食品添加劑L-香芹酮的吸入遺傳毒性評(píng)價(jià)

嚴(yán)大為 李睿 陸誠(chéng)瑋 高嶧涵

摘 要：目的：了解食品添加劑L-香芹酮對(duì)霧化劑參比煙液氣溶膠遺傳毒性的影響。方法：在霧化劑參比煙液中加入300 mg·L-1的L-香芹酮，選取氣-液（瓊脂）界面的全煙氣暴露方式，暴露時(shí)間為30 min，通過Ames試驗(yàn)、染色體畸變?cè)囼?yàn)和體外微核試驗(yàn)等遺傳組合試驗(yàn)，對(duì)添加L-香芹酮后的霧化劑參比煙液氣溶膠的遺傳毒性進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果：與霧化劑參比煙液氣溶膠相比，添加L-香芹酮后的霧化劑參比煙液氣溶膠的5種菌株的細(xì)菌突變菌落數(shù)降低幅度為0%～39.6%（不含活化系統(tǒng)S9），而TA97a和TA102菌株的菌落數(shù)增加56.0%和2.4%，TA98、TA100和TA1535菌株的菌落數(shù)分別降低50%、27.9%和50%（含活化系統(tǒng)S9）；染色體畸變率降低0.6%；微核率降低1.55‰；但與陰性對(duì)照組相比，添加L-香芹酮后的霧化劑參比煙液氣溶膠組的細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)、染色體畸變?cè)囼?yàn)和微核試驗(yàn)等遺傳組合試驗(yàn)的3項(xiàng)指標(biāo)均符合陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論：在本試驗(yàn)條件下，添加300 mg·L-1的L-香芹酮對(duì)霧化劑參比煙液氣溶膠的遺傳毒性影響較小。

關(guān)鍵詞：霧化劑；參比煙液；L-香芹酮；氣-液界面；遺傳毒性

Genotoxicity Evaluation of Food Additive L-carvone

YAN Dawei1， LI Rui2， LU Chengwei1， GAO Yihan1*

（1.Department of Basic Research， Shanghai New Tobacco Product Research Institute Co.， Ltd.， Shanghai 201315， China; 2.Department of Pharmacology and Toxicology， Shanghai Institute for Food and Drug Control， Shanghai 201203， China）

Abstract： Objective： To understand the effect of food additive L-carvone on the genetic toxicity of reference liquid aerosol. Method： Add 300 mg·L-1of L-carvone to the reference smoke liquid， select the full smoke exposure method at the air-liquid （agar） interface， set the exposure time to 30 min， and pass the Ames test， chromosome aberration test and in vitro micronucleus test to evaluate the genetic toxicity of the reference smoke liquid aerosol after adding L-carvone. Result： Compared with the reference smoke liquid aerosol， under the treatment of the reference smoke liquid aerosol containing L-carvone， the bacteria mutant colonies of the 5 strains varied from 0% to 39.6% （-S9） and the number of colonies of TA97a and TA102 increased by 56.0% and 2.4%， while the number of colonies of TA98， TA100 and TA1535 decreased by 50%， 27.9% and 50%， respectively （+ S9）. The variation range of chromosome aberration rate is 0.6%. The variation range of micronucleus rate is 1.55‰. However， compared with the negative control group， the three indexes of the genetic combination test of L-carvone added reference smoke liquid aerosol met the negative judgment. Conclusion： Under the test conditions， adding 300 mg·L-1 of L-carvone has little effect on the genetic toxicity of the reference e-cigarette liquid aerosol.

