河北某養殖場所飼養的蛋雛雞發生了一種疫病，發病雞以精神沉郁、藍翅、死淘率高為主要特征；以腎臟腫大、腿肌出血、腺胃和肌胃交界處出血為主要剖檢病變；經實驗室診斷為CAV 和IBDV 混合性感染。為了提升廣大養殖企業對該病例的認識，現將這起病例總結如下：

1 材料準備與病例采集

1.1 材料

實驗用到青霉素、鏈霉素、慶大霉素和制霉菌素；LB 固體培養基、麥康凱培養基；SPF 雞胚。

1.2 病例

河北某蛋雞場所飼養的蛋雛雞，7 日齡免疫新流法三聯滅活苗，15 日齡出現精神沉郁、藍翅等癥狀；以腎臟腫大、腿肌以及腺胃和肌胃交界處出血為主要剖檢病變；疑似雞傳染性貧血病毒和法氏囊病毒混合感染。

1.3 剖檢及病料采集

解剖病雞，觀察其病理變化；對肝臟、肝臟、脾臟、腎臟等臟器備用，編號為HB1804。

1.4 細菌的分離

分別在LB 固體培養基和麥康凱培養基上進行細菌培養，培養24 小時左右，觀察結果。

1.5 法氏囊病病毒的鑒定

1.5.1 雞胚病變

將肝臟、脾臟及腎臟用含適當濃度抗生素的PBS（pH7.2）按1∶5 進行充分研磨，反復凍融3次后接種11 日齡SPF 雞胚，經絨毛尿囊膜途徑，各接種5 枚。每12 小時照胚一次，24 小時內死亡雞胚棄去，其他雞胚每日觀察，雞胚死亡則收取絨毛尿囊膜，120 小時還未死亡胚，置4℃凍死，同法收胚。收獲的絨毛尿囊膜觀察有無痘斑生成。

1.5.2 PCR 檢測

收集絨毛尿囊膜充分研磨后，按照試劑盒說明書提取總RNA，通過RT-PCR 方法檢測IBDV。根據VP2 序列設計1 對引物，上游引物序列為5'-CAAGTGGGAGCCTAGCAGTG-3'，下游引物序列為：5'-GCTCCTGCAATCTTCAGGG-3'，預計擴增片段約為337 bp。

1.6 雞傳染性貧血病毒的鑒定

1.6.1 病理組織學檢測用福爾馬林固定病雞肝臟、腿骨，制作石蠟切片，HE 染色后進行組織病理學診斷。

1.6.2 PCR 檢測取采集的病料充分研磨后，按照試劑盒說明書提取總DNA，通過PCR 方法檢測CAV。根據VP2 序列設計1 對引物，上游引物序列為:5'-CATCAACGGTGTTCAGGC-3'，下游引物序列為：5'-CCTTGGAAGCGGATAGTCAT-3'，預計擴增片段約為550bp。

2 結果

2.1 剖檢病變

對送檢患病雞進行剖檢發現，患病雞雞翅膀出現皮下出血和皮炎癥狀（見圖1-A），腺胃和肌胃交界處出血（見圖1-B），腿肌條狀出血（見圖1-C）。

2.2 細菌分離

經24 小時左右的培養后，LB 固體培養基和麥康凱培養基上都沒有出現細菌生長，沒有分離到細菌。

2.3 法氏囊病病毒鑒定

2.3.1 雞胚病變

經絨毛尿囊膜途徑接種的雞胚，絨毛尿囊膜出現痘斑，如圖2 所示。

圖2 HB1804 通過CAM 途徑接種雞胚后的尿囊膜

2.3.2 PCR 檢測

試驗中用到的IBD 檢測引物為VP2 特異性引物，經檢測送檢樣品HB1804 呈法氏囊病毒陽性；PCR 產物電泳結果如圖3 所示。

圖3 PCR 產物電泳圖

實驗室分離鑒定結合臨床表現可確定該雞群有傳染性法氏囊病病毒感染，由于該雞群免疫新流法三聯滅活苗而未免疫法氏囊病活苗，所以排除該病是疫苗毒引起。

2.4 雞傳染性貧血病毒鑒定

2.4.1 病理組織學診斷

取病雞肝臟、腿骨等用福爾馬林固定后，制作組織切片；通過顯微鏡觀察，肝臟結構清晰，無異常（見圖4-A）；腿骨骨髓內大量脂肪浸潤（見圖4-B），造血細胞大量減少（見圖4-C）；

圖4 組織病理學病變

與禽傳染性貧血的病理變化一致，故可確定傳染性貧血病毒感染。

2.4.2 PCR 檢測

試驗中用到的CAV 檢測引物為VP2 特異性引物，經檢測送檢樣品HB1804 呈雞傳染性貧血病毒陽性；PCR 產物電泳結果如圖5 所示。

圖5 PCR 產物電泳圖

PCR 檢測結果結合臨床表現和病理切片變化可確定該雞群還混合有傳染性貧血病毒感染。

3 討論

IBD 是由IBDV 引起的雛雞的一種急性的、高度接觸性的疾病。IBD 發病主要以6～8 月多發，其他季節發病較少。主要的傳染源為發病雞或帶毒雞，主要的傳播途徑為消化道傳播。其流行形式與雞群密度及免疫狀態有關，一般呈散發或地方流行。近幾年隨著法氏囊病滅活苗和高免抗體的大量應用，該病發病趨于減少，但是也有免疫雞群出現法氏囊病癥狀的報道，究其原因與雞群免疫失敗、免疫時間不當、疫苗質量不佳、環境中存在的超強野毒株等有關；同時我們應該注意該病的發生與其他免疫抑制病相輔相成，有報道稱，國內許多地區IBD 發病，往往和CAV 的混合感染有關。

雞傳染性貧血是引起雛雞再生障礙性貧血和全身淋巴組織萎縮的病毒性傳染病。雞是CAV 的主要自然宿主，可水平傳播和垂直傳播。當CAV 與IBDV 混合感染，雞群出現免疫抑制狀態，此外，CAV 常與馬立克病病毒（MDV）、呼腸孤病毒（REO）、新城疫病毒（ND）等混合感染，且存在相互作用。養殖場應當從飼養環境、日常消毒、合理制定并執行免疫程序等多方面加強飼養管理，避免發生這類疫病。