豬繁殖與呼吸綜合征病毒與多殺性巴氏桿菌混合感染的診斷

牛合霞

（邯鄲市大名縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，河北大名056900）

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）因病豬耳部皮膚呈藍(lán)紫色而被業(yè)內(nèi)人員稱(chēng)為“豬藍(lán)耳病”，該病以懷孕母豬早產(chǎn)、流產(chǎn)，或產(chǎn)出死胎、畸形胎、弱胎和仔豬呼吸困難為主要臨床特征。 PRRS 的病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV），目前我國(guó)豬病臨床上已發(fā)現(xiàn)的PRRSV 包括美洲型毒株（經(jīng)典毒株、高致病性毒株、類(lèi)NADC30 毒株、類(lèi)NADC34 毒株）和歐洲型毒株；美洲型毒檢出明顯多于歐洲型毒株。 感染PRRSV 的豬免疫系統(tǒng)被攻擊， 增加了細(xì)菌、 病毒和支原體感染幾率。PRRSV 流行毒株具有遺傳多樣性，變異快，傳播方式復(fù)雜。臨床上不斷的用藥和疫苗的使用加劇了PRRSV 變異。 上述現(xiàn)象進(jìn)一步加重了豬場(chǎng)PRRS 的防控難度。

多殺性巴氏桿菌屬于巴氏桿菌科、巴氏桿菌屬，是動(dòng)物呼吸道重要病原菌，可感染多種宿主（豬、牛、羊、兔、禽、野生動(dòng)物和寵物）, 是一種無(wú)鞭毛、無(wú)芽孢、革蘭氏陰性、短桿狀或球桿狀、致病性極強(qiáng)的細(xì)菌。 根據(jù)莢膜抗原的差異，可將多殺性巴氏桿菌分為5 種血清型（A、B、D、E、F型）， 其中A 型和D 型為我國(guó)流行多殺性巴氏桿菌主要的血清型，主要引起豬肺疫和豬傳染性萎縮性鼻炎。多殺性巴氏桿菌可造成嚴(yán)重的呼吸道癥狀，也可與其他病原協(xié)同致病，增加死亡率，降低飼料轉(zhuǎn)化率，對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展產(chǎn)生了嚴(yán)重威脅。豬場(chǎng)抗生素過(guò)量使用造成了多重耐藥的多殺性巴氏桿菌出現(xiàn)， 為該病防控帶來(lái)了更大困難。

河北某養(yǎng)殖場(chǎng)保育仔豬發(fā)病，根據(jù)臨床癥狀觀察、病理學(xué)檢查和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，初步判定該養(yǎng)殖場(chǎng)仔豬發(fā)生了PRRS 與巴氏桿菌病混合感染， 根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果對(duì)該豬群進(jìn)行治療，同時(shí)根據(jù)PRRSV 序列分析結(jié)果制定PRRS 防控措施。本文對(duì)保育仔豬PRRS 與巴氏桿菌病混合感染的發(fā)病情況、病理變化、實(shí)驗(yàn)室診斷及防制措施進(jìn)行了介紹， 可為養(yǎng)豬業(yè)的從業(yè)人員提供參考。

1 病豬臨床表現(xiàn)

2023 年3 月18 日，該場(chǎng)從周邊豬場(chǎng)外購(gòu)且未免疫過(guò)PRRS 疫苗的仔豬開(kāi)始發(fā)病，主要癥狀為病豬精神萎靡，吃料減少，豬耳部皮膚變成藍(lán)紫色， 同時(shí)伴有咳嗽； 病豬直腸溫度在40.5℃～42.0℃。 發(fā)病5 天后部分病豬開(kāi)始出現(xiàn)氣喘、腹式呼吸、被毛粗亂無(wú)光澤、體重下降，病豬陸續(xù)出現(xiàn)死亡。 發(fā)病7 天后發(fā)病率達(dá)到30%，死亡率為5%。