Keywords： atomization agent; reference smoke liquid; L-carvone; air-liquid interface; genetic toxicity

L-香芹酮是留蘭香油的主要成分，含量占比在50%～60%，具有很濃郁的留蘭香香氣，其在食品香精、牙膏、硬糖、口香糖和各種飲料中有著廣泛的應(yīng)用[1-2]。近年來，隨著霧化平臺(tái)的興起，L-香芹酮等香精香料的使用方式可改變?yōu)殪F化吸入的方式攝取。L-香芹酮雖是食品級(jí)添加劑，一定劑量?jī)?nèi)經(jīng)口攝入較為安全，但其吸入途徑的安全性卻鮮有報(bào)道，尤其是關(guān)于L-香芹酮吸入途徑的遺傳毒性。

有報(bào)道稱消費(fèi)者在電子煙煙液中違規(guī)添加四氫大麻酚等物質(zhì)，引起多起健康事件，添加劑的吸入安全性已引起廣泛關(guān)注[3]。同時(shí)，有研究表明不同的電子煙煙液氣溶膠的細(xì)胞毒性具有較大差異，且與電子煙煙液中的添加劑密切相關(guān)[4-7]。雖然THORNE等[8]開展了電子煙煙液氣溶膠的Ames試驗(yàn)，結(jié)果顯示受試菌株未發(fā)生基因回復(fù)突變。MANOJ等[9]也未觀察到在與卷煙等同的特定劑量下電子煙煙液氣溶膠會(huì)引起細(xì)胞毒性和遺傳毒性的情況。同時(shí)，AZZOPARDI等[10]也證明電子煙煙液氣溶膠的細(xì)胞毒性相對(duì)傳統(tǒng)卷煙氣溶膠的細(xì)胞毒性較小，但對(duì)單一添加劑的吸入途徑的遺傳組合毒性評(píng)價(jià)還未見報(bào)道，尤其是添加后對(duì)煙液氣溶膠整體的遺傳毒性影響。因此，本文擬采用氣-液（瓊脂）界面暴露的方式，選取TA97a、TA98、TA100、TA102和TA1535菌株和中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞（CHL細(xì)胞）等受試體系，根據(jù)Ames試驗(yàn)、染色體畸變?cè)囼?yàn)、體外微核試驗(yàn)等遺傳毒性檢測(cè)方法，本著風(fēng)險(xiǎn)最大化原則，選取美國(guó)香精和提取物制造商協(xié)會(huì)公認(rèn)在烘焙食品中安全無毒使用L-香芹酮濃度的3倍（300 mg·L-1）[11]，對(duì)含有L-香芹酮霧化劑參比煙液氣溶膠的遺傳毒性進(jìn)行初步評(píng)估，并與霧化劑參比煙液氣溶膠進(jìn)行比較，為L(zhǎng)-香芹酮添加劑的合理安全使用提供參考和支持。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑和儀器

TA97a、TA98、TA100、TA102和TA1535菌株，來源于美國(guó)Moltox公司；中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞，來源于中國(guó)科學(xué)研究院細(xì)胞庫(kù)；A549人肺腺癌細(xì)胞，來源于復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院。

瓊脂粉（212304A級(jí)），美國(guó)BD公司；氯化鈉（≥99.5%），海凌峰化學(xué)試劑有限公司；組氨酸（99%），北京百靈威科技有限公司；生物素（99%），北京百靈威科技有限公司；營(yíng)養(yǎng)肉湯（CM1168B），英國(guó)OXOID公司；RPMI 1640細(xì)胞培養(yǎng)基（Lot2200921），美國(guó)Gibco公司；胎牛血清（Dbc0520），美國(guó)Hyclone公司；磷酸緩沖液（Lot2028925），美國(guó)Gibco公司；0.25%（w/v）胰酶-EDTA（0.25%），美國(guó)Gibco公司；絲裂霉素（99.7%），中國(guó)食品藥品檢定研究院；冰醋酸（≥99.5%），上海凌峰化學(xué)試劑有限公司；甲醇（≥99.5%），上海凌峰化學(xué)試劑有限公司；細(xì)胞培養(yǎng)皿（100 mm×20 mm），美國(guó)Corning公司；Tran swell培養(yǎng)板（12/24 mm），美國(guó)Costar公司；DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基（Lot2120818），美國(guó)Gibco公司；無水乙醇（≥99.7%），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；DMSO（99.9%），美國(guó)Sigma公司；霧化劑參比煙液；上海新型煙草制品研究院有限公司配制；含300 mg·L-1 L-香芹酮的霧化劑參比煙液；上海新型煙草制品研究院有限公司配制。

