飼料添加三黃散對白蕉海鱸生長性能的影響

淮亞紅，劉妍*，郭艷峰，唐光華

（1.中山火炬職業技術學院，廣東 中山 528436；2.中山市強晟水產養殖有限公司，廣東 中山 528467）

海鱸（Lateolabrax japonicus）屬花鱸科（Lateolabracidae）花鱸屬（Lateolabrax），學名中國花鱸，是我國海水魚中產量第一的魚類，位居珠江流域四大名魚之首[1]。白蕉海鱸養殖起源于珠海市斗門區白蕉鎮，當地咸淡水鹽度保持在0.1%～0.5%[2]，養殖出的海鱸魚體表皮光亮，背部青色，腹部白色，背肥肚圓，通體肉厚，肉質美味嫩滑，深受消費者青睞。白蕉海鱸魚主要采用傳統的池塘高密養殖模式[3-4]，容易導致水體環境惡化和致病菌增加[5]，在很大程度上增加了白蕉海鱸患病的風險。

水產品的藥物殘留日益受到消費者關注，為了降低藥物殘留，不易產生抗藥性和毒副作用的中藥制劑，越來越受到水產養殖者的青睞[6]。三黃散作為國標范圍內的水產用藥，是由大黃、黃芩、黃柏和大青葉4 味藥材，經粉碎制成，具有清熱解毒效果，其中大黃對嗜水氣單胞菌抗菌效果最佳[7]。在白蕉海鱸實際喂養過程中，三黃散的藥效與投喂階段關系密切。發病初期投喂三黃散效果最佳；發病嚴重后再投喂，則三黃散功效欠佳，需配合抗生素等藥物?，F開展飼料中三黃散不同添加量，對白蕉海鱸營養成分和非特異性免疫力的影響試驗，擬為三黃散的精細化使用及其他中藥制劑的科學投喂,提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 時間與地點

2020 年1 月—2022 年12 月。試驗地點位于中山市坦洲鎮海鱸養殖基地。

1.2 材料

選擇健康的白蕉海鱸120 尾，體質量600～700 g。

1.3 試驗設計

中藥制劑三黃散（獸藥字16274 號），規格250 g/袋。設置3 個試驗組（A、B、C），分別在基礎飼料中添加1.0%（A）、1.2%（B）、1.6%（C）三黃散。以不添加三黃散的基礎飼料組為空白對照組（D），試驗組和對照組各設3 個平行，每個平行為10 尾魚。

1.4 儀器

TA.newplus 質構儀（上海瑞玢智能科技有限公司）；SYSMEXKX-1 全自動血細胞分析儀（日本Sysmex 公司）；GCMS-QP2020[島津企業管理（中國）有限公司]；L-8900 氨基酸分析儀[日立分析儀器（上海）有限公司]；Agilent 1260Ⅱ（安捷倫科技公司）。

1.5 試驗方法

1.5.1 魚肉樣品的處理

參照李樂[8]的方法取得樣品。將樣品放進密封袋，并置于-20℃的冰箱中保存。檢測時，需自然解凍，測定各項指標，所有分析均取3 個平行樣，每個平行10 條。

1.5.2 脾臟體指數

參照劉青等[9]的方法，取脾臟并稱其質量。脾臟體指數=（脾臟質量/體質量）×100%。

1.5.3 肝臟體指數

檢測方法與脾臟體指數檢測方法相同。肝臟體指數=（肝臟質量/體質量）×100%。

1.5.4 血液的采集與檢測

血液采集方法根據文獻[10-12]。全血細胞指標：白細胞計數（WBC）、淋巴細胞百分比（LYM）、紅細胞（RBC）、中性粒細胞百分比（NEU）、血小板計數（PLT）、平均紅細胞血紅蛋白濃度（MCHC）、平均紅細胞血紅蛋白含量（MCH）、平均紅細胞體積（MCV）、紅細胞比容（HCT）、血紅蛋白（HGB）、紅細胞體積分布寬度（RDW），采用血液檢測儀完成檢測。血清指標主要檢測天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）。

