TOPSIS 法結合多指標成分綜合評價復方羅布麻片Ⅰ的質量

謝美曉，陳家儀，鄧雯姬，謝思敏，栗建明

（廣東省廣州市藥品檢驗所，廣東 廣州 510160）

復方羅布麻片Ⅰ為臨床常用的降血壓藥［1］，其中氫氯噻嗪、維生素B1、維生素B6的標示含量分別為每片1.6，0.5，0.5 mg［2］。含量均勻度檢查是控制小劑量制劑內在質量的重要指標［3］，但該制劑現行質量標準中無含量均勻度檢查項，僅對氫氯噻嗪進行含量測定及對維生素B1、維生素B6進行液相色譜鑒別。已有研究中僅有氫氯噻嗪和維生素B6、維生素B1的含量及氫氯噻嗪的含量均勻度測定，而無同時對氫氯噻嗪和維生素B6、維生素B1的含量及氫氯噻嗪含量的均勻度進行控制的方法［4-8］。優劣解距離（TOPSIS）算法是根據評價對象與理想化目標的接近程度進行優選的一種多指標決策分析方法，得分越高表明方案越好，能從多維度、綜合、全面的評價中成藥的質量。目前，越來越多的研究中運用TOPSIS法對中藥質量進行綜合評價［9-11］。為此，本研究中采用TOPSIS 法考察復方羅布麻Ⅰ片中氫氯噻嗪、維生素B1、維生素B6的含量及氫氯噻嗪含量的均勻度，以期為其質量標準修訂提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1260Ⅱ型安捷倫高效液相色譜儀（美國Agilent 公司），配有G7111A 四元泵，G7129A 自動進樣器，G7117C 二極管陣列（DAD）檢測器，OpenLab CDS 2.4色譜工作站；AG245 型梅特勒電子天平（精度為十萬分之一），Xp26 型梅特勒電子天平（精度為百萬分之一），均購于梅特勒- 托利多公司；P300H 型超聲波清洗器（德國Elmasonic公司，功率為250 W，頻率為40 kHz）。

1.2 試藥

復方羅布麻片Ⅰ（企業A，共27批；企業B，共22批；企業C，共17批）；陰性樣品（實驗室自制）；維生素B1對照品（批號100390-201806，純度為97.9%），維生素B6對照品（批號100116-201705，純度為100.00%），氫氯噻嗪對照品（批號100309-201404，純度為99.7%），均購于中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈（色譜純，德國Merck公司）；其他試劑（分析純，廣州化學試劑廠）；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Inertsil C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相：0.01 mol/ L 庚烷磺酸鈉溶液- 乙腈- 甲醇-二乙胺（400∶80∶20∶0.5，V/V/V/V，用20%磷酸溶液調至pH 至3.5）；流速：0.8 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：270 nm；進樣量：20μL。理論板數按維生素B1峰、維生素B6峰、氫氯噻嗪峰計均大于10 000。

2.2 溶液制備

混合對照品溶液：取維生素B1、維生素B6對照品各適量，精密稱定，加0.1 mol/L 鹽酸溶液制成每1 mL 含100μg 的對照品貯備液。取氫氯噻嗪對照品適量，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加乙腈20 mL與冰醋酸2 mL，超聲處理15 min，再加0.1 mol/L 鹽酸溶液50 mL，超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz）15 min，放冷，加0.1 mol/L 鹽酸溶液定容，搖勻，制成每1 mL 含100μg的對照品貯備液。分別精密吸取維生素B1、維生素B6對照品貯備液1.0 mL，氫氯噻嗪對照品貯備液3.0 mL，置10 mL容量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液定容，搖勻，即得。

供試品溶液：取樣品細粉適量（相當于維生素B10.5 mg），置50 mL 容量瓶中，加0.1 mol/L 鹽酸溶液適量，超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz）30 min 使溶解，用0.1 mol/L 鹽酸溶液定容，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

陰性對照品溶液：按處方，不加入維生素B1、維生素B6、氫氯噻嗪制備樣品0.1 g，按供試品溶液制備方法制備維生素B1、維生素B6、氫氯噻嗪陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：分別取2.2 項下3 種溶液各適量，按2.1 項下色譜條件進樣測定。供試品溶液色譜圖中，在與混合對照品溶液相同保留時間處有維生素B1、維生素B6、氫氯噻嗪色譜峰，且陰性對照溶液在此處無色譜峰干擾。色譜圖見圖1。

1.維生素B6 2.氫氯噻嗪 3.維生素B1A.混合對照品溶液 B.供試品溶液 C.陰性對照品溶液圖1 高效液相色譜圖1.Vitamin B6 2.Hydrochlorothiazide 3.Vitamin B1A.Mixed reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.1 HPLC chromatograms

線性關系考察、檢測限與定量限確定：分別精密吸取2.2項下氫氯噻嗪對照品貯備液3，2，4，5，2，2 mL，以及維生素B1和維生素B6混合對照品貯備液10，10，25，50，50，100 mL，置同一容量瓶中，加0.1 mol/L 鹽酸溶液定容，得系列混合對照品溶液。按2.1 項下色譜條件進樣測定，以峰面積（A）為縱坐標、進樣質量濃度（C，μg/mL）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程；分別以信噪比（S/N）為3∶1和10∶1時的質量濃度作為各化合物的檢測限和定量限。結果見表1。