X200AF吸煙機(jī)，上海帕夫曼自動(dòng)化儀器有限公司；Mini Tank煙具，香港Mask King公司；LA2-6AX生物安全柜，新加坡ESCO公司；ECLIPSE TS100倒置相差顯微鏡，日本Nikon公司；BD240恒溫培養(yǎng)箱，德國(guó)Binder公司；G-560E漩渦混合器，美國(guó)Scientific Industries公司；CKX41顯微鏡，日本Olympus公司；HERA CELL VIOS 160i CO2培養(yǎng)箱，美國(guó)Thermo Scientific公司；移液器（5 mL、1 mL和200 μL），德國(guó)Eppendorf公司；5810R離心機(jī)，德國(guó)Eppendorf公司；Vi-cell XR細(xì)胞活力分析儀，美國(guó)Beckman Coulter公司；U570超低溫冰箱，加拿大New Brunswick公司；3K30離心機(jī)，美國(guó)Sigma公司；氣-液界面暴露皿，英國(guó)BAT公司自制。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)

取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基5 mL，加入無菌試管中，將冷凍保存的TA97a、TA98、TA100、TA102和TA1535菌株培養(yǎng)物接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，37 ℃下振蕩（100次/min）培養(yǎng)10 h。

CHL細(xì)胞培養(yǎng)基為含有10%（V/V）胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為37 ℃、5%濃度的CO2加濕培養(yǎng)。

1.2.2 氣溶膠產(chǎn)生方式和暴露方式

將參比煙液（或含300 mg·L-1 L-香芹酮的參比煙液）裝入Mask King電子煙煙具，煙具充電激活后，接入吸煙機(jī)。按照一定的抽吸模式（抽吸間隔30 s，抽吸流量55 mL，抽吸時(shí)間3 s，電子煙功率11.3 W）進(jìn)行抽吸，在吸煙機(jī)和電子煙煙具間采用軟管接入氣-液界面暴露皿（圖1），待細(xì)胞接種至Trans well培養(yǎng)板（或細(xì)菌接種至瓊脂培養(yǎng)皿，然后將培養(yǎng)皿直接放入暴露小室）后，即可產(chǎn)生氣-液（瓊脂）界面暴露染毒，染毒時(shí)間為30 min（60口抽吸耗時(shí)，煙具單次充電最大抽吸口數(shù)），暴露的氣溶膠濃度為電子煙煙液的全煙氣[12]。

1.2.3 遺傳毒性檢測(cè)方法

（1）Ames試驗(yàn)方法。Ames試驗(yàn)中，將含

0.5 mmol·L-1組氨酸和0.5 mmol·L-1生物素溶液的頂層瓊脂培養(yǎng)基按照0.4 mL/管分裝于60個(gè)試管中（共分為陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、參比煙液組和含L-香芹酮參比煙液組，每組測(cè)試5個(gè)菌株，每個(gè)菌株

3個(gè)平行），45 ℃水浴中保溫，每管依次加入試驗(yàn)菌株增菌液0.2 mL，PBS或者S9混合液（需代謝活化時(shí)）1.0 mL，陽(yáng)性對(duì)照組加入陽(yáng)性物質(zhì)溶液（敵可松、疊氮鈉、甲磺酸甲酯或2-氨基芴），充分混勻，取80 μL迅速傾入底層瓊脂平板上，轉(zhuǎn)動(dòng)平板，使之分布均勻，置于培養(yǎng)箱，待平皿干燥后受試物組進(jìn)行全煙氣暴露。陰性對(duì)照組不作處理、陽(yáng)性對(duì)照組給予各菌株的陽(yáng)性對(duì)照品。暴露結(jié)束后置37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)倒置培養(yǎng)72 h后觀察結(jié)果。若陽(yáng)性對(duì)照組的回復(fù)突變數(shù)是陰性對(duì)照組的3倍或3倍以上，則視為菌株陽(yáng)性結(jié)果，如不符合，則視為陰性結(jié)果。

