三種免疫檢測法對乙型肝炎血清學標志物的檢測價值分析

朱曉雨

乙型肝炎由乙型肝炎病毒(HBV)感染導致, 若患者未得到及時有效的治療, 可發展為肝硬化、肝癌,危及患者生命安全［1］。早期診斷對乙型肝炎的治療及預后具有重要意義［2］。乙型肝炎血清學標志物是臨床診斷HBV 感染的主要依據, 包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb 及HBcAb 5 項, 其 中HBsAg 是HBV感染后最先出現在血清中的病毒抗原, 故臨床主要以HBsAg 指標協助乙型肝炎的早期診斷。目前臨床常用的血清學檢測方法有膠體金免疫層析法、酶聯免疫法及化學發光免疫分析法等, 其中膠體金免疫層析法操作簡便, 但診斷特異度較低；酶聯免疫法成本低, 但存在操作步驟繁瑣、操作時間長等不足；化學發光免疫分析法靈敏度和準確度均較高, 但存在試劑穩定性差、發光過程短等問題［3,4］。基于此, 本研究比較了上述三種免疫檢測法對乙型肝炎血清學標志物的檢測價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年6 月～2020 年6 月于本院門診就診的57 例疑似乙型肝炎患者為研究對象, 納入標準：因疲倦乏力、惡心、食欲下降、口干等癥狀來院就診；初次接受乙型肝炎血清學標志物檢查；既往無肝病史；年齡>18 歲；影像學檢查及病歷資料完整。排除標準：合并血液系統疾病者；合并其他肝臟疾病者；合并心、腎等臟器功能不全者。其中, 男32 例, 女25 例；年齡21～75 歲, 平均年齡(39.28±14.21)歲；體質量40～72 kg, 平均體質量(53.59±7.47)kg。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 ①膠體金免疫層析法采用膠體金免疫層析分析儀(廣州埃克森生物科技有限公司, 粵械注準20222220802), 所用試劑盒均購自英科新創(廈門)科技有限公司。②酶聯免疫法采用BK-EL10A 型酶聯免疫檢測儀(山東博冠生物技術有限公司, 魯械注準20212220931)及配套洗板機, 所用試劑盒均購自沈陽惠民生物技術有限公司。③化學發光免疫分析法采用全自動電化學發光免疫分析儀(深圳安賽診斷技術有限公司, 粵械注準20222220387), 所用試劑盒均購自北京泰格科信生物科技有限公司。

1.2.2 檢測方法 采集患者清晨空腹靜脈血6 ml, 以14 cm 離心半徑, 3500 r/min 離心, 10 min 后取上清液,均分為3 份, 分別采用膠體金免疫層析法、酶聯免疫法及化學發光免疫分析法檢測乙型肝炎血清學標志物。

1.2.3 陽性標準 ①膠體金免疫層析法：若試紙條檢測線及對照線各出現一條紫紅色反應線, 則檢測結果為陽性；僅對照線顯色為陰性；對照線不顯色表明實驗失敗, 需重測。②酶聯免疫法：以吸光度(OD 值)/臨界值為標準, HBsAg、HBeAg、HBsAb 的OD 值/臨界值≥1.0, HBeAb、HBcAb 的OD 值/臨界值<1.0, 即可判定為陽性。③化學發光免疫分析法：以樣本信號/cut-off 值(s/co) 判 斷, HBsAg、HBeAg：s/co≥1 為 陽性, s/co<0.9 為陰性, 若s/co 為0.9～1.0 則需重復檢測確認；HBcAb、HBeAb：s/co>1 則為陰性, 反之為陽性；HBsAb 含量≥10 mU/ml 則為陽性, 反之為陰性。

1.2.4 熒光定量PCR 檢驗 采用AGS4800 型實時熒光定量PCR 儀(杭州安譽科技有限公司, 國械注準20173220921), 乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)定量檢測試劑盒由圣湘公司提供。取200 μl 血清加入450 μl DNA 濃縮液, 在100℃溫育器中進行10 min 預熱, 以12000 r/min 在冰凍離心機離心5 min 后, 將20 μl 上清液置入PCR 管, 設置正確程序后放入儀器設備中檢測；設置陽性標準品對照、強陽性與弱陽性對照、陰性對照,結束反應后采取Ct值作標準熒光曲線并計算DNA含量。1.3 觀察指標 ①統計實時熒光定量PCR 檢驗結果。②以實時熒光定量PCR 檢驗結果為金標準, 比較三種檢驗方法對乙型肝炎血清學標志物的陽性檢出率。③比較三種檢驗方法對HBsAg 的診斷效能, 準確性=(真陰性+真陽性)/總例數×100%；特異度=真陰性/(真陰性+假陽性)×100%；靈敏度=真陽性/(真陽性+假陰性)×100%。

