Folin-Ciocaileu比色法測定不同等級天麻總酚含量

熊汝琴，王 銳，劉忠榮，陳順芳

（昭通學院,云南昭通 657000）

Folin-Ciocaileu比色法測定不同等級天麻總酚含量

熊汝琴，王 銳，劉忠榮，陳順芳

（昭通學院,云南昭通 657000）

以沒食子酸為對照,采用Folin-Ciocaileu比色法測定云南昭通產4類不同等級天麻中的總酚含量,該方法在2～12.0μg·m L-1濃度范圍內線性良好,決定系數R2為0.996 5,結果還表明天麻總酚含量與塊莖干重不呈正相關,即塊莖大小與天麻的內在品質沒有必然聯系。

天麻；Folin-Ciocaileu比色法；總酚測定

天麻（Gastrodia elata Blum e）為蘭科天麻屬植物,是我國名貴的藥食兩用中藥材之一,多用于頭痛眩暈、肢體麻木、癲癇、抽搐等癥。天麻含有豐富的酚性物質,如天麻素（4-羥甲基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷）、對羥基苯甲醛、對羥基苯甲醇等［1-5］。目前一般認為,天麻素是天麻的主要活性成分,具有鎮驚、抗癲癇、鎮靜安眠、降血壓等作用［6-9］,《中國藥典》2010年版中天麻質量標準的制定也主要以天麻素含量作為重要的參考指標。

隨著藥理研究的進一步深入,越來越多的報道顯示,僅以天麻素作為活性指標尚不能全面反映與天麻傳統功效相關的藥理活性,其他酚性成分對于其藥效的發揮也非常重要［10-12］。因此測定天麻中總酚含量,用以衡量天麻的質量可能更為合理。

云南省昭通市是我國著名的天麻地道藥材產地,所產天麻品質優良,為當地特色經濟作物。市面上出售干天麻塊莖,通常按塊莖大小分為4個等級,1級每頭≥35g,2級每頭≥20g,3級每頭≥12g,4級≥8g。1級天麻價格為4級的3倍左右。本實驗建立了天麻中總酚的測定方法,同時對昭通產4種藥用天麻變型（烏天麻、紅天麻、黃天麻、綠天麻）不同等級大小塊莖中總酚含量進行測定,期望為天麻的合理應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗用烏天麻產自云南省昭通市彝良縣小草壩鄉小草壩村,紅天麻、黃天麻、綠天麻均產自昭通市昭陽區,由昭通市天麻研究所提供鑒定。

試劑：福林酚試劑（上海喜潤化學工業有限公司）；沒食子酸標準品（中國藥品生物制品檢定所,供定量測定用）；N a2C 03（分析純）；水為2次蒸餾水。

使用儀器：先行者電子分析天平；高速冷凍離心機（上海安亭科學儀器廠）；U V/V i s 2082P C S紫外可見分光光度計。

1.2 方法

1.2.1 標準溶液配制

精確稱取沒食子酸標準品適量,用水溶解并定容至250 m L,搖勻,制成0.143 2 mg·m L-1的對照品標準溶液。

1.2.2 標準曲線的建立

精確吸取標準溶液0.4,0.6,0.8,1.0, 1.2,1.4,1.6,1.8和2.0 m L,分別加蒸餾水5.0 m L,混勻,加福氏試劑1.5 m L,3 min后,加10%N a2C 03溶液3.0 m L,用水稀釋至25 m L,30 °C水浴加熱30 min后,取出,搖勻,于765 nm波長下,測定吸光度值,建立標準曲線。

1.2.3 樣品處理

天麻中的酚性成分有脂溶性的也有水溶性的,通過預實驗發現采用70%乙醇為提取溶劑,所得溶液顯色后測定結果最佳。取各級干天麻塊莖,粉碎,過孔徑0.149 m m（100目）篩,精確稱取2.0g,加70%乙醇25 m L,浸泡24 h,30°C水浴中超聲（工作頻率40 kH z,功率250 W）30 min,4 500 r·m i n-1離心15 min,過濾,上清液置50 m L容量

瓶中,殘渣每次加10 m L70%乙醇重復前述操作再提取2次,過濾,合并濾液,定容至50 m L,即得總酚提取物溶液。

1.2.4 顯色反應條件的確定

實驗過程中,參考相關文獻［13-15］,經過多次實驗最終確定加蒸餾水5.0 m L,福氏試劑1.5 m L, 10%N a2C 03溶液3.0 m L,在這樣的試劑比例下,顯色溶液的澄清度和穩定性都較高。在考查反應溫度和時間的實驗時發現,使用30°C水浴加熱30 min,反應條件比較溫和,靈敏度高,結果可靠。

2 結果與分析

2.1 標準曲線

以沒食子酸質量濃度為橫坐標,吸光度為縱坐標,制作標準曲線,得回歸方程為y=0.048 1χ+ 0.004 8,決定系數R2為0.996 5,沒食子酸質量濃度在2～12.0μg·m L-1與其吸光值呈現良好的線性關系,該方程可用于天麻多酚的定量測定。

2.2 穩定性

取黃天麻2級樣品溶液1.0 m L,按上述處理及測定方法,在樣品液與顯色劑反應完全后分別在0.5, 1.0,1.5,2.0,2.5和3.0 h測定其吸光度,以評價該分析方法在一段時間內的穩定性。從表1可以看出,由于酚類物質被氧化,其總量值略有下降的趨勢,但2 h內溶液穩定性良好,相對標準差為1.78%。

表1 穩定性的實驗結果

2.3 精密度

取質量濃度為5.728 0μg·m L-1的對照品溶液,重復測定6次,記錄其吸光度的值,相對標準差為0.35%,結果（表2）表明儀器精密度良好。

表2 精密度的實驗結果

2.4 重現性

取3級黃天麻按前述提取及測定方法,重復測定6次,結果如表3所示,得相對標準差為0.59%,表明具有良好的重現性。

表3 重現性的實驗結果

2.5 加標回收率

取沒食子酸標準品適量,制成0.101 5 mg·m L-1的對照品貯備液。稱取2級綠天麻細末約0.5g,平行6份,精確加入對照品貯備液10.0 m L,顯色反應后,測定吸光度的值并計算回收率,得平均回收率為100.17%,相對標準差為1.42%（表4）。

表4 天麻多酚加標回收的實驗結果

2.6 天麻總酚含量

各類各級天麻樣品溶液顯色后測定吸光度值,并根據標準曲線計算總酚含量。表5表明,天麻總酚含量與塊莖干重不呈正相關,紅天麻和黃天麻中,塊莖干重最小的4級天麻反而總酚含量較高,可見不能僅憑塊莖大小評價天麻的內在品質。

表5 不同等級天麻塊莖的總酚含量（n=3）

3 小結

實驗結果表明,天麻總酚含量與塊莖干重不呈正相關,可見不能僅憑塊莖大小評價天麻的內在品質。用F o l i n-C i o c a l t e a u法測定天麻中的總酚含量,回收率高,靈敏度高,精密度、準確度好,而且操作簡單快速又節約。

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（責任編輯：張才德）

S567文獻標志碼：B文章編號：0528-9017（2014）05-0664-02

2014-02-14

云南省應用基礎研究計劃青年項目（2012F D 063）

熊汝琴（1986-）,女,助教,碩士,研究方向為天然產物化學。E-mail：x i o ng r uqi n2011@163.com。

文獻著錄格式：熊汝琴,王銳,劉忠榮,等.Folin-Ciocaileu比色法測定不同等級天麻總酚含量［J］.浙江農業科學,2014（5）：664-665,667.