2 剖檢病變

對(duì)豬場(chǎng)送檢的4 頭病死仔豬剖檢的病變?nèi)缦拢憾科つw呈藍(lán)紫色（3/4）；頜下淋巴結(jié)和腹股溝淋巴結(jié)出血（2/4）；心包腔積有黃白色液體（1/4），心包與心外膜之間見(jiàn)灰白色、絲狀纖維素性分泌物（2/4），心外膜見(jiàn)出血點(diǎn)（1/4）；氣管和支氣管管腔內(nèi)見(jiàn)大量泡沫樣分泌物（2/4）；肺胸膜與肋胸膜之間見(jiàn)灰白色絲狀纖維素樣分泌物（2/4），肺尖葉、心葉的部分肺小葉呈深紅色、質(zhì)地堅(jiān)實(shí)（3/4），部分肺小葉可見(jiàn)氣腫（2/4）。 肝臟腫大，表面散在黃白色壞死灶（2/4）。 腎臟呈土黃色、散在針尖大小出血點(diǎn)（1/4）。 其他器官未見(jiàn)肉眼可見(jiàn)病變。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 病毒性疾病的分子生物學(xué)診斷

按照試劑盒說(shuō)明書(shū)程序，處理病料、提取病料RNA，進(jìn)行PRRSV、豬呼吸道冠狀病毒、偽狂犬病病毒和豬流感病毒的PCR 檢測(cè)，結(jié)果表明，送檢豬病料呈PRRSV 陽(yáng)性；其余3 種病毒均未檢出。將呈PRRSV 陽(yáng)性的PCR 產(chǎn)物委托生工生物工程 （上海） 股份有限公司進(jìn)行測(cè)序，將PRRSV 的測(cè)序結(jié)果與國(guó)際序列進(jìn)行BLAST 比對(duì)，序列比對(duì)結(jié)果顯示，該豬場(chǎng)仔豬病料中檢出的PRRSV 與類(lèi)NADC30 毒株高度同源。

3.2 細(xì)菌分離鑒定

無(wú)菌操作取病死豬心包積液、有纖維素樣分泌物的肺臟和氣管分泌物，進(jìn)行涂片，采用美蘭染色和革蘭氏染色，美蘭染色鏡檢結(jié)果，發(fā)現(xiàn)典型的兩級(jí)著色的短桿菌； 革蘭氏染色鏡檢結(jié)果，為革蘭氏染色陰性、無(wú)芽孢、短桿狀或球桿狀的菌。

無(wú)菌操作取病死豬有纖維素樣分泌物的肺臟和氣管分泌物分別接種于含10%新生牛血清TSA 平板、 十六烷基三甲基溴化銨瓊脂平板（CA）和麥康凱瓊脂平板（MA），37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24～36 小時(shí)， 按常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)菌分離純化。 細(xì)菌學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，接種病料的含10%新生牛血清TSA 平板上生長(zhǎng)出圓潤(rùn)、灰白色、透明或半透明的小菌落；十六烷三甲基溴化銨瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板上均無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。取純化細(xì)菌的單菌落進(jìn)行美蘭染色和革蘭氏染色，這兩種染色結(jié)果與病料染色結(jié)果相同。 初步判定，送檢豬病料純化的2 株細(xì)菌均為多殺性巴氏桿菌，分別命名為P1 株和P2 株。

3.3 藥敏試驗(yàn)

挑取分離純化2 株細(xì)菌培養(yǎng)物接種于含10%新生牛血清的TSB 中，于37℃振蕩（220 轉(zhuǎn)/分鐘） 培養(yǎng)16 小時(shí)， 取適量菌液采用紙片擴(kuò)散（K-B）法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。 結(jié)果表明，2 株分離菌對(duì)頭孢噻肟和阿米卡星均極敏，對(duì)新霉素、慶大霉素和大觀霉素均高敏，對(duì)卡那霉素、阿莫西林和強(qiáng)力霉素均低敏，對(duì)其余4 種藥物均耐藥（見(jiàn)表）。

藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果（抑菌圈直徑：毫米）

4 小結(jié)與討論

綜合發(fā)病仔豬的臨床癥狀、病理剖檢結(jié)果及實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果， 判定該場(chǎng)外購(gòu)的仔豬發(fā)生了PRSSV 與多殺性巴氏桿菌的混合感染， 建議采取以下防控措施：

4.1 PRSS 的防控措施

目前沒(méi)有特效藥物治療PRSS。因此，在該病防控方面，建議做好以下工作：

嚴(yán)格執(zhí)行病死豬的無(wú)害化處理制度；及時(shí)清除傳染源，切斷傳播途徑。 對(duì)引進(jìn)的豬要嚴(yán)格進(jìn)行檢疫，豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測(cè)呈陰性也要隔離1 周。豬繁殖與呼吸綜合征易引起豬繼發(fā)性感染或混合感染， 導(dǎo)致死亡率大幅度增加，發(fā)現(xiàn)疑似病例應(yīng)盡快確診，隔離病豬，并對(duì)豬舍加強(qiáng)消毒。 及時(shí)淘汰發(fā)病豬，隔離飼養(yǎng)感染豬繁殖與呼吸綜合征病毒后康復(fù)仔豬，育肥豬出欄后圈舍及用具及時(shí)進(jìn)行徹底消毒后再使用。在豬存欄期間，要確保豬舍空氣流通，同時(shí)也要合理控制溫濕度。 冬季更要做好通風(fēng)與保溫工作。 豬舍合理控制飼養(yǎng)頭數(shù)，密度不宜過(guò)大。 養(yǎng)殖企業(yè)應(yīng)重視PRSS 的血清學(xué)和病原學(xué)監(jiān)測(cè)，根據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果及時(shí)做好PRSS 的預(yù)警工作。 建議對(duì)病料中含有的豬繁殖與呼吸綜合征病毒進(jìn)行測(cè)序與序列分析， 提高選擇豬繁殖與呼吸綜合征疫苗的精準(zhǔn)性。 若豬場(chǎng)檢測(cè)出的PRRSV 與現(xiàn)有疫苗毒株序列高度同源，可以考慮給未發(fā)病仔豬接種豬繁殖與呼吸綜合征疫苗，否則不予考慮接種豬繁殖與呼吸綜合征疫苗。

4.2 豬巴氏桿菌病的防控措施

豬場(chǎng)應(yīng)重視豬舍衛(wèi)生與消毒工作。加強(qiáng)外購(gòu)仔豬的飼養(yǎng)管理，氣候不穩(wěn)定時(shí)要注意增強(qiáng)豬群的抵抗力，減少各種不良應(yīng)激反應(yīng)。 為控制豬細(xì)菌性疾病的發(fā)生發(fā)展和減少耐藥菌株出現(xiàn)，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，科學(xué)使用抗菌藥物，以免貽誤治療豬巴氏桿菌病的時(shí)機(jī)。待豬群情況穩(wěn)定后考慮給健康豬接種豬肺疫疫苗。 堅(jiān)持以預(yù)防為主，減少易感動(dòng)物數(shù)量，降低發(fā)病率。

4.3 豬病的鑒別診斷

根據(jù)耳部皮膚發(fā)紺、淺表淋巴結(jié)出血、肺實(shí)變、 腎臟病變初步判定發(fā)病仔豬存在病毒性疾病， 豬呼吸道病毒的鑒別診斷應(yīng)注意區(qū)分PRRSV、豬呼吸道冠狀病毒、偽狂犬病病毒和豬流感病毒等；根據(jù)心包炎、纖維素性肺炎等病理變化判定發(fā)病仔豬存在細(xì)菌性疾病，豬呼吸道細(xì)菌感染的鑒別診斷應(yīng)注意區(qū)分多殺性巴氏桿菌、副豬嗜血桿菌、豬鏈球菌等。 鑒于主訴先前診治效果較差，故建議對(duì)該場(chǎng)發(fā)病仔豬及時(shí)進(jìn)行病理學(xué)和病原學(xué)檢查，以較早控制仔豬病情蔓延。