（2）染色體畸變?cè)囼?yàn)方法。染色體畸變?cè)囼?yàn)中，將CHL細(xì)胞接種在24 mm的trans well小室的頂側(cè)，接種密度為2×105 cells/孔，1.5 mL/孔，底側(cè)加入1.3 mL含有10%（V/V）胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液的培養(yǎng)基。細(xì)胞在37 ℃，5% CO2下培養(yǎng)24 h。陰性對(duì)照組不作處理；陽(yáng)性對(duì)照組給予絲裂霉素（終濃度為0.2 μg·mL-1）；處理組進(jìn)行全煙氣暴露。在細(xì)胞收獲前4 h，每皿加入15 μL濃度為20 μg·mL-1的秋水仙素，使秋水仙素的終濃度為0.2 μg·mL-1。秋水仙素處理4 h后，棄去培養(yǎng)液，加入0.5 mL 0.25%胰酶-EDTA消化細(xì)胞。待消化結(jié)束后，加入一定量的完全培養(yǎng)液終止消化，終體積為10 mL。取約

0.5 mL細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)。取剩下的細(xì)胞懸液離心后經(jīng)0.075 mol·L-1氯化鉀低滲、固定、滴片，干燥后Giemsa染色，干燥后封片待閱。記錄染色體結(jié)構(gòu)畸變細(xì)胞數(shù)和畸變類型，畸變類型包括斷裂、缺失、交換、環(huán)狀、三輻體、四輻體和粉碎等。裂隙和染色體數(shù)目畸變（多倍體和內(nèi)復(fù)制）單獨(dú)記錄，不計(jì)入畸變率中。若細(xì)胞的染色體畸變率與陰性對(duì)照組存在顯著性差異，則視為陽(yáng)性結(jié)果，若不符合，則視為陰性結(jié)果。

（3）體外微核試驗(yàn)方法。體外微核試驗(yàn)中，將CHL細(xì)胞接種在12 mm的trans well小室的頂側(cè)，接種密度為1.5×105 cells/孔，0.5 mL/孔，底側(cè)加入

1 mL培養(yǎng)基。細(xì)胞在37 ℃，5% CO2下培養(yǎng)24 h。陰性對(duì)照組不作處理；陽(yáng)性對(duì)照組給予絲裂霉素（終濃度為0.1 μg·mL-1）；處理組進(jìn)行全煙氣暴露，暴露結(jié)束后繼續(xù)培養(yǎng)24 h，然后棄去培養(yǎng)液，加

0.2 mL的0.25%胰酶-EDTA消化細(xì)胞。待消化結(jié)束后，加入一定量的完全培養(yǎng)液終止消化，終體積為10 mL。取約0.5 mL細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)。取剩下的細(xì)胞懸液離心后經(jīng)0.075 mol·L-1的氯化鉀低滲、甲醇∶冰醋酸（3∶1）固定、滴片，干燥后Giemsa染色，干燥后封片，后在光學(xué)顯微鏡（100×10倍）下觀察并計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞，分別計(jì)數(shù)其中單核、雙核、三核、四核細(xì)胞的數(shù)量，每個(gè)劑量組計(jì)數(shù)1 000個(gè)雙核細(xì)胞中出現(xiàn)微核的數(shù)量，并計(jì)算微核率。若細(xì)胞的微核率與陰性對(duì)照組存在顯著性差異，則視為陽(yáng)性結(jié)果，若不符合，則視為陰性結(jié)果。

1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

Ames試驗(yàn)中，培養(yǎng)結(jié)束后，顯微鏡下觀察培養(yǎng)皿中菌斑的生長(zhǎng)情況，同時(shí)計(jì)數(shù)每皿的菌落數(shù)，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。染色體畸變?cè)囼?yàn)中，畸變率=出現(xiàn)結(jié)構(gòu)畸變?nèi)旧w細(xì)胞/觀察細(xì)胞數(shù)×100%，采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。體外微核試驗(yàn)中，微核率=（含有微核的雙核細(xì)胞數(shù)）/至少1 000個(gè)雙核細(xì)胞總數(shù)×1 000，采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 Ames試驗(yàn)結(jié)果

