血清G-17、PGR、HLA-G、ANXA1聯(lián)合幽門螺桿菌IgG抗體對胃癌和癌前病變的鑒別診斷價(jià)值

楊燕燕，王捷虹，許永攀，穆恒，尤金枝

陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院消化一科，陜西 咸陽 712000

胃癌病程進(jìn)展迅速，易侵犯周圍臟器，5年相對生存率僅為27.4%[1]。胃癌前病變包括胃黏膜的腸上皮化生、異型增生，主要伴存于慢性萎縮性胃炎[2-3]。有效鑒別診斷胃癌和癌前病變并給予患者針對性治療，有利于改善患者預(yù)后。胃泌素-17(G-17)、胃蛋白酶原I(PG-I)、胃蛋白酶原Ⅱ(PG-Ⅱ)是反映胃黏膜功能及分泌狀態(tài)的主要指標(biāo)，與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4]。此外，幽門螺桿菌(HP)感染已被研究證實(shí)在胃癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制中扮演重要角色[5]。人類白細(xì)胞抗原-G(HLA-G)屬于非經(jīng)典HLA-I類分子，與腫瘤細(xì)胞的增殖、分化以及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，并被證實(shí)參與調(diào)節(jié)腫瘤的免疫逃逸[6]。膜聯(lián)蛋白A1 (ANXA1)是一個(gè)Ca2+和磷脂結(jié)合的蛋白，具有鈣依賴性的磷脂結(jié)合功能，不僅參與調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)中炎癥反應(yīng)，而且參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展[7]。本研究通過探討血清G-17、PG-I/PG-Ⅱ比值(PGR)、HLA-G、ANXA1 聯(lián)合HP-免疫球蛋白G(IgG)抗體(HP-IgG 抗體)對胃癌和癌前病變的鑒別診斷價(jià)值，以期為臨床診斷方法的選擇提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2021 年1 月至2022 年5 月在陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院接受診治的80 例胃癌患者作為胃癌組、70 例癌前病變患者作為癌前病變組。胃癌組患者納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)臨床癥狀、體征、病理學(xué)及內(nèi)鏡檢查診斷為胃癌[8]，且伴萎縮性胃炎；(2)未進(jìn)行相關(guān)胃癌或胃炎治療者；(3)預(yù)計(jì)生存期≥3個(gè)月；(4)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并心、肝、腎功能不全者；(2)患有其他惡性腫瘤者；(3)有幽門螺旋桿菌治療史者；(4)患有免疫系統(tǒng)性疾病及血液系統(tǒng)性疾病者；(5)精神疾病者。癌前病變患者納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)臨床癥狀、體征病理學(xué)及內(nèi)鏡檢查診斷為癌前病變[8]；(2)未進(jìn)行相關(guān)胃癌或胃炎治療者；(3)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)與胃癌組患者一致。另選取同期在我院體檢的健康人群50例作為健康對照組。三組受檢者的性別和年齡比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性，見表1。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

表1 三組受檢者的性別和年齡比較[例(%)，]Table 1 Comparison of gender and age among the three groups of subjects[n(%),]

表1 三組受檢者的性別和年齡比較[例(%)，]Table 1 Comparison of gender and age among the three groups of subjects[n(%),]

組別例數(shù)性別年齡(歲)健康對照組癌前病變組胃癌組χ2/F值P值50 70 80男性30(60.00)41(58.57)48(60.00)女性20(40.00)29(41.43)32(40.00)0.039 0.981 63.63±9.75 62.77±8.69 62.64±9.43 0.098 0.907

1.2 檢測方法 抽取所有患者入院后隔天清晨、體檢健康人群于體檢當(dāng)日的空腹外周靜脈血5 mL。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定血清G-17、PG-I、PG-Ⅱ、HLA-G、ANXA1水平，并計(jì)算PGR，試劑盒均購自北京利德曼生化股份有限公司。血清HP-IgG抗體進(jìn)行定性測試，檢測儀器：Varioskan LUX 全自動酶標(biāo)儀(美國Thermo Fisher Scientific 公司)。HP-IgG抗體試劑盒購自上海惠泰醫(yī)療科技公司，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

