對不同生產企業(yè)腎石通顆粒中乙醇殘留量的檢測

李靖云，胡亮，孫輝，文慶，羅艷

湖南省藥品檢驗檢測研究院，湖南省藥品質量評價工程技術研究中心，湖南 長沙 410001

腎石通顆粒原名腎石通沖劑，處方由金錢草、王不留行、萹蓄、延胡索、雞內金、丹參、木香、瞿麥、牛膝和海金沙組成，具有清熱利濕、活血止痛、化石、排石的作用，用于腎結石、腎盂結石、膀胱結石、輸尿管結石［1］。目前市售的腎石通顆粒分為有糖型和無糖型兩種［2］，有糖型顆粒執(zhí)行《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第二冊標準，無糖型顆粒的質量標準為各企業(yè)的注冊標準。兩者的生產工藝基本相同，均為水煎煮提取2 次，合并煎液、濾過，濾液濃縮后加相應的輔料制粒而成。

乙醇是一種常用的藥物輔料，在口服固體制劑中作為黏合劑、潤濕劑，在液體制劑中作為潤濕劑使用［3-4］。同時，乙醇屬于第三類溶劑，在《中國藥典》2020 年版四部“殘留溶劑測定法”中對其有明確的限度規(guī)定，限度為0.5%［5］。腎石通顆粒在濕法制粒過程中會使用到乙醇作為黏合劑和潤濕劑［6］，而質量標準未對乙醇的加入量加以規(guī)定，因此，在工藝過程中會有未完全去除的乙醇存在。基于上述情況，為了有效地控制腎石通顆粒中乙醇的殘留量，也為生產企業(yè)關注生產工藝過程中乙醇加入量及殘留量提供參考。本研究采用氣相色譜法，對不同生產企業(yè)的有糖型和無糖型顆粒劑的乙醇殘留量進行測定，建立了腎石通顆粒中乙醇殘留溶劑的測定方法，以對乙醇殘留情況進行檢測。

1 材料

1.1 儀器

氣相色譜儀（Agilent 8890 GC system，F(xiàn)ID 檢測器，美國安捷倫）；氣相色譜柱DB-624（30 m×0.320 mm，1.80 μm；美國安捷倫）；KQ-500DE 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；AE240 電子分析天平（瑞士梅特勒托利多儀器有限公司）；XSE 205DU電子分析天平（瑞士梅特勒托利多儀器有限公司）。

1.2 試劑與試藥

乙醇（Merck 公司，含量99.9%）；正丙醇（分析純，天津市光復精細化工研究所）；水為純化水；5 家生產企業(yè)的17 批腎石通顆粒。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

以乙醇做對照，以正丙醇作為內標物，采用DB-624毛細管柱；起始溫度為40 ℃，維持2 min，以3 ℃/min的速率升溫至65 ℃，再以25℃/min 的速率升溫至200 ℃，維持10 min；進樣口溫度200 ℃；檢測器（FID）溫度220 ℃；采用頂空分流進樣，分流比為1∶1；頂空瓶平衡溫度為85 ℃，平衡時間為20 min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 內標物溶液的制備精密量取正丙醇對照品2 mL，置100 mL 量瓶中，加入純化水適量，搖勻，加純化水稀釋至刻度，即得內標溶液（20 μL/mL）。

2.2.2 對照品溶液的制備配制不含內標溶液的乙醇對照品溶液：精密量取乙醇2 mL，置100 mL 量瓶中，加入純化水適量，搖勻，加純化水稀釋至刻度，即得對照品溶液（20 μL/mL）。配制含內標溶液的乙醇對照品溶液：精密量取內標溶液（20 μL/mL）1 mL 和對照品溶液3 mL，置10 mL 量瓶中，加入純化水適量，搖勻，加純化水稀釋至刻度，即得對照品溶液①（6 μL/mL）；精密量取內標溶液（20 μL/mL）1 mL 和對照品溶液2 mL，置10 mL 量瓶中，加入純化水適量，搖勻，加純化水稀釋至刻度，即得對照品溶液②（4 μL/mL）；精密量取內標溶液（20 μL/mL）5 mL 和對照品溶液5 mL，置50 mL 量瓶中，加入純化水適量，搖勻，加純化水稀釋至刻度，即得對照品溶液③（2 μL/mL）；精密量取內標溶液（20 μL/mL）1 mL 和對照品溶液0.5 mL，置10 mL 量瓶中，加入純化水適量，搖勻，加純化水稀釋至刻度，即得對照品溶液④（1 μL/mL）；精密量取內標溶液（20 μL/mL）1 mL 和對照品溶液0.2 mL，置10 mL 量瓶中，加入純化水適量，搖勻，加純化水稀釋至刻度，即得對照品溶液⑤（0.4 μL/mL）；精密量取內標溶液（20 μL/mL）1 mL 和對照品溶液0.1 mL，置10 mL 量瓶中，加入純化水適量，搖勻，加純化水稀釋至刻度，即得對照品溶液⑥（0.2 μL/mL）。