1.4 統計學方法 采用SPSS19.0 統計學軟件處理數據。計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P<0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 實時熒光定量PCR 檢驗結果 實時熒光定量PCR 檢驗結果顯示, 陽性21 例, 陰性36 例。

2.2 三種檢驗方法對乙型肝炎血清學標志物的陽性檢出率比較 膠體金免疫層析法、酶聯免疫法及化學發光免疫分析法對HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBeAg、HBcAb的陽性檢出率比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 三種檢驗方法對乙型肝炎血清學標志物的陽性檢出率比較［n(%)］

2.3 三種檢驗方法對HBsAg 的檢驗結果及診斷效能比較 化學發光免疫分析法對HBsAg 的診斷準確性及靈敏度均高于膠體金免疫層析法, 差異有統計學意義(P<0.05)；化學發光免疫法對HBsAg 的診斷準確性高于酶聯免疫法, 差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 三種檢驗方法對HBsAg 的檢測結果及診斷效能比較(n, %)

3 討論

乙型肝炎患者臨床癥狀多表現為食欲不振、干嘔惡心和肢體乏力等, 若未得到及時治療, 可引發多種肝臟疾病, 如肝硬化、急慢性肝炎等, 嚴重影響降低患者生命質量［3］。乙型肝炎具有較高的傳染率, 傳染途徑包括醫源性感染、母嬰傳播、性傳播和血液傳播等［4］。因此, 對乙型肝炎進行有效、準確診斷是防治的關鍵。乙型肝炎血清學標志物是臨床診斷乙型肝炎感染的常用指標, 包括HBeAg、HBsAg、HBeAb 等, 可有效反映HBV 在人體內的轉變過程。酶聯免疫法、膠體金免疫層析法和化學發光免疫分析法均為臨床檢測血清學標志物的常用免疫檢測方法［5］。

酶聯免疫法是運用放射免疫技術檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法, 原理是將抗原或抗體和酶連接, 使其成為保持免疫活性的酶標抗原或抗體復合物, 然后加入底物, 經酶的催化作用變為有色產物, 依據顏色的深淺度對抗原或抗體的水平進行判斷, 常用來作定性或者定量的分析［6,7］。膠體金免疫層析法是以膠體金標記與抗原抗體反應相結合的免疫標記技術,采用膠體金標記抗體, 使抗原抗體反應和洗滌在同一滲濾膜(一般為硝酸纖維素)上, 利用微孔膜毛細血管作用向膜的另一端滲移, 反應后根據在膜上的顏色判斷結果。化學發光免疫分析法是運用化學發光物質經氧化等化學反應后形成激發態中間體, 通過免疫反應系統標記在被檢測標本上, 再用化學方法測定從激發態到基態狀態發出的光子量的方法。

本研究結果顯示, 膠體金免疫層析法、酶聯免疫法及化學發光免疫分析法對HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBeAg、HBcAb 的陽性檢出率比較差異無統計學意義(P>0.05)。與膠體金免疫層析法比較, 化學發光免疫分析法對HBsAg 的診斷準確性及靈敏度均更高；與酶聯免疫法比較, 化學發光免疫法對HBsAg 的診斷準確性更高, 提示化學發光免疫分析法應用于乙型肝炎血清學標志物檢測中具有較高的診斷準確性, 可為臨床診斷乙型肝炎提供可靠依據。分析原因為酶聯免疫法可有效測定乙型肝炎血清學標志物水平, 通過分析相關數據, 可獲取較為理想的檢測效果, 該方法具有成本低廉的優勢, 但操作較為復雜, 且易受到多種因素干擾,進而對檢測結果產生影響［8,9］。膠體金免疫層析法成本低廉, 且具有操作簡便、檢測時間短等優勢, 適用于緊急情況如急診等快速檢測, 但對檢測低濃度標本存在一定的局限性［10］。化學發光免疫分析法結合了化學發光測定技術與免疫反應的優點, 不易受外界因素的干擾, 對于低濃度標本亦有較高的靈敏度, 試劑穩定且有效期長、檢測范圍廣, 操作快速簡單［11］, 對乙型肝炎血清學標志物診斷準確性較高。

綜上所述, 膠體金免疫層析法、酶聯免疫法及化學發光免疫分析法均為乙型肝炎血清標志物檢測的常規免疫檢測法, 且各有優缺點, 相比之下, 化學發光免疫分析法的診斷準確性更高。