表1 線性關系考察、檢測限與定量限確定結果Tab.1 Results of linear relation test，LOD and LOQ

精密度試驗：取2.2 項下混合對照品溶液適量，按2.1項下色譜條件連續進樣測定，記錄峰面積6次。結果氫氯噻嗪、維生素B1、維生素B6峰面積的RSD分別為0.02%，0.73%，0.37%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取樣品（企業A，批號為190703）6份，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定。結果樣品中氫氯噻嗪、維生素B6、維生素B1的平均含量分別為13.19，4.50，3.06 mg/ g，RSD分別為2.66%，1.90%，1.02%（n=6），表明方法重復性良好。

穩定性考察：取樣品（企業A，批號為190703），依法制備供試品溶液，分別于室溫下放置0，2，4，8，12，24，30 h 時按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果維生素B1、維生素B6和氫氯噻嗪峰面積的RSD分別為2.11%，2.28%，0.52%（n= 7），表明供試品溶液在30 h內穩定性良好。

加樣回歸試驗：取重復性試驗中的樣品0.06 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，平行6份，分成3組，分別精密加入2.2 項下對照品貯備液適量，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定，計算加樣回收率。結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果（n=6）Tab.2 Results of the recovery test（n=6）

2.4 樣品含量測定

標準規定氫氯噻嗪含量限度為每片1.36～1.84 mg，即標示量的85%～115%［2］。共測定66批樣品中維生素B6、維生素B1、氫氯噻嗪的含量。其中，企業A、企業B、企業C 氫氯噻嗪的含量均在85%～115%范圍內；企業A、企業B 維生素B6的含量均在85%～115%范圍內，企業C有11.76%的樣品超出85%～115%范圍；企業A、企業C 中分別有33.33%和70.59%的樣品超出85%～115%范圍。可見，僅對維生素B6、維生素B1進行液相鑒別不能完全評估樣品的優劣。結果見表3和圖2。

表3 樣品中維生素B6、維生素B1、氫氯噻嗪含量測定結果（%）Tab.3 Results of the content determination of vitamin B6，vitamin B1，and hydrochlorothiazide in samples（%）

圖2 樣品中維生素B6、維生素B1、氫氯噻嗪含量測定結果散點圖Fig.2 Scatter plot of the content determination of vitamin B6，vitamin B1 and hydrochlorothiazide in samples

2.5 含量均勻度

依據2020年版《中國藥典（四部）》通則0941 含量均勻度檢查法，A+2.2S≤L，片劑的L為20.00，但復方制劑中多種維生素或微量元素一般不檢查含量均勻度。本研究中主要測定氫氯噻嗪的含量均勻度，并以維生素B6、維生素B1的含量均勻度作為TOPSIS 分析數據。取樣品1 片，研細，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定。企業A、企業B、企業C各取10 批，企業A 有10 批樣品中氫氯噻嗪含量均勻度A+2.2S≤20，企業B 有2 批A+2.2S≥20，企業C 有7批A+2.2S≥20。詳見圖3。

圖3 A+2.2S值頻數柱形圖Fig.3 Frequency histogram of A+2.2S value

2.6 TOPSIS 分析

TOPSIS 分析：原始矩陣正向化→建立標準化矩陣Z→計算理想解（Z+）及負理想解（Z-）→計算到Z+的距離（D+）和到Z-的距離（D-）→計算歐式貼近度（Ci）。Ci為綜合評分。隨機選取企業A、企業B、企業C 各10 批樣品的含量測定數據（置信區間95%），并選取含量均勻度的數據進行TOPSIS 分析，評分越高，質量越優。含量測定綜合評分提示，企業B 質量最優，企業B 樣品中維生素B6及維生素B1質量優，企業A 樣品中氫氯噻嗪質量優，企業A、企業C 維生素B1樣品中得分均較低；含量均勻度綜合評分提示，企業A 質量最優，企業A樣品中維生素B6及氫氯噻嗪質量優，企業B 維生素B1質量優。結果見表4。以成分含量測定及含量均勻度作TOPSIS分析，權重為1，結果見表5。企業B質量最優，企業A次之，企業C最差。

表4 含量測定與含量均勻度結果的綜合評分Tab.4 Comprehensive score of content determination and content uniformity results

表5 不同企業的D+、D-及綜合評分Tab.5 Comprehensive score，D + and D - of different manufacturers

3 討論

復方羅布麻片Ⅰ現行質量標準中缺少氫氯噻嗪含量均勻度及維生素B1、維生素B6的含量測定項。TOPSIS法可將多維問題轉化為一維問題，提高了多指標綜合分析的科學性與準確性，為多成分的中藥質量分析評價提供了可靠的數據支撐。同時，在進行質量綜合評價時，若指標間有側重點，可使用層次分析法或熵權法計算相應的權重，再進行綜合分析［12-13］，結果更接近預期值。本研究中采用TOPSIS法結合維生素B1、維生素B6及氫氯噻嗪3 種成分的含量及含量均勻度對市場上3 家企業的復方羅布麻片Ⅰ質量進行綜合評價，企業B質量較好。

綜上所述，本研究中建立的方法簡便、快速、準確、重復性好，能用于維生素B1、維生素B6及氫氯噻嗪的含量及氫氯噻嗪的含量均勻度測定，為更好地控制復方羅布麻片Ⅰ的內在質量和生產工藝改進提供依據。