毛細管電泳法測定解酒類保健液中葛根素的含量

劉芳 趙曉冬 李寧 袁昕蓉

【摘要】應用毛細管電泳法快速測定解酒類保健液中葛根素的含量。采用毛細管電泳法，以20 mmol/L硼砂-20 mmol/L磷酸二氫鈉溶液（pH8.5）-10%甲醇為緩沖液，未涂層的熔融石英毛細管柱（56 cm×50μm），檢測波長254 nm，電壓20 kV，柱溫20℃，進樣壓力30 mbar，進樣時間6 s。葛根素在10～300μg/mL的濃度范圍內與峰面積線性關系良好（R=0.9952）。本方法簡便快速、準確、經濟性好，可用于測定解酒類保健液中葛根素的含量。

【關鍵詞】毛細管電泳法；解酒類保健液；葛根素

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.04.020

Determination of Puerarin in Anti-alcohol Health Liquid by Capillary Electrophoresis

LIU Fang， ZHAO Xiaodong， LI Ning， YUAN Xinrong

（Shenyang Institute for Food and Drug Control， Shenyang 110122， China）

Abstract： To establish a rapid method for the determination of puerarin in anti-alcohol health liquid by capillary electrophoresis. The separation was performed on a uncoated fused silica capillary column （56 cm×50μm）， the detection wavelength was 254 nm， the separation voltages were 20 kV， the column temperature was 20℃， the injection pressure was 30 mbar， injection time was 6 s， and 20 mmol/L sodium borate-20 mmol/L sodium dihydrogen phosphate （pH8.5）-10% methanol was selected as the running buffer. Puerarin had a good linear relationship within the concentration ranges of 10～300μg/mL （R=0.9952）. This method is simple， rapid， accurate and very economical， and can be used for the determination of puerarin in anti-alcohol health liquid.

Key words： capillary electrophoresis； anti-alcohol health liquid； puerarin

毛細管電泳（Capillary Electrophoresis，CE）又稱高效毛細管電泳（High Performance Capillary Electrophoresis，HPCE），是20世紀80年代后期迅速發展起來的一項新型液相分離技術。CE把經典電泳技術與現代微柱分離技術完美結合，是分析領域繼HPLC之后的又一重大進展[1]。

葛根有解肌退熱、生津止渴、解酒毒等功效[2]，葛根素是葛根中的主要成分。葛根及葛根素在臨床中被廣泛應用。葛根素常用于治療糖尿病、心腦血管疾病、動脈粥樣硬化、心肌缺血、腹瀉、發熱等，還可對抗乙醇中毒的各種并發癥。在解酒類保健品中葛根素也有著廣泛的應用[3-6]。

本文采用毛細管電泳法測定解酒類保健食品中葛根素的含量。與HPLC相比，CE實驗成本低、緩沖液用量小、出峰快、效率高，是一種高效環保的分析方法。

1材料與方法

1.1儀器與試藥

毛細管電泳儀（Agilent，G7100A）；未涂層的熔融石英毛細管柱（Agilent，56 cm×50μm）；電子天平（Sartorius，MSA125P）；pH計（Mettler，S210-K）。

葛根素（中國食品藥品檢定研究院，批號：110752-201816，含量：95.4%）；福祿壽三喜牌克勞克液（沈陽永大制藥，批號：20210803）；力克保健液（遼寧力克制藥，批號：20211122）。

1.2實驗方法

1.2.1電泳條件

未涂層的熔融石英毛細管柱（56 cm×50μm）；緩沖液為20 mmol/L硼砂-20 mmol/L磷酸二氫鉀溶液（pH8.5）-10%甲醇；檢測波長為254 nm；電壓為20 kV；溫度為20℃；進樣壓力為30 mbar，進樣時間6 s。每次測定前用緩沖液沖洗2 min。

1.2.2溶液配制

1）對照品溶液

精密稱取葛根素對照品10.0 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備溶液。葛根素濃度為1.0 mg/mL。

2）樣品溶液

取樣品5 mL，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，超聲提取5 min，搖勻靜置，取上清液經0.45μm微孔濾膜過濾備用。