1.3 觀察指標(biāo) (1)比較三組受檢者的G-17、PGR、HLA-G、ANXA1、HP-IgG抗體陽性率；(2)比較胃癌組HP-IgG抗體陽性和陰性者的G-17、PGR、HLA-G、ANXA1；(3)比較癌前病變組HP-IgG 抗體陽性和陰性者的G-17、PGR、HLA-G、ANXA1；(4)分析血清G-17、PGR、HLA-G、ANXA1 聯(lián)合HP-IgG 抗體檢測對胃癌和癌前病變的鑒別診斷效能。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，采用受試者工作特征曲線(ROC)分析血清G-17、PGR、HLA-G、ANXA1聯(lián)合HP-IgG抗體檢測對胃癌和癌前病變的鑒別診斷價(jià)值。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組受檢者的血清指標(biāo)比較 胃癌組、癌前病變組患者的PGR明顯低于健康對照組，且胃癌組明顯低于癌前病變組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；胃癌組、癌前病變組患者的G-17、HLA-G、ANXA1水平及HP-IgG抗體陽性率明顯高于健康對照組，且胃癌組明顯高于癌前病變組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 三組受檢者的血清指標(biāo)比較[，例(%)]Table 2 Comparison of serum indicators among the three groups of subjects[,n(%)]

表2 三組受檢者的血清指標(biāo)比較[，例(%)]Table 2 Comparison of serum indicators among the three groups of subjects[,n(%)]

注：與健康對照組比較：aP＜0.05；與癌前病變組比較：bP＜0.05。Note:Compared with that in the healthy control group:aP＜0.05;Compared with that in precancerous lesions group:bP＜0.05.

組別健康對照組癌前病變組胃癌組F/χ2值P值HP-IgG抗體陽性率23(46.00)53(75.71)a 71(88.75)ab 33.606 0.001例數(shù)50 70 80 G-17(ng/mL)54.32±8.74 67.64±9.88a 81.07±10.70ab 113.350 0.001 PGR 12.36±2.02 5.02±1.88a 1.45±0.74ab 744.249 0.001 HLA-G(U/mL)41.34±6.76 68.35±8.84a 90.88±9.13ab 527.018 0.001 ANXA1(g/L)1.58±0.70 4.85±1.02a 6.93±1.64ab 281.405 0.001

2.2 胃癌組HP-IgG抗體陽性和陰性者的血清指標(biāo)比較 根據(jù)胃癌組患者HP-IgG 抗體是否陽性分為胃癌HP-IgG 抗體陽性組71 例和胃癌HP-IgG 抗體陰性組9 例。胃癌HP-IgG 抗體陽性組PGR 明顯低于胃癌HP-IgG抗體陰性組，G-17、HLA-G、ANXA1水平明顯高于胃癌HP-IgG抗體陰性組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3 胃癌組HP-IgG抗體陽性和陰性者的血清指標(biāo)比較()Table 3 Comparison of serum indicators between HP-IgG antibody positive and negative individuals in gastric cancer group()

表3 胃癌組HP-IgG抗體陽性和陰性者的血清指標(biāo)比較()Table 3 Comparison of serum indicators between HP-IgG antibody positive and negative individuals in gastric cancer group()

組別胃癌HP-IgG抗體陽性組胃癌HP-IgG抗體陰性組t值P值例數(shù)71 9 G-17(ng/mL)81.96±11.34 74.03±9.92 2.001 0.049 PGR 1.23±0.55 3.15±1.38 4.133 0.003 HLA-G(U/mL)91.71±10.16 84.35±9.46 2.061 0.043 ANXA1(g/L)7.13±1.74 5.35±1.44 2.939 0.004

2.3 癌前病變組HP-IgG抗體陽性和陰性者的血清指標(biāo)比較 根據(jù)癌前病變組患者HP-IgG抗體是否陽性分為癌前病變HP-IgG抗體陽性組53例和HP-IgG抗體陰性組17例。癌前病變HP-IgG抗體陽性組患者的PGR明顯低于癌前病變HP-IgG抗體陰性組，G-17、HLA-G、ANXA1水平明顯高于癌前病變HP-IgG抗體陰性組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表4。

表4 癌前病變組HP-IgG抗體陽性和陰性者的血清指標(biāo)比較()Table 4 Comparison of serum indicators between HP-IgG antibody positive and negative individuals in the precancerous lesions group()

表4 癌前病變組HP-IgG抗體陽性和陰性者的血清指標(biāo)比較()Table 4 Comparison of serum indicators between HP-IgG antibody positive and negative individuals in the precancerous lesions group()

組別癌前病變HP-IgG抗體陽性組癌前病變HP-IgG抗體陰性組t值P值例數(shù)53 17 G-17(ng/mL)69.25±9.35 62.65±9.42 2.528 0.014 PGR 4.54±1.83 6.51±2.50 3.520 0.001 HLA-G(U/mL)69.83±8.18 63.75±8.16 2.668 0.010 ANXA1(g/L)5.15±1.54 3.90±1.20 3.057 0.003

