香榧仁油中不同形態酚類物質的提取優化及抗氧化能力評價

許曉君, 羅 凡, 方學智, 杜孟浩, 胡立松, 龍奇志, 鐘海雁

(中國林業科學研究院亞熱帶林業研究所1,杭州 311400)

(中南林業科技大學食品科學與工程學院2,長沙 410004)

香榧(Torreyagrandiscv.Merrilli)是紅豆杉科榧屬常綠喬木,又稱細榧、真榧、榧子、玉榧、羊角榧等,分布在我國北緯27°～32°亞熱帶丘陵山區(主要在浙、皖、贛、閩等10省),具有很高的食用和藥用價值。近年來香榧產業不斷擴大,據浙江省香榧產業協會統計,2012—2018年間香榧產量的年增量為10%～20%,預計2033年產量達25 000 t。香榧種仁含油率為54.62%～61.47%,油脂富含亞油酸、油酸和二十碳三烯酸等不飽和脂肪酸,還含有生育酚、甾醇和多酚等生物活性物質[1]。其中,酚類物質可清除或減少自由基、螯合過渡金屬離子、抑制氧化應激酶活性并促進抗氧化劑發揮作用,具有抗氧化和抗癌等功效[2]。

依據多酚的存在形態及其在有機溶劑中的溶解性,植物源酚類物質可分為可溶性的游離態酚(FP)、酯化態酚(EP)和不溶性結合態酚(IBP),FP可通過水或有機溶劑直接提取,而EP和IBP多與其他對象結合,具有難萃取的特點。食品基質中不同形態酚類物質的提取往往先利用高極性溶劑提取分離可溶、不溶性酚,此后通過水解釋放兩者中以結合態形式存在的酚,再采用低極性溶劑提取游離形式的酚(包括FP及釋放出的EP和IBP)。從食品基質中提取分離可溶、不溶性酚的溶劑常采用甲醇、乙醇、丙酮或有機溶劑-水復合溶液,研究發現有機溶劑-水復合溶液提取酚類物質效率更高,這可能與溶劑極性發生改變以及酚類物質溶解性提升有關[3]。沈丹玉等[4]發現不同比例的甲醇和乙醇提取液中酚酸的種類和提取率存在差異,體積分數為80%甲醇和體積分數為70%乙醇對大部分酚酸的提取效果較好;而Li等[5]則發現利用甲醇-丙酮-水的混合溶劑提取可溶性酚類物質效果更好。針對從植物材料中提取分離出的結合態酚類物質,目前廣泛采用堿解的方式釋放被碳水化合物、蛋白質等生物大分子物質結合的酚類物質[6]。強堿環境可對大分子的骨架結構造成一定程度的破壞,堿解效率受溫度、時間、堿液濃度和料液比等堿解條件的影響[7]。游離形式的酚(包括FP及釋放出的EP和IBP)常利用乙酸乙酯或乙醚-乙酸乙酯等溶劑提取,石油醚在酚類物質或黃酮等極性物質的提取中亦有應用,如石油醚提取巴豆酚類物質的效率高于乙酸乙酯和氯仿等有機溶劑[8],該溶劑與乙醚相比極性較低,揮發性更小。目前,全面考察提取溶劑、提取次數和水解條件等因素對不同形態酚類物質提取效率及其抗氧化性影響的研究較少[9,10],提取條件的優化亟待進行。

油脂儲藏過程中酚類物質與細胞壁物質之間的共價作用或非共價作用往往發生變化,不同儲藏方式可能影響結合態酚類物質的轉化,鮮有研究涉及儲藏條件對油脂不同形態酚類物質含量及其抗氧化能力的影響。本研究以香榧仁油為原料,通過單因素實驗優化FP、EP和IBP的提取條件,應用優化后的方法提取常溫儲藏和冷藏香榧仁油中的不同形態酚類物質,測定其總酚含量并通過測定DPPH、ABTS自由基清除能力和鐵離子還原能力評價不同儲藏方式下3種形態酚類物質抗氧化能力的差異,旨在為香榧仁油中酚類物質的提取及油脂儲藏方式的選擇提供指導。

1 材料與方法

1.1 原料與試劑

香榧籽經自然晾干、脫蒲等預處理工序后備用;福林酚試劑、沒食子酸、6-羥基-2, 5, 7, 8-四甲基色烷-2-羧酸(Trolox)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2'-聯氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)、2, 4, 6-三吡啶基三嗪(TPTZ);丙酮、甲醇等試劑均為分析純級。

