蛋雞Ⅰ亞群禽腺病毒與大腸桿菌混合感染的診斷

王志昌

（邯鄲市大名縣農業農村局，河北大名056900）

腺病毒科目前被分為哺乳動物腺病毒屬和禽腺病毒屬， 其中禽腺病毒屬包含14 個與禽類有關的腺病毒種，它們具有共同的抗原性。 根據群特異性抗原的差異， 禽腺病毒屬被分為3 個亞群， Ⅰ亞群禽腺病毒主要引起雞包涵體肝炎、心包積水綜合征和肌胃糜爛癥，Ⅱ亞群禽腺病毒主要引起火雞出血性腸炎，Ⅲ亞群禽腺病毒主要引起雞減蛋綜合征。根據六鄰體基因和血清交叉中和試驗，已分離的I 亞群禽腺病毒可進一步分為禽腺病毒A、B、C、D、E 5 個種， 包含12 個血清型（血清1、2、3、4、5、6、7、8a、8b、9、10、11 型）。其中，血清4 型Ⅰ亞群禽腺病毒感染是我國家禽中流行的優勢血清型。

雞大腸桿菌病是由禽致病性大腸桿菌引起的一種局部或全身性傳染病。雞大腸桿菌廣泛分布于動物體內和養殖場周圍環境中，是一種機會性致病菌。 家禽主要通過呼吸道和消化道感染。由于禽的呼吸系統結構特殊， 肺與氣囊相通，氣囊廣泛的分布在雞胸腔和腹腔中，家禽的胸腔和腹腔沒有橫隔膜而相互連通。雞呼吸系統的這種結構為大腸桿菌感染提供了便利，大腸桿菌一旦突破上呼吸道的黏膜屏障，即可迅速進入胸腔和腹腔，感染雞的心臟、肺臟、肝臟、氣囊等部位，常引起心包炎、肝周炎、氣囊炎等病理損傷。雞大腸桿菌血清型多樣性導致不同血清型菌株制備的大腸桿菌疫苗之間交叉保護力低，更重要是由于大量耐藥菌株的出現，給防制禽大腸桿菌病帶來了挑戰。在臨床上大腸桿菌可以單獨發生或與其他病原（新城疫病毒、禽流感病毒、傳染性支氣管炎病毒、支原體、沙門菌和銅綠假單胞菌）混合感染，給養雞業帶來較大的經濟損失。

2023 年4 月， 河北某雞場飼養的350 日齡海蘭褐蛋雞發病，根據臨床癥狀、病理學檢查和病原學檢測結果，初步判定該場的蛋雞發生了Ⅰ亞群禽腺病毒與大腸桿菌的混合感染，根據上述診斷結果對該發病雞群進行了治療。本文對蛋雞Ⅰ亞群禽腺病毒與大腸桿菌混合感染的發病情況、病理變化特點、病原學檢測情況及防制措施進行了介紹， 該結果可為有關從業人員提供參考。

1 發病情況

2023 年4 月河北某雞場飼養的350 日齡海蘭褐蛋雞發病，據該雞場飼養員介紹，病雞臨床癥狀主要為精神沉郁，被毛凌亂，采食量明顯下降，反應遲鈍，產蛋量下降，病雞出現下痢、排黃綠色糞便。 發病5 天后開始出現死亡。 到送檢診斷時該群蛋雞發病率為70%，死亡率為9%。 經了解，該養雞場蛋雞于130 日齡前按常規進行了各種疫苗的免疫，但此后就沒有接種過禽腺病毒有關的疫苗。

2 剖檢病變

對12 只病死雞進行病理剖檢，病變總結如下：氣囊呈泡沫樣分泌物（6/12）。 心包內充滿黃白色液體（7/12）；心包增厚，心包膜與心外膜因滲出的黃白色纖維素性分泌物發生粘連（5/12）。肝臟腫大、顏色呈土黃色、見點狀或斑駁狀出血、局灶性壞死（7/12）；肝臟表面附有黃白色纖維素性分泌物（5/12）；肺瘀血水腫（6/12）；腎臟腫脹、呈土黃色（5/12）；脾臟腫大（5/12）；氣管、大腦、小腦等器官未見肉眼可見病變。

3 病原學檢測

3.1 病毒性疾病的分子生物學檢測

參照有關文獻報道方法處理病料、 提取病料RNA/DNA， 進行5 種雞病毒病的PCR 檢測，雞病料PCR 產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳，結果表明， 剖檢蛋雞病料均呈馬立克氏病病毒、J 亞群白血病病毒、禽戊型肝炎病毒和禽流感病毒陰性，均呈Ⅰ亞群禽腺病毒陽性。將PCR 陽性產物送生工生物工程（上海）股份有限公司進行測序，將測序結果與國際序列進行BLAST 比對，序列比對結果顯示剖檢蛋雞病料中檢出的Ⅰ亞群禽腺病毒屬于血清4 型。

