益陽(yáng)地區(qū)雞滑液囊支原體感染的血清學(xué)調(diào)查與分析

孫杰龍，丁 寧，劉頌陽(yáng)，班 博，冷電波，李清林，戴 維，王瑩芳

（益陽(yáng)市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，湖南益陽(yáng) 413046）

雞滑液囊支原體是介于細(xì)菌和病毒之間的微生物，能夠引起雞氣囊炎、關(guān)節(jié)滑液囊膜炎以及生殖道損傷，是一種急性或慢性傳染病[1]?；耗抑гw病發(fā)生至今，已對(duì)我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)造成了重大經(jīng)濟(jì)損失。肉（種）雞或蛋（種）雞養(yǎng)殖場(chǎng)均有發(fā)生，發(fā)病率為3%～50%，正常情況下，感染雞不表現(xiàn)明顯的臨床癥狀，僅少部分雞出現(xiàn)臨床癥狀，呈慢性或隱性感染[2,3]。該病既可通過(guò)空氣、飲水、飼料、雞籠等直接接觸傳播，也可經(jīng)吸血昆蟲(chóng)、蚊蠅、老鼠等間接接觸傳播，還可通過(guò)種蛋垂直傳播。由于該病發(fā)展緩慢，病程較長(zhǎng)，一旦在雞群中感染，根本無(wú)法徹底清除，造成感染雞終生帶菌[4]。程祥琴等[5]報(bào)道，感染雞群飼料利用率低、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、淘汰率高，產(chǎn)蛋率低、甚至沒(méi)有產(chǎn)蛋高峰期等，還影響雞的正常疫苗免疫應(yīng)答能力，導(dǎo)致疫苗免疫后抗體水平低且均勻度差，雞群抗病能力低，易感染其他疾病等。藥物治療效果不理想，易反復(fù)，張惠茹等[6]研究發(fā)現(xiàn)，21 株滑液囊支原臨床分離株對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類、氟喹諾酮類抗菌藥耐藥性嚴(yán)重。為了查明益陽(yáng)地區(qū)雞滑液囊支原體的感染狀況，為防控該病提供依據(jù)，本試驗(yàn)采用酶聯(lián)免疫分析試劑盒測(cè)定了益陽(yáng)地區(qū)各區(qū)縣雞群滑液囊支原體血清抗體水平，以期為益陽(yáng)地區(qū)雞滑液囊支原體防控提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑

雞滑液囊支原體抗體（MS-Ab）ELISA 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海臻科生物科技有限公司，于2～8℃保存，批號(hào)：ZK-14658。

1.1.2 樣品采集

采樣要求：雞群存欄量在2000～30000 只的養(yǎng)雞場(chǎng)，采樣雞群均未進(jìn)行雞滑液囊支原體疫苗的免疫接種。2000～10000 只采樣比例0.5%；10000 只以上采樣比例0.2%。采用隨機(jī)抽樣法無(wú)菌采集益陽(yáng)地區(qū)7 個(gè)區(qū)縣，不同規(guī)模、品種、用途和日齡的健康雞群翅靜脈血液950 份，然后按要求提取血清，盡快進(jìn)行試驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將血清放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

1.2 方法

按雞滑液囊支原體抗體（MS-Ab）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。每板設(shè)陰性、陽(yáng)性對(duì)照孔各2 孔，空白對(duì)照孔1 孔，分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性、陽(yáng)性對(duì)照液50μL。然后在待測(cè)樣品孔中加樣品稀釋液40μL，再加待測(cè)血清10μL。溫育1 次，洗滌5 次，拍干。每孔再加入酶標(biāo)試劑50μL，空白孔除外。又溫育1次，洗滌5 次，拍干。再加入顯色劑A 50μL，然后加入顯色劑B 50μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10min，加終止液50μL，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15min 以內(nèi)進(jìn)行，以空白孔調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。樣品OD 值<0.35 判為滑液囊支原體抗體陰性；樣品OD 值≥0.35 判為滑液囊支原體抗體陽(yáng)性。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同區(qū)縣雞群滑液囊支原體血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

由表1 可見(jiàn)，7 個(gè)不同區(qū)縣的雞場(chǎng)均普遍存在不同程度的雞滑液囊支原體感染，抽檢樣品陽(yáng)性率在36.36%～57.14%，平均陽(yáng)性率為43.68%，其中資陽(yáng)區(qū)陽(yáng)性率最高，與該區(qū)以中小規(guī)模雞場(chǎng)和家庭養(yǎng)殖農(nóng)場(chǎng)為主，養(yǎng)雞場(chǎng)戶數(shù)量多密度大，雞場(chǎng)與農(nóng)村居民區(qū)之間距離較近，農(nóng)村住戶家家有養(yǎng)雞的傳統(tǒng)，易造成滑液囊支原體水平傳播引起區(qū)域性感染有關(guān)；還可能與沒(méi)有選擇敏感藥物預(yù)防有關(guān)。

