γ突觸核蛋白在肝癌中表達(dá)的相關(guān)性研究*

王志春

江西省上猶縣人民醫(yī)院腫瘤血液科 341200

目前,手術(shù)是治療原發(fā)性肝癌主要手段之一,早期明確診斷并及時(shí)給予針對(duì)性治療可以使患者獲得較好預(yù)后。研究指出,復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是影響原發(fā)性肝癌患者預(yù)后的主要因素[1]。原發(fā)性肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移機(jī)制復(fù)雜,某些與腫瘤相關(guān)的因子可能起到了重要作用。突觸核蛋白是一種小的、可溶的、高度保守的神經(jīng)元蛋白,與神經(jīng)退行性疾病和癌癥有關(guān)[2]。近年來,在各種類型的惡性腫瘤患者中,特別是疾病的晚期,檢測(cè)到γ突觸核蛋白表達(dá)水平升高。研究表明,γ突觸核蛋白的過度表達(dá)損害了正常的有絲分裂檢查點(diǎn)控制,導(dǎo)致多核化和細(xì)胞更快生長(zhǎng)[3]。在體外實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物模型中,γ突觸核蛋白也被證明可以促進(jìn)侵襲和轉(zhuǎn)移[4]。本研究分析了γ突觸核蛋白在原發(fā)性肝癌組織中表達(dá)水平及與患者臨床病理特征的相關(guān)性,旨在為原發(fā)性肝癌治療以及延長(zhǎng)患者生存期限提供臨床依據(jù),現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2019年1月—2021年1月我院手術(shù)切除的20例原發(fā)性肝癌組織及10例癌旁組織標(biāo)本為研究對(duì)象。入選標(biāo)準(zhǔn):(1)術(shù)前未接受生物免疫療法或者放化療等治療;(2)初次行手術(shù)治療;(3)臨床資料以及隨訪資料齊整;(4)手術(shù)標(biāo)本均經(jīng)術(shù)后病理診斷證實(shí)。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)伴有其他部位惡性腫瘤;(2)隨訪過程中失訪;(3)術(shù)前伴有免疫系統(tǒng)疾病、心腦血管或者血液系統(tǒng)疾病;(4)術(shù)前存在全身性感染者;(5)繼發(fā)性肝癌。20例患者中,男15例,女5例;年齡34～77歲,平均年齡(54.97±10.68)歲;另獲取其中10例原發(fā)性肝癌組織邊緣5cm 以上正常肝臟組織,標(biāo)本均放置于低溫保存管,快速均經(jīng)液氮處理,然后放置于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色法測(cè)定γ突觸核蛋白:石蠟包埋處理標(biāo)本,連續(xù)切片,將厚度控制在4μm左右;進(jìn)行切片脫蠟以及水化,通過高壓鍋修復(fù)抗原,時(shí)間為2min;封閉液孵育60min;滴加γ突觸核蛋白一抗工作液50μl,溫度調(diào)整為4℃孵育過夜處理;取磷酸鹽緩沖液沖洗3次,然后將磷酸鹽緩沖液清除,滴加二抗工作液50μl,于室溫下孵育30min,加入二氨基聯(lián)苯胺顯色,分別取蘇木精及梯度酒精進(jìn)行復(fù)染和脫水,然后進(jìn)行固封以及鏡檢。通過熒光倒置顯微鏡對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行觀察,陽性細(xì)胞比例計(jì)分:4分(陽性細(xì)胞比例>75%)、3分(>50%～75%)、2分(25%～50%)、1分(<25%);染色強(qiáng)度計(jì)分:3分(腫瘤細(xì)胞強(qiáng)染色)、2分(中度染色)、1分(輕度染色)和0分(無染色)。根據(jù)陽性細(xì)胞比例計(jì)分以及和染色強(qiáng)度計(jì)分的乘積作為為最終評(píng)分,其中9～12分(+++)、5～8分(++)、1～4分(+)、0分(-)。

