高效液相色譜法測定3%辛硫磷顆粒劑

洪陳艷，王學(xué)林，顏高俊，安燕萍

(昆明農(nóng)藥有限公司，云南 昆明 650401)

辛硫磷(phoxim)屬于高效、低毒、廣譜硫代磷酸酯類有機(jī)磷殺蟲劑[1]。辛硫磷具有觸殺和胃毒作用，作用于通過抑制昆蟲體內(nèi)神經(jīng)組織上的乙酰膽堿酯酶或膽堿酯酶的活性從而使害蟲中毒死亡，無內(nèi)吸性，持效期短，可用于防治危害糧食、棉花、蔬菜、果樹、茶葉、桑等的害蟲，以及土壤害蟲(在土壤中的持效期可達(dá)一個月以上)、倉儲害蟲、衛(wèi)生害蟲和家畜體內(nèi)外的寄生蟲[2]。3%辛硫磷顆粒劑主要用于防治農(nóng)作物上的蠐螬、地老虎等地下害蟲。

3%辛硫磷顆粒劑目前尚無國家標(biāo)準(zhǔn)。本文使用以C18為填料的不銹鋼柱和紫外檢測器，對試樣中的辛硫磷進(jìn)行反相高效液相色譜分離和測定，外標(biāo)法定量。

1 實驗部分

1.1 試劑

辛硫磷標(biāo)樣(w=99.04%)；甲醇：色譜級(用于流動相)；甲醇：分析純；水：蒸餾水(新蒸二次蒸餾水)。

1.2 操作儀器

液相色譜儀：高效液相色譜儀(具有可調(diào)節(jié)波長紫外檢測器和定量進(jìn)樣閥)；色譜數(shù)據(jù)工作站：N2000色譜工作站；色譜柱：150 mm×φ4.6 mm 不銹鋼柱，內(nèi)裝DOS(C18)5 μm 填充物，微量進(jìn)樣注射器：50 μL；定量進(jìn)樣器 5 μL；超聲波清洗器。

1.3 操作條件

柱溫：室溫，溫度變化不高于 2 ℃；流動相：V(甲醇)∶V(水)=80∶20，經(jīng)濾膜過濾，并進(jìn)行脫氣；檢測波長：254 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：5 μL；保留時間：約 6 min。

1.4 操作步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的制備

稱取 0.1 g 辛硫磷標(biāo)樣(精確至 0.0002 g)，置于 50 mL 的容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，超聲波振蕩 10 min，使標(biāo)樣中的辛硫磷完全溶解，冷卻至室溫，搖勻。用移液管移取 5 mL 上述溶液于另一 50 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。

1.4.2 試樣溶液的制備

稱取 3.3 g 辛硫磷試樣(精確至 0.0002 g)，置于 50 mL 的容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，超聲波振蕩 10 min，使試樣中的辛硫磷完全溶解，冷卻至室溫，搖勻。用移液管移取 5 mL 上述溶液于另一 50 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。

1.4.3 測定

在上述色譜操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰兩針標(biāo)樣溶液中的辛硫磷響應(yīng)值變化小于1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣進(jìn)行分離測定[3]。3%辛硫磷顆粒劑高效液相色譜圖見圖1，辛硫磷的保留時間為 6.078 min。

圖1 3%辛硫磷顆粒劑高效液相色譜圖

1.4.4 計算

將測得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標(biāo)樣溶液中辛硫磷峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中辛硫磷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w(%)按公式計算：

式中：A2為試樣溶液中辛硫磷峰面積的平均值；m1為標(biāo)樣辛硫磷的質(zhì)量，g；w標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn)品辛硫磷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；A1為標(biāo)樣溶液中辛硫磷峰面積的平均值；m2為試樣的質(zhì)量，g；w1為試樣辛硫磷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

1.4.5 允許差

辛硫磷質(zhì)量分?jǐn)?shù)兩次平行測定結(jié)果之差應(yīng)不大于0.2%，取其算術(shù)平均值作為測定結(jié)果。

2 結(jié)果與討論

2.1 液相色譜操作條件的選擇

為了保證3%辛硫磷顆粒劑樣品中辛硫磷的峰型能夠較好地分離，分別取不同配比的甲醇和水為流動相進(jìn)行分析檢測。通過比較和對比分析辛硫磷以及雜質(zhì)峰的峰型、出峰時間、分離完全度等因素，確定使用甲醇-水體積比80∶20為流動相時，樣品色譜圖基線平穩(wěn)，峰型好，分離效果較好，出峰時間適宜。因此確定選用V(甲醇)∶V(水)=80∶20作為流動相。

2.2 波長的選擇

使用紫外可變波長檢測器，在不同波長下對辛硫磷進(jìn)行掃描，當(dāng)掃描波長為 254 nm 時，辛硫磷的響應(yīng)值最大，并且能與雜質(zhì)峰分離徹底，因此選擇 254 nm 作為檢測波長。

2.3 溶劑的選擇

根據(jù)辛硫磷的性質(zhì)，當(dāng)選用甲醇為試樣溶劑時，能較好地溶解試樣，且峰型分離較好，滿足試劑的選擇條件。

2.4 分析方法線性關(guān)系測定

配制一系列質(zhì)量濃度梯度的辛硫磷標(biāo)樣溶液，按本文1.3、1.4中的方法進(jìn)行分析檢測。每個質(zhì)量濃度分析兩次，求其峰面積的平均值，得出了一系列色譜峰面積(表1)。以辛硫磷的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制線性相關(guān)曲線，得出辛硫磷的線性方程y=1.0×107x-14709，線性相關(guān)系數(shù)為R2=0.9998，結(jié)果表明，該方法對辛硫磷的分析具有良好的線性相關(guān)性，完全滿足定量分析的要求。

表1 不同質(zhì)量濃度辛硫磷標(biāo)樣與對應(yīng)的峰面積

2.5 分析方法精密度測定

分別稱取6個平行試樣，按照上述色譜條件和測定步驟測定，辛硫磷的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.06%，變異系數(shù)為1.98%，具有良好的精密度(表2)。

表2 分析方法的精密度測定結(jié)果

2.6 分析方法準(zhǔn)確度測定

稱取辛硫磷顆粒劑試樣配制成試樣溶液，分別稱取相同體積的上述溶液制備7份相同的樣品，其中6份加入一定量的辛硫磷標(biāo)樣。如此配制成6個混合樣品溶液和1個空白溶液，按本標(biāo)準(zhǔn)操作條件進(jìn)行分析，分別測定每個樣品的辛硫磷總質(zhì)量，計算回收率，測定結(jié)果見表3。表3表明，該測定方法可靠性較高。

表3 分析方法的準(zhǔn)確度測定結(jié)果

3 結(jié)論

本文建立的高效液相色譜法測定3%辛硫磷顆粒劑中有效成分辛硫磷質(zhì)量分?jǐn)?shù)的檢測方法，具有較寬的線性范圍和較好的準(zhǔn)確度、精密度，方法方便、快捷，能滿足定量分析要求，可用于該劑型質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測和質(zhì)量控制。