1.2 儀器與設備

DGG-9140A電熱恒溫鼓風干燥箱,6YL-275型螺旋式榨油機,6YY-190自動液壓榨油機,S-114電子天平,XW-80A旋渦混合儀,KQ-500E超聲波清洗器,Avanti J-E 離心機,Q-101平行蒸發儀,MTN-2800D氮吹儀,NRY-2102C恒溫振蕩器,UV-2550 紫外分光光度計。

1.3 實驗方法

1.3.1 香榧仁油的制備

稱取一定量香榧籽脫殼粉碎,于70～80 ℃下液壓榨油,用于香榧仁油中不同形態酚類物質提取優化研究;香榧仁油分別于室溫和4 ℃下儲藏1年,用于儲藏方式對香榧仁油中不同形態酚類物質含量和抗氧化能力的影響研究。

1.3.2 不同形態酚類物質的提取方法

香榧仁油中不同形態酚類物質的提取參考Arruda等[11]的方法并作適當修改。

制備可溶性酚類物質提取液：稱取5 g香榧仁油,加入15 mL正己烷溶解,按料液比1∶1加入V甲醇∶V丙酮∶V水=7∶7∶6溶液萃取,重復提取5次后收集合并有機相,于40 ℃下真空濃縮,濃縮液用正己烷萃取除去殘油后得可溶性酚類物質提取液,用于后續FP和EP的提取。

制備FP提取液：取10 mL可溶性酚類物質提取液與25 mLV乙醚∶V乙酸乙酯=1∶1溶液混合,重復萃取5次后收集合并有機相,于40 ℃下真空蒸干,用體積分數為90%的甲醇溶液復溶后得FP提取液。

制備EP提取液：收集提取FP后的可溶性酚類物質剩余提取液,加入10 mL 2 mol/L的NaOH溶液,充氮除去空氣后密封,于45 ℃下避光堿解6 h,堿解后用鹽酸調節pH至2,按體積比1∶2.5加入V乙醚∶V乙酸乙酯=1∶1溶液混合,重復萃取充分后收集合并有機相,于40 ℃下真空蒸干,用體積分數為90%的甲醇溶液復溶后得EP提取液。

制備IBP提取液：收集提取可溶性酚類物質后的剩余油相,加入10 mL 2 mol/L的NaOH溶液,充氮除去空氣后密封,于45 ℃下避光堿解6 h,堿解后用鹽酸調節pH至2,加入正己烷萃取除去殘油后收集水相,按體積比1∶2.5加入V乙醚∶V乙酸乙酯=1∶1溶液混合,重復萃取充分后收集合并有機相,于40 ℃下真空蒸干,用體積分數為90%的甲醇溶液復溶后得IBP提取液。

1.3.3 不同形態酚類物質提取條件優化

1.3.3.1 可溶性酚提取溶劑優化

分別采用V甲醇∶V丙酮∶V水=7∶7∶6溶液、V丙酮∶V水=80∶20溶液、V甲醇∶V水=70∶30溶液作為可溶性酚提取溶劑,其他步驟按1.3.2方法進行,測定各形態酚提取液中的總酚含量并作為衡量指標。

1.3.3.2 游離形式酚提取溶劑及提取次數優化

分別采用乙酸乙酯、V乙醚∶V乙酸乙酯=1∶1溶液、V石油醚∶V乙酸乙酯=1∶1溶液提取游離形式酚(包括FP與水解釋放出的EP、IBP),并考察提取次數(1、2、3、4、5次)對FP含量的影響,其他步驟按1.3.2方法進行,測定各形態酚提取液中的總酚含量并作為衡量指標。

1.3.3.3 結合態酚堿解條件優化

分別采用不同堿解濃度(0.2、0.5、0.8、1、2 mol/L)、堿解時間(2、4、6、8、10 h)和堿解溫度(25、30、35、40、45 ℃)對提取FP后的可溶性酚類物質剩余提取液和提取可溶性酚類物質后的剩余油相進行堿解,其他步驟按1.3.2方法進行,測定EP、IBP提取液中總酚含量并作為衡量指標。