2.4 血清G-17、PGR、HLA-G、ANXA1 聯(lián)合HPIgG 抗體檢測對胃癌和癌前病變的鑒別診斷效能(1)構(gòu)建5個(gè)因子回歸風(fēng)險(xiǎn)模型：納入表3、表4中差異有顯著意義的指標(biāo)，建立Logistic 回歸風(fēng)險(xiǎn)模型(逐步后退法，α退=0.10，α進(jìn)=0.05)，見表5。由其知，血清G-17、PGR、HLA-G、ANXA1及HP-IgG抗體均和胃癌的發(fā)生有密切關(guān)聯(lián)。遂構(gòu)建其聯(lián)合應(yīng)用的回歸診斷評估模型，即以Ln(P/1-P)=0.054×G-17-0.360×PGR+0.071×HLAG+0.269×ANXA1+0.318×HP-IgG抗體作為5個(gè)指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用的虛擬指標(biāo)，進(jìn)行后續(xù)的ROC 分析。(2)血清G-17、PGR、HLA-G、ANXA1、HP-IgG 抗體檢測及聯(lián)合模型的鑒別診斷效能：經(jīng)ROC分析結(jié)果顯示，血清G-17、PGR、HLA-G、ANXA1、HP-IgG 抗體等5 個(gè)指標(biāo)單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，ROC-AUC (0.95CI)分別為0.716(0.482～0.926)、0.717(0.457～0.975)、0.733(0.558～0.912)、0.735 (0.515～0.950)、0.709 (0.483～0.937)、0.882(0.787～0.982)，其中聯(lián)合應(yīng)用診斷效能明顯更高，AUC及靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均較各單獨(dú)應(yīng)用指標(biāo)有較大的提升，見表6和圖1。

圖1 血清G-17、PGR、HLA-G、ANXA1 聯(lián)合HP-IgG 抗體檢測對胃癌和癌前病變鑒別診斷效能的ROCFigure 1 ROC of the differential diagnostic efficacy of serum G-17,PGR, HLA-G, ANXA1 combined with HP-IgG antibody detection for gastric cancer and precancerous lesions

表5 血清G-17、PGR、HLA-G、ANXA1聯(lián)合HP-IgG抗體檢測對胃癌和癌前病變鑒別診斷的風(fēng)險(xiǎn)評估模型Table 5 Risk assessment model of serum G-17,PGR,HLA-G,ANXA1 combined with HP-IgG antibody detection for differential diagnosis of gastric cancer and precancerous lesions

表6 血清G-17、PGR、HLA-G、ANXA1聯(lián)合HP-IgG抗體檢測對胃癌和癌前病變的鑒別診斷效能Table 6 Differential diagnostic efficacy of serum G-17, PGR, HLA-G, ANXA1 combined with HP-IgG antibody detection for gastric cancer and precancerous lesions

3 討論

正常黏膜-慢性淺表性胃炎-慢性萎縮性胃炎-腸上皮化生-不典型增生-癌變是目前公認(rèn)的胃癌的一般演變過程，此過程稱之為癌前病變[1]。超聲、內(nèi)窺鏡、影像學(xué)檢查、血清檢查、病理組織活檢是目前臨床常用的胃癌診斷方法，但X 線、電子計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT)等影像學(xué)檢測具有輻射性，內(nèi)窺鏡以及病理組織活檢對機(jī)體創(chuàng)傷較大，臨床應(yīng)用均具有一定的局限性。血清學(xué)指標(biāo)具有方便、快捷等優(yōu)勢，已成為癌癥臨床診斷的研究趨勢。

胃癌前病變主要伴存于慢性萎縮性胃炎中，研究發(fā)現(xiàn)，慢性萎縮性胃炎患者確診后5年內(nèi)胃癌的年發(fā)病率為0.1%[9]。另外，研究表明，約80%的中至重度慢性萎縮性胃炎患者HP-IgG抗體檢測呈陽性[10]。本研究中結(jié)果顯示在出現(xiàn)胃癌前病變時(shí)，大部分患者均已發(fā)生HP感染，易誘發(fā)胃細(xì)胞發(fā)生癌變。推測HP感染可通過促進(jìn)胃黏膜細(xì)胞增生活躍增加脫氧核糖核酸(DNA)突變風(fēng)險(xiǎn)；另外，HP的代謝產(chǎn)物脂酶和氨具有破壞胃黏膜保護(hù)屏障的作用，進(jìn)一步誘發(fā)胃細(xì)胞發(fā)生癌變[11]。