3.2 細菌分離、鑒定

無菌操作取病死雞心臟、肝臟和脾臟，分區劃線接種于TSA 平板、麥康凱瓊脂平板和SS 瓊脂平板，按常規進行細菌培養。 細菌純化結果表明，TSA 平板上純化的菌落呈圓形凸起、光滑、濕潤、半透明、灰白色，直徑2～3 毫米；麥康凱瓊脂平板上純化的菌落呈紅色；SS 瓊脂平板細菌生長貧瘠，零星生長菌落呈紅色。 取純化菌的單菌落進行革蘭氏染色，鏡下可見呈紅色（革蘭氏陰性）、無芽孢短小桿菌。自采集病料分離純化獲得了有相同培養特性的5 株細菌；16S rRNA 基因鑒定結果證實5 株細菌均屬于大腸桿菌。

3.3 藥敏試驗

采用紙片擴散（K-B）法檢測3 株大腸桿菌代表菌對慶大霉素、新霉素、卡那霉素、阿米卡星、大觀霉素、阿莫西林、頭孢噻肟、恩諾沙星、環丙沙星、 氟苯尼考、 強力霉素和林可霉素等12種藥物的敏感性。 結果表明，3 株大腸桿菌對新霉素和阿米卡星均極敏，對慶大霉素和大觀霉素均高敏，對頭孢噻肟、恩諾沙星、環丙沙星和卡那霉素均低敏，對其余4 種藥物均耐藥（見下表）。

藥物敏感性試驗結果（抑菌圈直徑：毫米）

4 討論

綜合發病雞的臨床表現、 剖檢病變及病原學檢測結果，初步判定該養雞場飼養的蛋雞發生了血清4 型Ⅰ亞群禽腺病毒與大腸桿菌的混合感染，建議采取以下防控措施：

4.1 免疫接種

鑒于當前無特效藥物用于I 亞群禽腺病毒感染的感染，建議發病雞注射血清4 型Ⅰ亞群禽腺病毒制備的卵黃抗體。 此外，在經常發生腺病毒感染的雞場，產蛋期蛋雞要注意禽腺病毒疫苗的加強免疫。注射卵黃抗體或疫苗過程中應嚴格操作，注射器、針頭和注射部位要充分消毒，并勤換針頭。

由于大腸桿菌血清型眾多， 目前蛋雞養殖過程中一般不接種大腸桿菌疫苗。大腸桿菌耐藥嚴重的雞場，可以考慮用篩選出的優勢血清型大腸桿菌制備的疫苗進行接種。

4.2 切斷傳播途徑

禽腺病毒在雞群中既可以水平傳播， 也可垂直傳播。 因此，養雞場應堅持“全進全出”的飼養模式，杜絕不同日齡雞的混養，避免禽腺病毒感染在雞群的擴散。

4.3 消滅傳染源

蛋雞群封閉式養殖過程中， 要注意嚴防麻雀或其他野禽的侵入，防止引入傳染源。 大腸桿菌存在于發病雞和養雞場環境中，發病早期應及時將病死雞淘汰，嚴格執行病死雞的無害化處理制度。 雞場和雞舍門口應設置消毒池，每天及時清除雞舍中糞便， 然后及時做好雞舍內外環境、設備及用具的消毒工作，以降低雞場環境中病原微生物的載量，避免或減少雞群的繼發感染或混合感染。

近年來我國已報道了多株具有多重耐藥性的大腸桿菌，臨床上對大腸桿菌感染的治療越來越困難。 因此，發生了大腸桿菌感染的雞群用藥前最好進行藥敏試驗，根據藥敏試驗結果選用表現為高敏及以上的抗菌藥物進行治療。科學合理的使用抗菌藥物同時可配合使用維生素C，以減少雞群各種應激。

4.4 加強飼養管理

做好雞群的飼養管理工作。 為減少各種不良應激，平時應注意分析養雞場的溫度、濕度、光照及通風等條件參數。 對飼養密度進行控制，避免擁擠。 保證養殖環境的安靜舒適，在保證溫度的同時合理通風，提供充足的營養，保證飲水和飼料的潔凈。

4.5 及時總結發病原因

雞只抗病力強時， 自身攜帶的條件致病菌可能不引發疾病；但在各種應激因素刺激下或病毒感染后，條件性致病菌可能通過呼吸道或消化道進入雞體內， 從而引起細菌病發生。 養雞場要做好各種疾病的綜合防控， 病原之間的混合感染或繼發感染增加雞的死亡率。根據既往病史及時優化本雞場的免疫程序。

4.6 雞病的鑒別診斷

根據心包積液、肝炎、腎臟病變初步判定發病雞群存在禽腺病毒感染；根據氣囊炎、肝周炎、心包炎等病理變化判定發病雞群存在細菌性疾病。 由于先前診治效果不佳，因此對發病雞群要進行有關病原學檢查， 以盡快控制雞群病情發展。