由表1可知，與陰性對(duì)照組相比，在有無代謝活化系統(tǒng)的情況下，陽(yáng)性對(duì)照組所有菌株的菌落數(shù)均至少是陰性對(duì)照組的培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)的3倍，試驗(yàn)系統(tǒng)有效，可檢測(cè)出有致突變物質(zhì)。暴露參比煙液氣溶膠和含L-香芹酮的參比煙液氣溶膠后，在有無代謝活化系統(tǒng)的情況下，菌株TA97a、TA98、TA100、TA102和TA1535背景菌斑均正常，培養(yǎng)皿中TA97a、TA98、TA100和TA102菌株的菌落數(shù)均未達(dá)到各自空白對(duì)照組培養(yǎng)皿中菌落數(shù)的3倍或者3倍以上，只有菌株TA1535菌落數(shù)超過空白對(duì)照組菌落數(shù)的3倍以上，結(jié)果為可疑陽(yáng)性。與參比煙液組相比，在不含活化系統(tǒng)S9情況下，含L-香芹酮的參比煙液組的5種菌株的細(xì)菌突變菌落數(shù)降低幅度為0%～39.6%，而含活化系統(tǒng)S9的情況下，TA97a和TA102菌株的菌落數(shù)增加56.0%和2.4%，TA98、TA100和TA1535菌株的菌落數(shù)分別降低50%、27.9%和50%，L-香芹酮的添加改變了參比煙液的細(xì)菌突變菌落數(shù)，但增加或降低的變化幅度均在60%以下。

2.2 染色體畸變?cè)囼?yàn)結(jié)果

由表2可知，與陰性對(duì)照組比較，陽(yáng)性對(duì)照組（絲裂霉素處理）的染色體畸變細(xì)胞率明顯升高，畸變率具有極顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01），證明本實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有效。但與陰性對(duì)照組比較，參比煙液氣溶膠組和含L-香芹酮參比煙液氣溶膠組染色體畸變率分別為2.3%和1.7%，無顯著性差異。同時(shí)與參比煙液氣溶膠組相比，加入L-香芹酮后霧化劑參比煙液氣溶膠的染色體畸變率降低0.6%。

2.3 體外微核試驗(yàn)結(jié)果

由表3可知，與陰性對(duì)照組比較，陽(yáng)性對(duì)照組（絲裂霉素處理）的總微核率明顯升高，具有極顯著差異（P＜0.01），證明本實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有效。與陰性對(duì)照組比較，參比煙液氣溶膠組和含L-香芹酮的參比煙液氣溶膠組微核率分別為10.55‰和9.00‰，差異不明顯。與參比煙液氣溶膠組相比，加入L-香芹酮后霧化劑參比煙液氣溶膠微核率降低1.55‰。

3 討論

細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)作為致突變物的早期篩選和前期研究階段手段，主要利用營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株，在選擇培養(yǎng)基上經(jīng)外源性物質(zhì)處理后，觀察菌株的回復(fù)突變情況，用來判斷致突變能力，是科研機(jī)構(gòu)和政府公認(rèn)的測(cè)定新化學(xué)物質(zhì)和新藥潛在致突變性的檢測(cè)方法[13]。對(duì)于電子煙遺傳毒性的評(píng)價(jià)，將電子煙氣溶膠整體看作外源性混合物，可以通過細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)檢測(cè)電子煙氣溶膠引起的堿基水平上的致突變作用[14]。同時(shí)，由于電子煙的特殊使用方式，AZZOPARDI等[15]認(rèn)為氣-液界面暴露的方式進(jìn)行遺傳毒性檢測(cè)較為科學(xué)，可用于檢測(cè)吸入制品的安全性評(píng)價(jià)。霧化體中的單一添加劑的安全性，不僅要考慮物質(zhì)本身的遺傳毒性，還應(yīng)考慮單一添加劑與其他物質(zhì)的交互作用。

關(guān)于L-香芹酮的經(jīng)口毒性，PROGRAM等[16]在對(duì)B6C3F1小鼠每周給藥5 d，劑量為375 mg·kg-1或750 mg·kg-1，連續(xù)2年進(jìn)行重復(fù)灌胃染毒，未發(fā)現(xiàn)L-香芹酮對(duì)B6C3F1小鼠具有致癌活性。但吸入途徑的遺傳毒性還未見報(bào)道。因此，本次研究基于上述考慮，采用了氣-液（瓊脂）界面的暴露方式，測(cè)試添加L-香芹酮后對(duì)參比煙液氣溶膠整體遺傳毒性的影響。