1.5.5 白細胞吞噬能力測定

用1 mL 無菌注射器，于試驗魚的心臟采血，置于抗凝血液采集管中。取100 μL 的抗凝血于玻片上，加入10 μL 墨汁涂均勻后，在37℃的培養箱中培養4 h，于10×物鏡顯微鏡下，觀察并統計白細胞的吞噬數量，計算吞噬率百分比。白細胞吞噬百分比（%）=（100 個白細胞中參與的白細胞數/100）×100%。

1.5.6 營養指標的檢測

蛋白質的檢測參照《食品安全國家標準食品中蛋白質的測定》（GB 5009.5—2016）第一法；脂肪的檢測參照《食品安全國家標準食品中脂肪的測定》（GB 5009.6—2016）第一法；碳水化合物的檢測參照《食品營養成分基本術語》（GB/Z 21922—2008）；水分的檢測參照《食品安全國家標準食品中水分的測定》（GB 5009.3—2016）第一法；灰分的檢測參照《食品安全國家標準食品中灰分的測定》（GB 5009.4—2016）第一法。

1.5.7 質構的測定方法

根據文獻[13]方法，測定魚肉的硬度、黏著性、彈性、凝聚性、咀嚼性。

1.6 數據統計

數據處理采用SPSS 27.0 軟件的單因素方差分析（One-Way ANOVA），用LSD 多重比較法進行組間差異顯著性檢驗，結果以（平均值±標準誤）表示。

2 結果與分析

2.1 全血細胞指標和血清指標

魚類全血細胞指標可以反映魚體的健康狀況以及生存環境[14]。添加不同比例三黃散喂養白蕉海鱸的全血指標見表1。

表1 添加不同比例三黃散喂養白蕉海鱸的全血指標

由表1 可見，白蕉海鱸全血中白細胞、淋巴細胞、紅細胞數量及紅細胞比容、平均紅細胞體積隨著三黃散添加比例的增加而減少。平均紅細胞血紅蛋白含量、平均紅細胞血紅蛋白濃度、紅細胞體積分布寬度及血小板計數隨著三黃散添加比例的增加而上升。

天冬氨酸氨基轉移酶（AST）以心肌含量最豐富，其次是肝臟。當肝細胞出現壞死時，AST 從肝細胞中釋放出來導致血清中AST 增高。丙氨酸氨基轉移酶（ALT）同樣也存在于肝細胞漿內，肝細胞被破壞可導致血清ALT 增高。血清指標檢測結果顯示（表2），D 組的白蕉海鱸，血清中AST 含量（174.73±54.32）U/L 與A 組的AST 含量沒有差異（P＞0.05），當三黃散添加量增加至1.2%和1.6%時，血清中AST含量顯著降低（P＜0.05）。喂養三黃散，可顯著降低血清中的ALT 含量（P＜0.05），表明三黃散有利于提高魚肝臟的健康。

表2 不同比例三黃散喂養白蕉海鱸的血清指標① U/L

2.2 非特異性免疫指標

脾臟是重要的淋巴器官，可合成免疫物質，且能有效清除血液中的病菌及死細胞[15]。肝臟是魚體中大部分酶進行代謝活動的主要場所，承擔著重要的生物轉化作用[16-18]。脾臟體指數、肝臟體指數都是魚類非特異性免疫功能的重要指標之一。

D 組白蕉海鱸與A、B、C 組的白蕉海鱸在脾臟體指數和肝臟體指數上無差異（P＞0.05）,該結果與禹方曉等[14]的研究結果一致，表明三黃散飼喂對白蕉海鱸魚無害。在白細胞吞噬百分比（PP）方面，D 組與A 組白蕉海鱸的PP 值無差異（P＞0.05），隨著飼料中三黃散添加量的增加，B 組和C 組的白蕉海鱸PP 值顯著高于D 組（P＜0.05），表明在基礎飼料中添加一定比例的三黃散，可有效提高白蕉海鱸白細胞的吞噬活性。隨著B 組和C 組白蕉海鱸體質量的增加，魚營養物質的消化吸收均得到提高（表3）。

