膠體金試紙法和化學(xué)發(fā)光法聯(lián)合檢測血清hCG的實用性觀察及結(jié)果異同分析

黃 珍 陳 真 朱華山

1 湘西州民族中醫(yī)院檢驗科,湖南省吉首市 416000; 2 吉首市人民醫(yī)院檢驗科

人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,hCG)主要由分化的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生的一種具有促進(jìn)性腺發(fā)育的糖蛋白激素,由α和β亞基組成。正常人體內(nèi)hCG含量極少,在受孕1周后血清hCG約50mIU/ml,至妊娠60～70d達(dá)到最高峰(8 000～320 000mIU/ml),持續(xù)1～2周后,逐漸下降至一定水平并維持至分娩[1]。測定hCG水平有助于在產(chǎn)前篩查、早期妊娠、異位妊娠、先兆流產(chǎn)、滋養(yǎng)層細(xì)胞疾病、腫瘤等方面為臨床診斷和監(jiān)測提供依據(jù)[2]。目前,檢測hCG 的方法有很多,如膠體金試紙法、酶聯(lián)免疫吸附試驗、放射免疫試驗、化學(xué)發(fā)光法等,而臨床實驗室最常用的檢測方法是膠體金試紙法和化學(xué)發(fā)光法。本文主要為觀察膠體金試紙法和化學(xué)發(fā)光法聯(lián)合檢測血清hCG的實用性,并就測定結(jié)果不相符的原因進(jìn)行分析,現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年1月—2022年8月在吉首市人民醫(yī)院不孕不育、門診,婦科、產(chǎn)科門診和住院診治患者(年齡14～65歲,平均年齡30.09歲)的血液樣本3 381例,血清無溶血、黃疸、脂血現(xiàn)象。

1.2 試劑與方法 hCG膠體金試紙由藍(lán)十字生物藥業(yè)(北京)有限公司生產(chǎn)。在室溫下將試紙條下端放入樣本血清中,其深度不超過Max線,5s后取出平放,5min時觀察結(jié)果。依據(jù)測試線(T線)和對照線(C線)的紅色條帶顯色強弱判讀結(jié)果:(1)無效:C線不顯色;(2)陰性:C線顯紅色,T線無紅色條帶出現(xiàn);(3)弱陽性:C線顯紅色,T線出現(xiàn)微弱紅色條帶且顏色較C線明顯淺很多;(4)陽性:C線顯紅色,T線出現(xiàn)紅色條帶且顏色較C線要淺;(5)強陽性:C線顯紅色,T線出現(xiàn)紅色條帶且顏色較C線相近或更深。貝克曼DXI800化學(xué)發(fā)光法分析儀,配套hCG試劑、定標(biāo)品、質(zhì)控品。儀器中分別設(shè)定了非稀釋和1∶200稀釋模式檢測程序,能在限定線性范圍內(nèi)定量測定血清hCG濃度。嚴(yán)格執(zhí)行室內(nèi)質(zhì)量控制程序,質(zhì)控結(jié)果顯示在控;參加2021年、2022年湖南省臨床檢驗中心室間質(zhì)量評價,成績回報均為優(yōu)異。本研究定義化學(xué)發(fā)光法所測hCG值為真值,考慮圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后婦女會出現(xiàn)hCG輕度升高[3],設(shè)定血清hCG≤5mIU/ml為非孕期婦女。 樣本用hCG膠體金試紙測定為陰性、弱陽性、陽性時,在化學(xué)發(fā)光儀上用非稀釋模式檢測hCG;樣本用hCG膠體金試紙測定為強陽性時,在化學(xué)發(fā)光儀上用稀釋模式檢測hCG。觀察膠體金試紙法和化學(xué)發(fā)光法聯(lián)合檢測血清hCG的實用性和兩種檢測方法結(jié)果異同情況。

2 結(jié)果

依據(jù)hCG膠體金試紙法檢測結(jié)果在化學(xué)發(fā)光儀上選擇非稀釋或稀釋測定模式的方法,總體符合率達(dá)99.23%,其中膠體金試紙測定為陰性、弱陽性、陽性時,在化學(xué)發(fā)光儀上用非稀釋模式檢測hCG的符合率分別為100.00%、99.34%、96.08%;膠體金試紙測定為強陽性時,在化學(xué)發(fā)光儀上用稀釋模式檢測hCG的符合率為99.64%。兩種檢測方法聯(lián)合檢測血清hCG時出現(xiàn)了86例結(jié)果不相符情況:當(dāng)膠體金試紙法測定為陰性時,樣本中有80例化學(xué)發(fā)光法檢測值為5.17～33.97mIU/ml;當(dāng)膠體金試紙法測定為弱陽性時,樣本中有4例化學(xué)發(fā)光法檢測值<2mIU/ml,還有1例樣本檢測值>270 000mIU/ml;當(dāng)膠體金試紙法測定為陽性時,樣本中有1例檢測值為1.15mIU/ml。見表1。