1.3.4 儲藏香榧仁油中不同形態酚的提取與抗氧化活性測定

1.3.4.1 儲藏香榧仁油中不同形態酚的提取

分別稱取5g常溫儲藏和冷藏香榧仁油,采用1.3.3優化后的提取條件按1.3.2的方法制備不同形態酚提取液。

1.3.4.2 總酚含量(TPC)的測定

參考Zhong等[12]的方法并作適當修改。采用福林酚比色法測定不同形態酚提取液的總酚含量,以沒食子酸為標樣繪制標準曲線y=0.113 53x+ 0.007 46(R2=0.999)。取1 mL提取液,加入0.5 mL福林酚試劑,反應3 min 后加入1 mL 20%碳酸鈉溶液,定容至10 mL后顯色90 min,于760 nm處測定吸光度,總酚含量以沒食子酸當量表示,單位為μg GAE/g。

1.3.4.3 抗氧化活性的測定

DPPH自由基清除活性的測定參考謝丹[13]的方法并作適當修改。用甲醇配制濃度為0.1 mmol/L 的 DPPH 溶液,樣品組(1 mL樣液與3.0 mL DPPH-甲醇溶液混合,甲醇定容至5 mL)混合后避光反應30 min,于 517 nm處讀取吸光度值As;同時設置對照組(1 mL甲醇與3.0 mL DPPH-甲醇溶液混合,甲醇定容至5 mL)以及空白組(1 mL樣液與3.0 mL甲醇混合,甲醇定容至5 mL),分別測定吸光度值Ac和Ab,計算自由基清除率R。DPPH自由基清除活性以Trolox當量來計算,單位為μmol TE/100 g。

(1)

式中：As為樣品吸光度值;Ab為空白吸光度值;Ac為對照吸光度值。

(2)

式中：Ab為空白吸光度值;As為樣品吸光度值。

鐵離子還原能力的測定參考Luo等[15]的方法并作適當修改。將300 mmol/L醋酸鹽緩沖液(pH3.6)、10 mmol/L 的 TPTZ 溶液(溶劑為40 mmol/L HCl)與 20 mmol/L 的FeCl3溶液按照體積比 10∶1∶1的比例混合配制FRAP試劑,置于 37 ℃下恒溫,現配現用。取 9 mL FRAP試劑與0.5 mL樣液置于10 mL比色管內,去離子水定容至刻度,混合均勻后于室溫下反應30 min,于593 nm處測量吸光度,并設空白組(甲醇替代樣品溶液)調零。鐵離子還原能力以Trolox當量來計算,單位為μmol TE /100 g。

1.4 數據處理

實驗數據皆為3次重復平均值。采用 Microsoft Excel 2010 軟件進行數據整理與作圖, SPSS 21.0軟件對實驗數據進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 香榧仁油中不同形態酚類物質的提取優化

2.1.1 可溶性酚提取溶劑對不同形態酚含量的影響

固定其他提取條件參數,以香榧仁油中不同形態酚類物質含量作為判定指標,對不同可溶性酚提取溶劑的考察結果如圖1所示。

圖1 可溶性酚提取溶劑不同形態酚類物質含量的影響

由圖1可知,甲醇-丙酮-水和丙酮-水提取的香榧仁油中3種形態酚類物質含量排序均為FP>IBP>EP。甲醇-水提取的IBP含量高于FP,EP含量最低,這與Wu等[16]發現的采用甲醇提取核桃仁中的IBP效率高于丙酮的結果保持一致。以甲醇-水提取的IBP含量和酚總和顯著高于丙酮-水(P<0.05),而以甲醇-丙酮-水提取的香榧仁油FP、EP、IBP含量和3種形態酚總和均顯著高于甲醇-水和丙酮-水(P<0.05)。不同溶劑對酚類物質的提取效果存在差異說明溶劑種類和極性會影響抗氧化物質的提取及其定量分析。因此,以甲醇-丙酮-水(7∶7∶6)為可溶性酚提取溶劑為宜。