1.2.2 臨床特征及隨訪收集:由專人收集患者的一般資料,包括年齡、性別、民族、體質(zhì)量指數(shù)、TNM分期、腫瘤數(shù)目、門靜脈癌栓、病灶直徑、肝硬化、組織學(xué)分化程度、肝外轉(zhuǎn)移等。出院后第1 天為隨訪日起點(diǎn),通過門診復(fù)查或者電話、微信等電子通信的方式進(jìn)行隨訪跟蹤,隨訪日期至2022年8月,以患者死亡為終止隨訪指征。采用雙盲錄入法行數(shù)據(jù)錄入,以減少人為性錯(cuò)誤,并進(jìn)行二次核對(duì),以確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有患者數(shù)據(jù)錄入至Excel 2017中,通過SPSS22.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行專業(yè)處理。計(jì)數(shù)資料以百分比(%)表示,采用χ2檢驗(yàn);Cox回歸分析原發(fā)性肝癌患者預(yù)后的影響因素;P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝癌組織與癌旁組織中γ突觸核蛋白表達(dá)情況 肝癌組織中γ突觸核蛋白表達(dá)陽性率為60.00%(12/20),癌旁組織中γ突觸核蛋白表達(dá)陽性率為0.00%,肝癌組織中γ突觸核蛋白表達(dá)陽性率顯著高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.000,P=0.002)。

2.2 不同臨床病理特征肝癌組織中γ突觸核蛋白表達(dá)陽性率比較 不同病灶直徑、TNM分期以及有無肝外轉(zhuǎn)移患者癌組織中γ突觸核蛋白表達(dá)陽性率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);不同性別、年齡、民族、體質(zhì)量指數(shù)、組織學(xué)分化程度、有無癌栓、腫瘤數(shù)目以及有無肝硬化患者癌組織中γ突觸核蛋白表達(dá)陽性率比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。

表1 不同臨床病理特征肝癌組織中γ突觸核蛋白表達(dá)陽性率比較[n(%)]

2.3 γ突觸核蛋白表達(dá)陽性與陰性患者死亡率比較 隨訪至2022年8月,20例患者中死亡11例,存活9例;其中γ突觸核蛋白陽性患者死亡率高于陰性患者(χ2=4.849,P=0.028<0.05),見表2。

表2 γ突觸核蛋白表達(dá)陽性與陰性患者死亡率比較[n(%)]

2.4 影響原發(fā)性肝癌手術(shù)患者預(yù)后的多因素分析 多因素Cox模型結(jié)果顯示,TNM分期、肝外轉(zhuǎn)移、γ突觸核蛋白陽性、有癌栓是影響原發(fā)性肝癌手術(shù)患者預(yù)后的影響因素(P<0.05),見表3。

表3 影響原發(fā)性肝癌手術(shù)患者預(yù)后的多因素分析

3 討論

原發(fā)性肝癌是臨床中常見的一種惡性腫瘤,其發(fā)病與病毒性肝炎、黃曲霉素、遺傳因素、生活方式及肝硬化等密切相關(guān),常見臨床表現(xiàn)為肝區(qū)疼痛以及消化道癥狀等,多見于中老年人群,男性發(fā)病率高于女性,然而近年來原發(fā)性肝癌發(fā)病呈上升及年輕化趨勢(shì)。研究指出,原發(fā)性肝癌患者5年生存率及中位生存時(shí)間較低,5年生存率低于40%,中位生存時(shí)間低于34個(gè)月[5]。近年來,隨著生物信息學(xué)、基因檢測(cè)技術(shù)發(fā)展,多種新型腫瘤標(biāo)志物逐漸被發(fā)現(xiàn)[6]。不過對(duì)于原發(fā)性肝癌發(fā)病分子機(jī)制尚不清楚,仍然需要進(jìn)一步研究,從而發(fā)現(xiàn)其治療靶點(diǎn)。