表1 兩種方法測定3 381例血清hCG結(jié)果比較

3 討論

貝克曼DXI800化學(xué)發(fā)光法分析儀定量檢測hCG水平,檢測時長約20min,儀器設(shè)定了兩個檢測模式:在非稀釋模式檢測,線性范圍<1 350mIU/ml,如遇樣本中分析物高于定量上限濃度值,則回報結(jié)果>1 350mIU/ml;在稀釋模式檢測,線性范圍1 050～270 000mIU/ml,如遇樣本中分析物低于定量下限濃度值,則回報結(jié)果<1 050mIU/ml。本文發(fā)現(xiàn)3 381例樣本中有1 655例hCG<1 050mIU/ml,1 674例hCG>1 350mIU/ml,若因檢測模式選擇不當(dāng),儀器回報結(jié)果為“<1 050mIU/ml”或“>1 350mIU/ml”,則需更換檢測模式再次檢測樣本以求具體數(shù)值。但化學(xué)發(fā)光法試劑、耗材成本昂貴,重復(fù)檢測樣本,既加大了項目成本支出,又拖延了結(jié)果報告時間。因此,尋找一個可預(yù)估樣本hCG水平的快速篩查方法,繼而在化學(xué)發(fā)光儀上選擇合適的檢測模式是很有臨床意義的。

臨床工作中,hCG膠體金試紙法有著較為凸顯的實用特點:成本低、速度快。檢測過程操作簡便不需其他設(shè)備,幾分鐘即可用肉眼觀察結(jié)果,且在一定濃度范圍內(nèi),試紙條的檢測線條帶顏色隨著樣品濃度的增高而逐漸加深,對照線相對檢測線也會呈現(xiàn)出一定的規(guī)律變化。利用這種規(guī)律的變化可以用于初步估算血清中hCG水平[4]。

本文根據(jù)膠體金試紙測法和化學(xué)發(fā)光法的特點,聯(lián)合兩種方法檢測血清hCG含量,充分發(fā)揮膠體金試紙法的優(yōu)勢,有利于在化學(xué)發(fā)光儀器上選擇合適的檢測模式,既能彌補化學(xué)放光法的缺陷,減少不必要的重測,節(jié)約檢測成本,又能更快回報結(jié)果,為患者贏得就診時間。本文結(jié)果顯示,膠體金方法篩選出陰性、弱陽性、陽性樣本時,在化學(xué)發(fā)光儀上用非稀釋模式檢測,膠體金方法篩選出強陽性樣本時,在化學(xué)發(fā)光儀上用稀釋模式檢測,這種依據(jù)膠體金試紙測定結(jié)果繼而在化學(xué)發(fā)光儀上選擇不同檢測模式的方法,總體檢測模式符合率可達(dá)99.23%。同時,特別關(guān)注膠體金試紙法陽性、強陽性時,化學(xué)發(fā)光法有25例樣本需要更改檢測模式再次檢測血清hCG濃度。可能血清hCG在878.91～1 891mIU/ml濃度范圍,膠體金試紙檢測線與對照線的強弱顯色規(guī)律并不明朗或存在判讀結(jié)果的個人差異,提示操作者需要更多地觀察、比對和總結(jié)才能正確判斷兩者關(guān)聯(lián)度,以提升檢測模式符合率。