2.1.2 游離形式酚提取溶劑對不同形態酚含量的影響

固定其他提取條件參數,以香榧仁油中不同形態酚類物質含量作為判定指標,對不同游離形式酚(FP及釋放的EP、IBP)提取溶劑的考察結果如圖2所示。

圖2 游離形式酚提取溶劑對不同形態酚類物質含量的影響

由圖2可知,以乙酸乙酯和乙醚-乙酸乙酯為游離形式酚提取溶劑提取的不同形態酚類物質含量排序均為FP>IBP>EP,而石油醚-乙酸乙酯提取的酚含量排序為EP>FP>IBP,研究發現以相同溶劑提取茶葉籽油[17]、青稞[18]中的各形態酚含量排序與香榧仁油的也不盡相同,這說明不同形態酚類物質的分布不僅受提取溶劑的影響,還可能因食品基質而異。有研究發現用乙酸乙酯回收橄欖加工后廢水中的酚類物質效果較好[19],但圖2顯示乙醚和石油醚分別與乙酸乙酯等體積混合提取的香榧仁油中不同形態酚類物質含量和酚總和均顯著高于乙酸乙酯(P<0.05),乙酸乙酯的提取效果最差,這與乙酸乙酯提取巴豆酚類物質效果較差的研究發現保持一致[8]。采用乙醚-乙酸乙酯提取的FP和IBP含量與石油醚-乙酸乙酯相比無顯著差異(P<0.05),但石油醚-乙酸乙酯提取的EP含量和3種形態酚總和顯著更高(P<0.05),且石油醚對環境的影響更小。因此,以石油醚-乙酸乙酯(1∶1)提取香榧仁油中FP及水解后釋放的結合態酚為宜。

2.1.3 提取次數對FP含量的影響

2.1.2已確定最適游離形式酚提取溶劑為石油醚-乙酸乙酯(1∶1),有機溶劑的提取次數往往會對酚類物質的提取效率有一定的影響。為提升提取效率和避免溶劑浪費,本研究進一步考察了料液比為1∶2.5 的條件下石油醚-乙酸乙酯(1∶1)提取次數對香榧仁油中FP含量的影響,結果如圖3所示。

圖3 提取次數對香榧仁油FP含量的影響

由圖3可知,香榧仁油中FP含量隨提取次數的增多先增大后減小。相應溶劑提取2次所得FP含量較之單次提取提高了13%;提取次數增至3次FP含量增長不顯著(P<0.05);繼續增加提取次數至4次FP含量提升顯著(P<0.05),提高了40%;提取次數達4次之后FP含量變化不顯著性(P<0.05),說明香榧仁油中FP經4次提取已充分轉移至提取溶劑中。

2.1.4 堿解條件對EP和IBP含量的影響

食品基質中游離態酚類物質通過氫鍵、共價鍵或疏水相互作用與其他組分結合,被結合的酚類物質經堿解可釋放出來[20]。堿解過程中堿液濃度、堿解時間和堿解溫度對EP和IBP含量的影響如圖4所示。

圖4 堿解條件對香榧仁油EP和IBP含量的影響

由圖4a可知,在0.2～2.0 mol/L的濃度范圍內,香榧仁油中EP和IBP含量均隨堿液濃度增大呈現升高-下降-升高的趨勢,IBP含量的變化不顯著(P<0.05)。堿液濃度由0.2 mol/L增大至0.5 mol/L時EP含量顯著增長28%(P<0.05),表明適當增加堿液濃度有利于結合態酚類物質發生水解,釋放出游離態的酚類物質。而堿液濃度由0.5 mol/L增至1.0 mol/L時EP和IBP含量分別下降27%和22%,其中EP含量呈顯著性下降(P<0.05)。堿液濃度增大引起的EP含量降低可能與酚類物質穩定性發生下降有關。當濃度超過1.0 mol/L后,EP和IBP含量皆有所增長,推測這與強堿環境下某些聚合物空間構象嚴密的骨架結構發生分解,更多的游離酚類物質被釋放有關[21]。

圖4b顯示, 2～10 h范圍內,香榧仁油中EP和IBP含量變化趨勢相同,均隨堿解時間的延長先逐漸增大,于6 h處到達頂點后呈現下降-升高的趨勢。堿解時間由2 h延長至6 h期間,EP含量增長變化不顯著而IBP含量顯著增長了94%(P<0.05),說明適當延長堿解時間可促進結合態酚類物質轉變為游離態酚類物質,且IBP受此影響較大。此后延長堿解時間至8 h,EP和IBP 2種結合態酚類物質水解程度分別發生非顯著性和顯著性下降(P<0.05),這可能是因為酚類物質長時暴露于堿性環境中結構遭受了破壞。堿解超過8 h后EP和IBP含量提升顯著(P<0.05),推測有某些被緊密結合的酚類物質經長時充分堿解后釋放出來。在生產實際中,除需考慮酚類物質堿解效率外,還應考慮堿解時間延長帶來的成本增加,香榧仁油中結合態酚類物質堿解6 h為宜。