PG包括PG-I和PG-Ⅱ兩個(gè)亞群，當(dāng)PGR異常時(shí)，提示可能發(fā)生胃黏膜損傷、胃部病變[12]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，癌前病變組PGR水平明顯低于健康對照組，且胃癌組低于癌前病變組。提示PG的水平變化與胃癌疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，隨著胃癌病程的進(jìn)展，HP感染陽性可影響PG-I和PG-Ⅱ表達(dá)，從而降低PGR 水平。推測在此進(jìn)程中胃黏膜細(xì)胞被大量損傷，腺體與主細(xì)胞數(shù)量減少，引起胃底的黏液頸細(xì)胞以及主細(xì)胞分泌PG-I的能力下降，而PG-Ⅱ還可由近端十二指腸Brunner腺以及胃竇幽門腺分泌，故總體表現(xiàn)為PGR明顯降低[13]。另有研究發(fā)現(xiàn)，HP感染可通過增加主細(xì)胞內(nèi)鈣離子流、磷酸肌醇以及環(huán)磷腺苷濃度刺激PG-Ⅱ分泌，并引起胃蛋白酶基因發(fā)生突變降低胃黏膜分泌PG-I，導(dǎo)致PGR水平下降逐漸顯著[14]。

G-17是一種多肽胃腸激素，研究發(fā)現(xiàn)，G-17水平變化與機(jī)體免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、胃癌細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移等病理過程密切相關(guān)[15]。本研究中，癌前病變組G-17 水平明顯高于健康對照組，胃癌組G-17 水平明顯高于健康對照組和癌前病變組。提示G-17的水平變化與胃癌疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，隨著胃癌病程的進(jìn)展，患者在HP感染陽性情況下，G-17 水平顯著升高。分析胃黏膜癌前病變和癌變可引起胃竇黏膜萎縮，兩者相互促進(jìn)胃酸的分泌量下降，導(dǎo)致G-17的分泌量增加、水平逐漸上升[16]。

HLA-G是一種非經(jīng)典的主要組織相容性抗原，具有維持正常機(jī)體生長、發(fā)育中的免疫耐受和穩(wěn)態(tài)作用[17]。本研究中，HLA-G的水平變化與胃癌疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，HLA-G在腫瘤的免疫逃逸過程中起著重要的作用，能有效幫助腫瘤細(xì)胞逃避宿主的免疫反應(yīng)，促進(jìn)胃癌的發(fā)生發(fā)展[18]。

ANXA1 是鈣離子依賴的磷脂結(jié)合蛋白家族中的一員，參與機(jī)體炎癥和免疫反應(yīng)、細(xì)胞的分化、增殖和凋亡、細(xì)胞內(nèi)外信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種生理過程[19]。研究發(fā)現(xiàn)，ANXA1與腫瘤發(fā)生、發(fā)展以及侵襲轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)[15]。本研究中，癌前病變組與胃癌組ANXA1 水平分別高于健康對照組與癌前病變組。胃癌HP-IgG 抗體陽性組ANXA1 水平明顯高于胃癌HP-IgG 抗體陰性組，癌前病變HP-IgG抗體陽性組ANXA1水平明顯高于癌前病變HP-IgG 抗體陰性組。提示ANXA1 的水平變化與胃癌疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。ANXA1可與促炎癥蛋白如膜受體蛋白(FPR)、S100 鈣結(jié)合蛋白A11 (S100A11)、細(xì)胞質(zhì)磷脂酶A2 (cPLA2)相互作用，可活化以上炎癥因子調(diào)節(jié)腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移，促進(jìn)胃癌的發(fā)生發(fā)展[20]。

同時(shí)，本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)血清G-17、PGR、HLA-G、ANXA1、HP-IgG 抗體單獨(dú)及聯(lián)合檢測對胃癌和癌前病變鑒別診斷的AUC 值分別為0.716、0.717、0.733、0.735、0.709、0.882，說明四者聯(lián)合HP-IgG抗體檢測對胃癌和癌前病變的鑒別診斷具有較好臨床應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，血清G-17、PGR、HLA-G、ANXA1的水平變化以及HP 感染與胃癌疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，血清G-17、PGR、HLA-G、ANXA1 聯(lián)合HP-IgG 抗體檢測對胃癌和癌前病變的鑒別診斷具有較好臨床應(yīng)用價(jià)值。