本文結(jié)果顯示,聯(lián)合膠體金試紙法和化學(xué)發(fā)光法檢測血清hCG時,兩種方法出現(xiàn)了結(jié)果不相符情況,可分為三種情形來分析。(1)膠體金“假陰性”現(xiàn)象。膠體金測定為陰性時,80例樣本化學(xué)發(fā)光法測量值為5.17～33.97mIU/ml,其中76例化學(xué)發(fā)光法測量值為5.17～20.03mIU/ml的情況,可以用兩種檢測方法學(xué)靈敏度來解釋(膠體金試紙法檢測限不高于25mIU/ml,化學(xué)發(fā)光法檢測限>0mIU/ml),在妊娠早期,血清hCG濃度較低且未達(dá)到膠體金法檢測閾值或該濃度范圍處于膠體金試紙檢測限附近,易出現(xiàn)膠體金檢測為陰性結(jié)果現(xiàn)象,但并不是所有該濃度范圍的樣本的膠體金檢測結(jié)果都為陰性。另有4例測量值為27.03～33.97mIU/ml的樣本出現(xiàn)了膠體金假陰性情況,考慮為有效樣本相對不足,捕獲抗體或金標(biāo)液沒有發(fā)生免疫反應(yīng)等情況。另有學(xué)者指出檢測體系中膜的流動性不好(流速太快或太慢)、金顆粒釋放不充分、鹽量不足、體系中酸度不適宜也會使膠體金試紙產(chǎn)生假陰性現(xiàn)象[5]。(2)膠體金試紙法測定為弱陽性時,有1例樣本用化學(xué)發(fā)光法檢測值>270 000mIU/ml,在將該樣本稀釋5倍后,再次用膠體金試紙法檢測,結(jié)果顯示出強陽性,認(rèn)定此為膠體金試紙的“鉤狀效應(yīng)”現(xiàn)象[6]。出現(xiàn)這種現(xiàn)象可以從膠體金試紙雙抗體夾心法無法避免的技術(shù)缺陷來考慮,樣本中的待測抗原含量遠(yuǎn)高于試劑中的抗體含量,嚴(yán)重打破了抗原、抗體特異性結(jié)合的最適比例,導(dǎo)致抗體抗原復(fù)合物形成減少、解離增加,在某種意義上可歸屬于試紙法免疫反應(yīng)失敗而出現(xiàn)一種類似“假陰性”現(xiàn)象,可以通過稀釋樣本并重新檢測來確認(rèn)該現(xiàn)象[6-7]。與其他研究一致[8],膠體金試紙的“鉤狀效應(yīng)”并不是所有化學(xué)發(fā)光法檢測值>270 000mIU/ml的樣本都會出現(xiàn),只是會大概率出現(xiàn)在高濃度hCG水平的樣本中。另有學(xué)者報道過膠體金陰性,hCG化學(xué)發(fā)光測定值卻很高的現(xiàn)象[9]。這提示血清hCG水平極高時,有可能發(fā)生膠體金試紙法陰性或弱陽性現(xiàn)象,應(yīng)加以關(guān)注。(3)膠體金測定4例弱陽性和1例陽性樣本,經(jīng)化學(xué)發(fā)光法檢測均為陰性(<2mIU/ml),即膠體金“假陽性”現(xiàn)象?？梢詮囊韵聨讉€方面來解釋:①膠體金技術(shù)缺陷。出現(xiàn)假陽性情況包括但不限定與金標(biāo)粒子、捕獲抗體、硝酸纖維膜以及所加化學(xué)試劑都有著密切關(guān)系,主要原因可考慮為膠體金試紙不合適的表面膜、金標(biāo)結(jié)合物受損、捕獲抗體的疏水作用或者所帶電荷[5]。另有學(xué)者在研究中發(fā)現(xiàn)膠體金試紙檢測限越低,越易出現(xiàn)假陽性結(jié)果[10]。②樣本因素。長期服用某種藥物[11]、樣本污染[5]、凝固不全、高凝狀態(tài)或高濃度纖維蛋白原[12],可在檢測線與膠體金顆粒形成非特異性結(jié)合,致使膠體金試紙出現(xiàn)假陽性。③內(nèi)源性物質(zhì)。因某些緣由可能檢測了游離的α亞基、β-核心片段等無活性的hCG分子結(jié)構(gòu),也可能檢測了與 hCG 分子結(jié)構(gòu)相似或有部分同源性的FSH、LH、TSH的α亞基,轉(zhuǎn)化生長因子-β,血小板源性生長因子等物質(zhì)而出現(xiàn)膠體金假陽性現(xiàn)象[13-15]。而血清中存在補體[16]、嗜異性抗體[17]、RF[18]、AFP[16]等特殊物質(zhì),亦可非特異絡(luò)合膠體金試紙中單克隆抗體導(dǎo)致假陽性結(jié)果的發(fā)生。另有研究報道稱,在更年期、排卵期、雙側(cè)卵巢切除、惡性腫瘤、自身免疫疾病等特殊時期易使膠體金方法出現(xiàn)假陽性[1,18-19]。通過56℃孵浴[16],尿素解離試驗[18],添加異嗜性抗體阻斷劑[17]、表面活性劑Tween 20[20]可有效預(yù)防假陽性結(jié)果發(fā)生。某些不是很強的干擾因素可通過稀釋樣本而失去干擾能力。重復(fù)檢測或通過替代方法同時檢測血、尿hCG,在一定程度上亦可排除由于試劑和方法學(xué)原因造成的假陽性[15]。

綜上所述,依據(jù)膠體金試紙測定結(jié)果在化學(xué)發(fā)光儀上選擇不同檢測模式的聯(lián)合檢測血清hCG的方法,既可以獲得高準(zhǔn)確度的結(jié)果,又可以有效降低檢測成本,節(jié)約檢測時間,更快回報檢測結(jié)果。其實用性、經(jīng)濟(jì)性、高效性,值得在臨床實驗室中推廣。同時,需要結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)、影像學(xué)特征及其他輔助檢查進(jìn)行綜合考慮,有效識別檢測結(jié)果的假陰性、假陽性現(xiàn)象,避免對臨床診治工作的誤導(dǎo)。