由圖4c可知,在25～45 ℃的堿解溫度范圍內,提高溫度對EP和IBP提取效率的影響不一致。當堿解溫度由25 ℃開始提升時,EP和IBP含量均顯著增長(P<0.05),說明了適當提高溫度有利于結合態酚類物質的水解,這可能與升溫促進一些酚類物質與大分子物質間結合鍵的斷裂有關。但是,堿解溫度由25 ℃升至30 ℃時EP含量已增至頂點,而IBP含量增至頂點需提升溫度至40 ℃,這可能是因為不同結合鍵斷裂的難易程度存在差異。當EP和IBP含量到達頂點之后,繼續提升堿解溫度引起2種形態酚類物質含量皆出現下降,推測是因為酚類物質具有熱不穩定性,高溫破壞羥基酸[22]等物質的結構,造成總體含量下降。EP含量在堿解溫度超過40 ℃之后略微增大,但變化并不顯著(P<0.05),表明可能有非熱敏性酚類物質被釋放出來。

綜合考慮酚類物質提取效率及生產成本,香榧仁油中EP和IBP的較優堿液濃度、堿解時間和溫度分別為： 0.5 mol/L、6 h、30 ℃和0.5 mol/L、6 h、40 ℃。

2.2 儲藏方式對香榧仁油中不同形態酚類物質含量及抗氧化能力的影響

2.2.1 儲藏方式對香榧仁油中不同形態酚類物質含量的影響

應用優化后的方法提取常溫儲藏和冷藏香榧仁油中的FP、EP和IBP,2種儲藏方式下香榧仁油中不同形態酚類物質含量如圖5所示。

圖5 儲藏方式對香榧仁油不同形態酚類物質含量的影響

由圖5可知,冷藏香榧仁油中的酚的質量分數總和為87.22 μg/g,高于常溫儲藏條件下的77.67 μg/g;從冷藏香榧仁油中提取的EP和IBP含量較高,而從常溫儲藏香榧仁油中提取的FP含量較高,這與Zhou等[23]發現冷藏可延緩糙米結合酚比例下降的結果保持一致。常溫儲藏和冷藏條件下不同形態酚的分布趨勢分別為：FP>EP>IBP、EP>FP>IBP,這可能與不同儲藏條件下各酚類物質的溶解與氧化性存在差異有關[24];也可能是因為常溫下與油脂、多糖和蛋白質等大分子物質結合的結合態酚類物質釋放出來,以游離態的形式存在于油脂中[25]。2種儲藏方式下香榧仁油中酚類物質含量最低的均為IBP,僅占酚總和的17%左右;常溫儲藏香榧仁油中FP含量居首,而冷藏香榧仁油中EP含量最高。從油茶籽油[26]中提取的IBP含量皆明顯更高,不同油脂間不同形態酚類物質的分布規律存在一定差異,說明酚類物質含量受油脂種類的影響較大。

2.2.2 儲藏方式對香榧仁油中不同形態酚類物質抗氧化能力的影響

應用優化后的方法提取常溫儲藏和冷藏香榧仁油中的FP、EP和IBP,2種儲藏方式下香榧仁油中不同形態酚類物質的抗氧化能力結果如圖6所示。

圖6 儲藏方式對香榧仁油中不同形態酚類物質抗氧化能力的影響

2種儲藏溫度下香榧仁油中FP的DPPH自由基清除活性、ABTS自由基清除活性和鐵離子還原能力均明顯高于其他2種形態酚,FP的抗氧化能力相對最強。由圖6a可知,不同儲藏方式下香榧仁油中不同形態酚類物質清除DPPH自由基能力的排序并不相同,常溫儲藏下EP的抗氧化能力略高于IBP,而冷藏條件下IBP的抗氧化能力強于EP。冷藏香榧仁油中3種形態酚類物質的DPPH自由基清除活性均高于常溫儲藏香榧仁油。王敏等[27]發現低溫儲藏鮮食石榴籽粒能保持多酚穩定性,提高抗氧化活性,大大延長了商品貨架期,這與本實驗結果保持一致。圖6b顯示儲藏方式不影響不同形態酚類物質清除ABTS自由基能力的排序,且冷藏油中3種形態酚類物質的抗氧化能力均更高。由圖6c可知,不同儲藏方式下3種形態酚類物質鐵離子還原能力排序均為：FP>EP>IBP,這與常溫儲藏油不同形態酚類物質含量的排序相似,說明酚類物質體外抗氧化能力可能與其組成結構和酚含量有關。此外,除FP外,常溫儲藏油中EP和IBP的鐵離子還原能力均低于冷藏油。