γ突觸核蛋白最早見于乳腺癌細(xì)胞中,在機(jī)體正常組織中多見于周圍神經(jīng)系統(tǒng),在心臟、結(jié)腸、卵巢以及睪丸組織中較少。徐丹等[7]的Meta分析發(fā)現(xiàn),γ突觸核蛋白在胃癌組織中呈顯著高表達(dá),且與患者TNM分期、浸潤(rùn)深度以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究結(jié)果顯示,肝癌組織中γ突觸核蛋白表達(dá)陽性率為60.00%,而在癌旁組織中無一例陽性表達(dá),說明γ突觸核蛋白在原發(fā)性肝癌患者中呈高表達(dá)。目前對(duì)于γ突觸核蛋白在原發(fā)性肝癌中表達(dá)升高機(jī)制尚不清楚。分析其原因可能為,γ突觸核蛋白受到其他的轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控或者編碼基因突變等原因所致[8-9]。同時(shí),本文中,γ突觸核蛋白表達(dá)陽性率與原發(fā)性肝癌患者病灶直徑、TNM分期以及有無肝外轉(zhuǎn)移有關(guān),病灶直徑越大、TNM分期越高以及出現(xiàn)肝外轉(zhuǎn)移,其γ突觸核蛋白表達(dá)陽性率越高,說明γ突觸核蛋白表達(dá)陽性率與原發(fā)性肝癌患者的病情嚴(yán)重程度有關(guān)。γ突觸核蛋白異常表達(dá)在惡性腫瘤發(fā)生及發(fā)展過程中起到了重要作用,有研究指出,γ突觸核蛋白參與了微血管調(diào)節(jié)、絲裂原活化蛋白激酶、AKT-mTOR信號(hào)以及雌激素信號(hào)等信號(hào)通路,而絲裂原活化蛋白激酶等信號(hào)通路在肝癌細(xì)胞增殖及遷移中起到了重要作用[10]。多數(shù)研究指出,γ突觸核蛋白能夠促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶-2、基質(zhì)金屬蛋白酶-9以及基質(zhì)金屬蛋白酶-24等分泌,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[11]。腫瘤細(xì)胞的侵襲及遷移是導(dǎo)致惡性腫瘤患者病情進(jìn)展的主要因素,TGF-β-Twist1信號(hào)通路能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞侵襲及遷移,敲除γ突觸核蛋白基因可抑制TGF-β-Twist1信號(hào)通路的誘導(dǎo)作用[12]。因而γ突觸核蛋白異常表達(dá)可能促進(jìn)了原發(fā)性肝癌發(fā)生及發(fā)展。

據(jù)報(bào)道,許多轉(zhuǎn)錄物參與了惡性腫瘤某些關(guān)鍵的生物學(xué)過程,包括細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、血管生成、免疫反應(yīng)和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等,與患者生存率存在密切關(guān)系[13]。本研究中,隨訪結(jié)束后發(fā)現(xiàn),20例原發(fā)性肝癌患者中死亡11例,存活9例,其中γ突觸核蛋白陽性患者死亡率高于陰性患者(P<0.05),說明γ突觸核蛋白與原發(fā)性肝癌患者預(yù)后密切相關(guān)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),多因素Cox模型結(jié)果顯示,γ突觸核蛋白陽性是影響原發(fā)性肝癌手術(shù)患者預(yù)后的影響因素(P<0.05),說明γ突觸核蛋白陽性表達(dá)可以為原發(fā)性肝癌患者預(yù)后預(yù)測(cè)提供臨床參考,可能作為評(píng)估原發(fā)性肝癌患者預(yù)后新的標(biāo)志物。這為原發(fā)性肝癌靶向治療等療法提供依據(jù),從而有助于改善患者預(yù)后,以盡可能延長(zhǎng)生存時(shí)間。

綜上所述,原發(fā)性肝癌組織中γ突觸核蛋白表達(dá)水平升高,其水平與患者病灶直徑、組織學(xué)分化程度、TNM分期以及肝外轉(zhuǎn)移具有密切關(guān)系,且γ突觸核蛋白表達(dá)陽性是原發(fā)性肝癌不良預(yù)后的重要危險(xiǎn)因素。不過本研究已存在一定局限,樣本量偏少,且均為本院患者,隨后可擴(kuò)大樣本量,開展大樣本多中心研究,進(jìn)一步證實(shí)原發(fā)性肝癌組織中γ突觸核蛋白表達(dá)水平與患者病情及預(yù)后的關(guān)系。