2結果與分析

2.1專屬性

取上述對照品溶液和供試品溶液以及溶劑，分別在上述條件下測定，記錄色譜圖（見圖1）。樣品中葛根素與相鄰峰分離度均大于1.5，說明本方法專屬性良好。

2.2校準曲線

精密量取對照品溶液，用80%甲醇稀釋制得標準系列溶液，使葛根素濃度為10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、100μg/ mL、200μg/mL、300μg/mL，按本文1.2.1規定的電泳條件進樣。以濃度（μg/mL）為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程為：Y=1.2598X+77.864，R=0.9952。結果表明：在10～300μg/mL濃度范圍內，線性關系良好。

2.3精密度

取濃度為100μg/mL的對照品溶液，連續進樣6次，響應值RSD為1.53%。

2.4檢測限與定量限

將標準曲線最低點的溶液繼續稀釋，以信噪比=3計算檢測限，以信噪比=10計算定量限，測得葛根素的檢測限為0.5μg/mL，定量限為1.3μg/mL。

2.5重復性試驗

取同一批次克勞克液，按本文1.2.2給出的樣品溶液制備方法，平行制備6份溶液，按上述電泳條件進樣，計算得到葛根素的含量為0.2013 mg/mL，RSD為1.8%，表明本法重復性良好。

2.6回收率試驗

精密量取2種樣品各6份，每份5 mL，每種樣品分別加入葛根素對照品儲備液0.5 mL、1 mL、1.5 mL，每個濃度2份，用甲醇稀釋至25 mL，超聲提取5 min，搖勻靜置，取上清液經0.45μm微孔濾膜濾過，按上述電泳條件進樣，計算回收率。葛根素在高中低3個濃度的平均回收率及RSD見表1。

2.7樣品含量測定

取克勞克液及力克保健液，按本文1.2.2給出的樣品溶液制備方法制備樣品溶液，每批平行制備2份，按上述電泳條件進樣，計算2批樣品平均含量（見表1）。

3結論與討論

磷酸鹽與硼砂是常用的緩沖溶液[7]，僅用磷酸鹽與硼砂作為緩沖液，樣品峰無法達到很好的分離效果。有機溶劑作為增溶劑可以調整電滲流（Electro-Osmotic Flow，EOF）大小，一般會引起遷移時間的延長。在緩沖液中加入10%甲醇后，葛根素與相鄰峰的分離度達到2.5，可以較好分離。

本試驗考察了不同濃度緩沖液對結果的影響，增大濃度可以改善葛根素與樣品中其他峰的分離度，但濃度過大會延長遷移時間且峰型變差，最終確定緩沖液濃度為20 mmol/L。緩沖液的pH值是影響遷移時間和分離度的另一個重要因素。pH值的改變會影響電滲流，從而改變遷移時間[8-9]。本試驗考察了不同pH值緩沖液（pH值7.0～9.0）對結果的影響，發現遷移時間隨pH值增大而減小，在pH值為8.5時，有較好的峰型與分離效果。

CE法與HPLC相比，節約了時間與試劑用量，毛細管柱也比昂貴的液相色譜柱要經濟得多。唯一的不足之處在于毛細管系統的穩定性相較于液相系統差，這主要是毛細管電泳的分析機理所致[10-13]。為克服這個問題，本試驗在每5～6針樣品之間用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液、純水和運行緩沖液分別沖洗3 min，遷移時間和響應值都可以達到較好的重復性。因此本方法采用外標法而未采用常用于CE分析的內標法。

利用二極管陣列檢測器全光譜掃描功能（190～600 nm）分別采集標準溶液和樣品溶液的光譜圖。保留時間定性，通過比較標準溶液中葛根素的光譜圖（見圖2）與樣品溶液中可疑色譜峰光譜圖的重合性，進一步定性確證樣品中可疑色譜峰是否為葛根素。

該方法采用保留時間和光譜圖信息兩方面進行綜合定性分析，可有效避免在檢測工作中因定性失誤而出現假陽性樣品[14-15]。在光譜庫中添加葛根素對照品的光譜為參比光譜，將樣品峰的光譜進行比對，可以在缺少對照品的情況下快速定性樣品中是否含葛根素。本方法可以定性定量分析力克保健液中葛根素的含量，為解酒類保健品功效成分的檢測提供了新思路。

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【作者簡介】

劉芳，1983年出生，女，主管藥師，學士，研究方向為藥品及保健食品質量分析。

趙曉冬，1979年出生，男，主任藥師，碩士，研究方向為藥品及保健食品質量分析。

（編輯：李加鵬）