牛的凍精人工授精技術實踐解析

吳國都，焦海宏，祖麗胡瑪爾·艾力

（1.塔里木大學動物科學與技術學院 新疆阿克蘇 843300；2.甘肅省定西市通渭縣畜牧獸醫服務中心 甘肅定西 743300）

牛的凍精人工授精是一種代替自然交配的繁殖技術，是在人工的輔助條件下，利用器械采集種公牛的精液、經過品質檢查、稀釋冷凍保存等適當處理，再解凍精液用輸精槍將精液輸送到發情母牛的生殖道內，使母牛受孕的配種方法。實施牛的凍精人工授精技術，提高牛人工授精的普及率，能夠最大限度的提高優秀種公畜的利用率，加快牛的品種改良，降低生產成本，提高經濟效益。還有利于預防疾病的傳染，避免近親繁殖等作用。

1 凍精人工授精技術的原理

人工授精是直接把精子輸入至子宮體、子宮角，在此期間精子獲能，然后卵子排出，在輸卵管與精子相遇。人工授精能夠保證進入輸卵管的精子比較多，進而使更多精子在授精部位與卵子相遇。完成授精過程后，精卵結合形成配子，進而發育形成胚胎，在30 d之后胚胎就會開始著床。解凍后的精子活力達到0.35 級以上，輸入數達到0.1 億以上，母牛正常排卵沒有生殖系統疾病，輸精時間準確，輸精部位適當，即可達到受胎目的。

2 凍精的保存與運輸

2.1 精液冷凍

精液冷凍處理使精子在液氮存放過程中代謝活動受到抑制，其生命活動處于靜止狀態，從而達到長期保存的目的[1]。

2.2 凍精的保存技術要點

凍精使用超低溫生物容器（液氮罐）保存，使凍精完全沉沒在液氮罐的液氮中。當液氮罐中液氮的量減少到60%左右時，及時添加液氮，防止因缺少液氮而使罐內溫度回升導致精子死亡。液氮罐貯存凍精時，要分凍精品種分類存放，對應的罐口要有明顯的標識。

2.3 液氮罐液氮的填充及液氮罐的保養

液氮的沸點是-196.56 ℃，容易發生意外事故；在空罐內填充液氮時，一定要注意個人防護；帶防凍手套，帶護目鏡，戴口罩，穿長衣長褲。對于常溫罐，先要緩慢少量添加，中間停留1～3 min，如此反復添加多次，充分使液氮罐冷卻。既能延長液氮罐的使用壽命，又能延長液氮的保存時間。液氮罐每年要做1～2 次的檢查和保養，排查安全隱患和延長液氮罐的使用時間。先檢查罐內有無異物，清空液氮罐；再進行清洗，自然干燥備用。

2.3 液氮及凍精的運輸主要事項

長途運輸液氮，需要采用專業的運輸車輛，具備運輸條件，要做到車輛駕駛人員和乘坐人員與運輸箱隔離。運輸的液氮罐使用專業罐塞，不得密封罐口；液氮罐分開擺放，有防震固定裝置。

3 母牛發情鑒定及人工授精時間確定

母牛的發情周期屬于無季節性發情周期，全年均可發情，發情周期一般為21 d，發情持續的時間一般為10～24 h[2]。

3.1 經產母牛的發情時間

不同品種的經產母牛分娩后出現的第一次發情時間差異比較大。黃牛58～83 d，水牛42～147 d，奶牛30～72 d。當然產后發情早或晚，與品種、營養、環境條件及母牛體質狀況也有關。

3.2 母牛的發情癥狀

母牛外陰部紅腫，陰道黏膜充血，色紅，表面光亮濕潤，有透明吊線的黏液。

母牛行為表現興奮不安，食欲減少，時常哞叫，尾根舉起，產奶量降低，追逐和爬跨其他牛，并接受其他牛的爬跨。卵泡的發育情況：子宮頸口充血，松弛，開張；子宮角堅實，卵巢有卵泡發育。

3.3 排卵

一般母牛在發情癥狀減退后的38～44 h 之內排卵，不同品種的牛排卵的時間也是不同。為了提高受胎率，應當檢查卵巢上的卵泡發育狀況。能夠檢查到較大的發育卵泡（1.5～2.0 cm），卵泡頂端很薄、很脹，有一觸即破的感覺。說明已經有發育成熟的卵泡，在2～3 h 就會排卵。

3.4 人工授精時間的確定

現在絕大多數的配種員都是通過和畜主電話聯系，根據畜主的觀察母牛的發情狀況來確定輸精時間。采用早上發現牛發情，下午進行人工授精；下午發現牛發情，次日早上進行人工授精[3]。這種方法是有一定的道理，但是，不夠準確。

因為有牛的發情狀況是各有不同，再加上有一部分畜主不能準確地判斷牛的發情狀況，就為適時的人工授精增加了困難。精準的輸精時間是要對母牛的發情和排卵情況進行綜合判定而確定，一般選擇排卵前后1～2 h 較好。