冷藏香榧仁油中結合態酚類物質含量更高,而常溫儲藏油中游離態酚類物質含量更高。2種儲藏方式下香榧仁油中FP的抗氧化能力相對最強;冷藏油的抗氧化能力總體優于常溫儲藏油,這與冷藏油中不同形態酚類物質總和高于常溫儲藏油的結果保持一致,說明酚類物質含量和抗氧化能力呈正相關。

3 討論

堿法水解釋放被結合酚類物質的優點在于可在室溫條件下進行、多酚降解流失少且能同時釋放通過糖苷鍵和酯鍵而結合的多酚,因而被廣泛應用于谷物等植物材料結合酚的水解中[28]。本研究利用氫氧化鈉堿解的方式將香榧仁油中的結合態酚轉變為游離態的酚類物質,考察了不同堿液濃度、溫度和時間下的堿解效率。Peng等[29]發現堿液種類亦會影響結合態酚的堿解效果。不同堿液堿性存在差異,水解的主要基團不同,堿解后釋放的游離酚結構上的基團存在差異,氫氧化鈉、氫氧化鉀較之碳酸鈉和碳酸鉀更能促進甲氧基團發生脫氧作用。結合酚的水解方法除堿法外,酸法和酶法等亦有所應用。有研究報道表明,酸法水解青稞中的結合酚,其總酚、總黃酮含量及水解物的抗氧化性均顯著高于堿法(P<0.05)[30],這可能是因為酸法水解過程采用的高溫更有利于釋放出被包埋在核內或偶聯至細胞壁膳食纖維或蛋白質上的結合酚類化合物[31],但此法也會損失一些羥基酸。李群等[32]在亞麻籽粉的常溫堿解和堿酶協同水解產物中都檢出了SDG,且后者還檢測到了阿魏酸、對香豆酸成分,而單獨使用酶促水解不能釋放出游離酚酸。這可能是因為在堿、酶協同水解條件下,強堿環境首先對大分子的骨架結構造成了一定程度的破壞,使得酶解得以進行,釋放出更多的單體酚類物質。

研究發現改變提取條件或儲藏條件會對香榧仁油同一形態酚類物質含量造成一定影響,推測酚類物質的組成和含量受體系的影響發生了變化。如楊希娟等[30]發現不同提取溶劑對不同種類單體酚的富集及提取效率不同,體積分數80%丙酮溶液更容易富集青稞中黃烷酮、黃烷醇類物質;體積分數80%甲醇溶液提取更容易富集羥基苯甲酸類、羥基肉桂酸類及黃酮醇類物質;體積分數80%乙醇溶液和純水提取物中楊梅素和水楊酸的含量分別最高。而相同條件下不同形態酚類物質間的含量差異也可能與酚類物質的組成和含量有關。朱昱琳等[33]研究發現長黑青稞游離多酚中原兒茶酸、兒茶素和楊梅素含量較高;酯化多酚中原兒茶酸、阿魏酸和兒茶素含量較高;不可溶鍵合多酚阿魏酸和楊梅素含量較高。因此,對香榧仁油中不同形態酚類物質的研究還應進一步分析酚類物質的組成,研究其變化對酚類物質含量和抗氧化能力的影響。

4 結論

通過單因素實驗優化了香榧仁油中不同形態酚類物質的提取條件,結果表明使用甲醇-丙酮-水(7∶7∶6)萃取分離香榧仁油可溶、不溶性酚類物質效果較好;可溶酯化態酚和不溶性結合態酚堿水解的最適堿液濃度、時間和溫度分別為0.5 mol/L、6 h、30 ℃和0.5 mol/L、6 h和40 ℃;可溶游離態酚及水解后釋放的結合態酚使用石油醚-乙酸乙酯(1∶1)提取效率較高。

應用優化后的方法對2種儲藏方式下香榧仁油中不同形態酚類物質進行提取并測定其酚含量及抗氧化能力,結果表明常溫儲藏和冷藏條件下香榧仁油中不同形態酚類物質的分布趨勢分別為：游離態>酯化態>不溶性結合態、酯化態>游離態>不溶性結合態;冷藏香榧仁油中的酚含量總和、3種形態酚的DPPH及ABTS自由基清除活性和結合態酚的鐵離子還原能力均高于常溫儲藏香榧仁油,冷藏油中酚類物質抗氧化能力總體優于常溫儲藏油。