2.2.3 供試品溶液的制備取樣品內容物適量，研細，精密稱定1 g，置10 mL 量瓶中，精密加入內標溶液1 mL，加純化水適量使溶解，用純化水稀釋至刻度，搖勻；精密量取3 mL，置10 mL 頂空進樣瓶中，密封，頂空進樣。

2.3 專屬性試驗

取“2.2”項下對照品溶液、供試品溶液和溶劑空白各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜。在該色譜條件下，乙醇與其他物質均能達到基線分離，乙醇的理論板數(shù)不低于5 000，溶劑空白對比測定無干擾。色譜圖詳見圖1。

圖1 溶劑空白（A）、對照溶液（B）及供試品溶液（C）典型氣相色譜圖

2.4 線性關系考察

取對照品溶液①、②、③、④、⑤、⑥，每份精密量取3 mL 置頂空瓶中，密封，注入氣相色譜儀，測定。按色譜條件測定，以對照品峰面積/正丙醇峰面積積分值為縱坐標，對照品濃度為橫坐標，繪制標準曲線。其回歸方程為：Y=275.54X-0.016 8，r=0.999 3。結果表明：乙醇對照品在0.2～6 μL/mL范圍內線性關系良好。

2.5 精密度試驗

取對照品溶液③6 份，每份精密量取3 mL 密封瓶口，每份精密量取3 mL 置頂空瓶中，密封，注入氣相色譜儀，測定，其峰面積積分值的RSD 為0.19%，結果表明儀器進樣精密度良好，

2.6 重復性試驗

取樣品6 份，每份取約1 g，精密稱定，置10 mL容量瓶中，精密加入內標溶液1 mL，加純化水適量使溶解，用純化水稀釋至刻度，搖勻，精密量取供試品溶液3 mL，密封瓶口，搖勻，即得。

測定法：精密量取供試品溶液頂空瓶氣體1 mL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖并計算，結果乙醇的重復性RSD 為2.2%，表明重復性較好。

2.7 回收率試驗

取腎石通顆粒樣品（批號：200602）約0.5 g，精密稱定，共9 份，分別置于10 mL 容量瓶中，再精密量取對照品溶液（20 μL/mL）3 mL、4 mL、5 mL（各3 份），分別精密量取內標溶液（20 μL/mL）1 mL，加純化水適量使溶解，用純化水稀釋至刻度，搖勻，精密量取供試品溶液3 mL 注入氣相色譜儀，測定并計算。結果表明：本方法回收率較好，結果見表1。

表1 回收率試驗結果表

2.8 樣品的測定

將5 生產企業(yè)提供的17 批次樣品，按照“2.2.3”項下的方法進行樣品制備，再按“2.1”項下條件進行檢測，檢測結果見下表2。

表2 17批次樣品乙醇殘留量測定結果表

3 討論

3.1 分析方法的選擇

腎石通顆粒制粒過程中使用的乙醇為水溶性的，且患者服用藥品的方式為水溶解后服用，故選擇水作為溶劑。研究過程中，選擇了Aglient HP-5、HP-Innowax 和DB-624［7-8］，其中采用DB-624 得到的色譜峰峰型對稱，對待測物乙醇和內標物分離度較好，且無其他峰干擾，故選擇色譜柱DB-624。

3.2 樣品測定結果分析

從樣品測定結果可以看出。企業(yè)A 的2 批有糖型和企業(yè)E 的4 批的乙醇殘留量均超出限度，企業(yè)B 的3 批有糖型有2 批超出限度，而企業(yè)C 的3 批有糖型和3 批無糖型以及企業(yè)D 的2 批無糖型均未超出限度。可見，乙醇殘留的情況因生產企業(yè)的不同而不同，這與各企業(yè)生產工藝的具體參數(shù)有關。

通過對各質量標準的調研，發(fā)現(xiàn)有糖型顆粒執(zhí)行的《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第二冊，在質量標準中均未明確其制成總量，則浸膏量也無法確定，這樣會導致不同的生產企業(yè)由于浸膏量的不同在制粒過程中使用的乙醇量也會有不同，則乙醇殘留量有差異。而無糖型的質量標準雖然均對制成總量進行了規(guī)定，但都為各企業(yè)的注冊標準，因此，不同的工藝參數(shù)會導致乙醇殘留量有不同。可見，要保證乙醇殘留量低于規(guī)定限度，不僅需要完善質量標準，還需要各生產企業(yè)考察具體的工藝參數(shù)，增強質量主體責任意識。

通過本研究，該氣相色譜方法簡單可行、重現(xiàn)性好、準確可靠，能夠達到定量檢測的要求，可以為腎石通顆粒中乙醇殘留量的測定及為各生產企業(yè)關注生產工藝過程中乙醇加入量及殘留量提供參考。