電子煙氣溶膠的遺傳毒性已有較多文獻(xiàn)報(bào)道，THORNE等[17]研究發(fā)現(xiàn)在長(zhǎng)達(dá)112.5 min的未稀釋電子煙氣溶膠暴露后，菌株均未發(fā)現(xiàn)致突變現(xiàn)象，認(rèn)為電子煙氣溶膠致細(xì)菌回復(fù)突變能力較弱。這與本實(shí)驗(yàn)中參比煙液氣溶膠未引起TA97a、TA98、TA100和TA102等4種菌株回復(fù)突變的結(jié)果較為類似，但本試驗(yàn)中TA1535菌株在有、無代謝活化系統(tǒng)的情況下，霧化劑參比煙液氣溶膠和含L-香芹酮的參比煙液氣溶膠均發(fā)生了致突變效應(yīng)，這可能是由于參比煙液氣溶膠殺死了大部分TA1535細(xì)菌，使殘存的細(xì)菌得以利用培養(yǎng)基中微量的組氨酸和生物素生長(zhǎng)成肉眼可見的菌落，但這并非是回復(fù)突變菌落，而是由煙液氣溶膠毒性導(dǎo)致的假陽(yáng)性結(jié)果[18]。同時(shí)，與陰性對(duì)照組相比，添加L-香芹酮后也未引起致突變菌落數(shù)目的明顯增加，說明L-香芹酮不具有增加參比煙液氣溶膠的潛在致突變能力。

在染色體畸變?cè)囼?yàn)和微核試驗(yàn)中，與參比煙液組相比，未發(fā)現(xiàn)添加L-香芹酮后的煙液氣溶膠引起染色體畸變率和微核率的上升，不存在導(dǎo)致細(xì)胞染色體畸變和微核突變潛在能力。與陰性對(duì)照組相比，參比煙液氣溶膠引起的染色體畸變或微核形成率上升不明顯，這與MANOJ等[19]和GANAPATHY等[20]的研究結(jié)果較為一致。因此，添加L-香芹酮的參比煙液氣溶膠對(duì)染色體復(fù)制和細(xì)胞分裂過程的影響較小，未見明顯的遺傳毒性效應(yīng)。根據(jù)遺傳組合試驗(yàn)判斷規(guī)則[21]，添加300 mg·L-1的L-香芹酮不會(huì)增加參比煙液氣溶膠的遺傳毒性。

霧化氣溶膠的遺傳毒性一直是關(guān)注的熱點(diǎn)，現(xiàn)在針對(duì)氣溶膠的遺傳毒性大多數(shù)采用氣-液界面暴露方式[22]，但關(guān)于霧化添加劑的遺傳毒性的評(píng)價(jià)還很欠缺。有文獻(xiàn)單獨(dú)考察了單一添加劑的遺傳毒性[16]，但霧化氣溶膠的成分較為復(fù)雜，檢測(cè)遺傳毒性時(shí)應(yīng)考慮添加劑之間的相互作用。本文采取參比煙液氣溶膠作為本底，考察了單一添加劑L-香芹酮添加后整體煙液的遺傳毒性，為霧化添加劑的遺傳毒性評(píng)價(jià)提供了一個(gè)新的思路。本試驗(yàn)還存在一些缺陷，如僅考慮了L-香芹酮的3倍使用劑量的遺傳毒性，暴露時(shí)間受霧化設(shè)備的限制也僅設(shè)置了

30 min，可進(jìn)一步研究高劑量或者長(zhǎng)時(shí)間暴露條件下的L-香芹酮的遺傳毒性。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)條件下，采取氣-液（瓊脂）界面暴露，加入300 mg·L-1的L-香芹酮暴露30 min后，未改變霧化劑參比煙液氣溶膠的遺傳毒性。可見L-香芹酮在限定劑量下其吸入途徑的遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)較小。

參考文獻(xiàn)

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