4 細管凍精的解凍技術和操作方法

4.1 解凍

精子的解凍就是指采用快速升溫方式，精子在稀釋液（含防凍劑）的保護下，迅速穿過危險溫度區，把處在凍結狀態下的精子行進復蘇。

4.2 解凍的技術要點

精子解凍過程中技術要點：降溫冷凍或升溫解凍時都必須快速，以迅速越過危險溫度區。如果解凍時速度不快，精子在危險溫度區停留的時間較長，則會使精子的細胞內形成冰晶，損傷精子的細胞結構，從而導致精子的死亡。

4.3 解凍的方法

首先準備38 ℃左右的溫水，將細管凍精從液氮中快速（越快越好）取出，立即平行放入溫水中并輕緩游動，以保持其管壁受熱均衡[4]。經8～15 s 后即可解凍完畢。

4.4 目前存在問題和解決方案

牛人工授精服務農戶地點分散，凍精解凍后由于間隔2 h 以上的情況多，會造成精子活力下降，導致受胎率低下。一般把解凍后的精液用脫脂棉或衛生紙包好放入塑料袋內，然后置入裝有37 ℃保溫杯，放在保溫杯中保存運輸。在一定程度上保證精液的活力，但是還是不能適應每天較長時間的使用?？梢詼蕚湟粋€10 L 或者20 L 的液氮罐，在里面存放少量的凍精，隨身攜帶或者放在車里比較方便，可以隨時用隨時取，保證凍精解凍后的活力。

5 牛的人工授精技術要點

5.1 母牛保定

母牛保定安全為第一，一方面保證牛人工授精的順利完成，一方面要保證配種員的安全。由于母牛對陌生的人和環境比較敏感，建議母牛的保定最好是由畜主完成，在一般情況下不建議把母牛牽出圈舍。

5.2 檢查細管和記錄信息

細管凍精解凍后，首先檢查細管是否完好，然后詳細記錄細管上標明的信息。

5.3 細管精液裝槍

把凍精解凍檢查后，要用消毒紗布抹干細管外圍水分；用消毒紗布擦拭輸精槍，將細管輸精槍推桿退到與細管長度大約相等的位置，將細管裝入輸精槍；再用剪子水平剪去封口端0.5 cm。然后將槍體套入套管內卡緊即可。

5.4 牛的直腸把握輸精法

牛的人工授精運用較廣泛、效果好的輸精方法是直腸把握輸精法。將一只手伸入母牛直腸內摸到子宮頸將它握住，另一手將裝好精液的輸精器從母牛陰門先斜向上插入5 cm，兩手相互配合，再水平向前5 cm 使輸精器插入子宮頸，然后向前向下插入到子宮頸口處。輸精槍緩慢越過子宮頸管中的皺壁，到達子宮頸深部和子宮體，分點按右側、中間、左側、后部的順序注射精液。最后緩慢抽出輸精器，再拿出深入直腸中的手臂。

5.5 操作中需要注意的事項

1）注意母牛外陰部的清潔：先用清水沖洗外陰部，再用0.1%的高錳酸鉀溶液行進清洗。

2）注意意外事故的發生：在牛的人工授精過程中，時不時發生一些意外事故。比如配種員被牛踩傷、牛的直腸損傷、牛的陰道損傷等。所以一定要做好牛的保定工作，不能圖快圖方便把牛沒有保定好或者直接沒有保定。

3）適時的人工授精：母牛一般是在發情后期將會進行4～10 h的排卵，一般選擇在排卵前2～3 h 或者排卵后1～3 h 輸精配種最佳。想要使得所實施的人工授精效果良好，需要在第一次實行人工配種之后的8～12 h，再次輸精操作一次。

6 目前存在的問題及解決方案

6.1 一部分新配種員業務不熟

現在一部分新配種員由于對人工授精技術掌握不足造成自己意外受傷、部分母牛流產等問題?？梢酝ㄟ^線上加線下方式充分利用多媒體、仿真模擬等教學手段，進行技術培訓，提高配種員的整體水平，以適應市場的需求。

6.2 養殖戶對人工授精技術的偏見

養殖戶認為通過人工授精的母牛難產多、胎衣不下等問題多，使得牛人工授精技術的推廣應用形勢有所減緩。這就要加強對養殖戶宣傳培訓，基層畜牧技術人員應結合養殖技術培訓，使他們全面的了解牛的凍精人工授精技術。使養殖戶在母牛的配種前后加強飼養管理，減少意外流產，增加受胎率。

6.3 直腸檢查不足

直腸檢查是人工授精技術實施過程中關鍵步驟。在實際生產中，有些配種員不做直腸檢查，有些配種員不會做直腸檢查等現象，這樣就容易出現失誤?，F在還出現一些雜交牛在懷孕期間發情的情況，特別是在懷孕后多次發情，導致畜主低價出售，或者由于再次配種導致流產。對于這種情況應加強直腸檢查，有條件的做B超檢查。通過比較完善的檢查來確定發情狀況、卵泡的發育情況、是否懷孕。進一步確定配種時間和對未懷孕牛進行及時補配。

綜上所述，牛的凍精人工授精技術應用推廣前景廣闊，但也要進一步加強基本功的學習，也可加強多種技術的聯合應用，比如超數排卵加人工授精技術，使母牛每胎產兩頭犢牛（提高多胎率）；人工授精技術加胚胎移植，更加充分的利用優良種畜。