表3 添加不同比例三黃散喂養白蕉海鱸的非特異性免疫功能指標①

2.3 營養指標和質構指標

添加不同比例三黃散喂養白蕉海鱸每100 g 魚肉主要營養指標見表4。

表4 添加不同比例三黃散喂養白蕉海鱸每100 g 魚肉的營養指標①

由表4 可見，D 組的白蕉海鱸魚肉能量為（380.67±7.09）kJ、蛋白質含量為（17.70±0.56）g、脂肪含量（1.43±0.06）g，B 組和C 組的三黃散喂養2 個月后，白蕉海鱸魚肉的能量、蛋白質含量和脂肪含量均顯著增加（P＜0.05）。D 組碳水化合物的含量則由（1.57±0.25）g 降低至1.43～1.10 g。D 組鈉含量為（26.917±0.780）mg，添加三黃散喂養后，升高至28.21～31.73 mg，其中C 組三黃散喂養的白蕉海鱸魚肉鈉含量最高（31.73±1.10）mg。總之，B 組和C 組的三黃散喂養對魚肉的營養指標有顯著影響，其中能量、蛋白質含量、脂肪含量隨著三黃散添加比例的增加而增加，碳水化合物隨著三黃散添加比例增加，含量降低；鈉的含量隨著三黃散添加比例增加升高；水分含量隨著三黃散添加比例增加而降低。B 組和C 組的三黃散喂養，對魚肉的灰分指標影響差異不顯著。

魚肉硬度是人體組織的觸覺，主要源于大量存在于魚肉肌纖維間隙結締組織中膠原蛋白含量，是魚肉保持形狀的內部結合力，膠原蛋白含量低的肉質硬度相對低。魚肉硬度還表現為人在咀嚼試樣組織時的質感[19]。彈性指有外力作用時，試樣變形情況及外力移除后試樣恢復原來的性能[19]。黏聚性是魚肉抵抗受損并緊密連接使其保持完整的性質。不同比例三黃散喂養白蕉海鱸魚肉的質構指標見表5。

表5 不同比例三黃散喂養白蕉海鱸魚肉的質構指標①

隨著三黃散添加量的增加，魚肉的硬度和脆度逐漸增加。與D 組相比，C 組魚肉的硬度和脆度增加最為明顯（P＜0.05）。三黃散喂養對魚肉彈性和黏聚性影響不顯著（P＞0.05）。C 組的魚肉中咀嚼性顯著增加（P＜0.05）。B 組和C 組的魚肉回復性顯著高于D 組和A 組（P＜0.05）。總之，不同添加比例三黃散飼喂，均對魚肉彈性和黏聚性無影響，C 組對魚肉硬度和脆度有顯著影響，B 組和C 組對魚肉回復性有顯著影響。

3 討論

白細胞能夠通過胞吞將侵入細胞內的異物進行吞噬，是衡量魚類非特異性免疫功能的重要指標之一[11-20]。林旋等[11]用黃芪多糖飼料添加劑喂養羅非魚40 d，可不同程度地提高羅非魚血漿中白細胞的吞噬百分比和吞噬指數，且胞吞噬能力與投喂的黃芪多糖有密切相關。邢玉娟等[21]在草魚的基礎飼料中添加了黃芪、甘草、板藍根、大青葉等組成的復合中草藥，結果顯示添加復合中草藥提高了草魚白細胞的吞噬能力。本試驗中，B 組和C 組的三黃散添加量，均有效提高了白蕉海鱸的白細胞吞噬能力，且血清中天冬氨酸氨基轉移酶和丙氨酸氨基轉移酶（ALT）含量低于D 組，表明三黃散對肝臟的保護作用明顯。

同時，三黃散可促進白蕉海鱸魚體質量的增加，提高蛋白質含量、肉質硬度、脆度和回復性，繼而提高白蕉海鱸的營養價值、口感和經濟價值。本試驗再次驗證了中草藥制劑對提高魚機體非特異免疫的效果，為白蕉海鱸精細化喂養和三黃散的投喂提供了理論依據。