表1 不同區(qū)縣雞群滑液囊支原體血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同品種雞群滑液囊支原體血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

由表2 可知，青腳麻雞、湘黃雞、桃源雞、海蘭雞、羅曼雞和京粉雞都有不同程度的滑液囊支原體感染，感染率在35.13%～72.22%，平均陽(yáng)性率為48.65%。分析其原因主要是與雞場(chǎng)使用時(shí)間的長(zhǎng)短、自動(dòng)化程度高低和精細(xì)化管理措施是否執(zhí)行到位有關(guān)外，與雞品種無(wú)關(guān)。追溯現(xiàn)場(chǎng)采樣，雞場(chǎng)的使用時(shí)間短、自動(dòng)化程度高、精細(xì)化飼養(yǎng)管理措施執(zhí)行到位，滑液囊支原體感染率就低。還可能與采集的樣品數(shù)量較少，不具備充分的代表性有關(guān)。至于不同品種的雞是否對(duì)雞滑液囊支原體具有不同的抗感染性，還有待進(jìn)一步論證[7]。

表2 不同品種雞群滑液囊支原體血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

2.3 不同用途不同日齡雞群滑液囊支原體血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

由表3 可知，不同用途不同日齡的雞都可感染雞滑液囊支原體，20～30 日齡的血清陽(yáng)性率在21.43%～27.08%，31～60 日齡的血清陽(yáng)性率在37.50%～44.44%，61～90 日齡的血清陽(yáng)性率在51.11%～60.42%，91 日齡以上的血清陽(yáng)性率在56.52%～64.58%，蛋雞血清平均陽(yáng)性率為41.99%，肉雞血清平均陽(yáng)性率為48.95%。肉雞血清樣品陽(yáng)性率高于蛋雞樣品陽(yáng)性率，可能原因是肉雞飼養(yǎng)周期短，出欄快，一棟雞舍年出欄雞4批左右，雞舍存在清洗和消毒不徹底，空舍時(shí)間達(dá)不到2 周以上，沒(méi)有執(zhí)行嚴(yán)格的全進(jìn)全出生產(chǎn)制度，一些體重不達(dá)標(biāo)的雞沒(méi)有及時(shí)清欄處理，還是養(yǎng)在雞場(chǎng)內(nèi)，造成滑液囊支原體等病原微生物在雞場(chǎng)內(nèi)循環(huán)傳播，致使肉雞陽(yáng)性率偏高。不同用途的雞隨著飼養(yǎng)日齡的增長(zhǎng)，陽(yáng)性率越高的問(wèn)題，可能與雞場(chǎng)周邊家禽滑液囊支原體感染嚴(yán)重，采樣雞沒(méi)有免疫滑液囊支原體疫苗、藥物防控效果差和沒(méi)有執(zhí)行嚴(yán)格的生物安生措施等因素有關(guān)；還可能與經(jīng)上呼吸道感染滑液囊支原體的雞不產(chǎn)生抗體或者產(chǎn)生抗體需要2～4 周，在這個(gè)時(shí)間段酶聯(lián)免疫分析試劑盒檢測(cè)不敏感有關(guān)。

表3 不同用途不同日齡雞群滑液囊支原體血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

3 改進(jìn)措施

3.1 注意引種

據(jù)調(diào)查，益陽(yáng)地區(qū)本地沒(méi)有規(guī)模種雞場(chǎng)，養(yǎng)雞場(chǎng)大多從周邊省、市引進(jìn)種蛋或雞苗?；耗抑гw既可垂直傳播、又可水平傳播，引入后根本無(wú)法徹底清除[8]。故在引進(jìn)種蛋或雞苗時(shí)，不從疫點(diǎn)疫區(qū)或支原體感染嚴(yán)重的地方引種，必須選擇健康雞場(chǎng)，滑液囊支原體陰性場(chǎng)引種，從種源上杜絕感染。

3.2 疫苗免疫

疫苗接種是預(yù)防雞滑液囊支原體病的有效手段，雞滑液囊支原體疫苗包括活疫苗和滅活疫苗，王艷豐等[9]研究表明，活疫苗無(wú)法保護(hù)已感染雞群，接種后會(huì)誘發(fā)雞群發(fā)病或加重癥狀；活疫苗只能免疫陰性雞場(chǎng)，并且使用條件苛刻，免疫前1 周和免疫后3 周在飼料或飲水中不能含有抗支原體病的藥物，否則影響免疫效果。本次檢測(cè)陽(yáng)性樣品多，陽(yáng)性雞場(chǎng)只能使用滅活疫苗免疫，滅活疫苗雖然無(wú)法阻止滑液囊支原體野毒感染和定殖，卻能有效減輕雞群感染后的發(fā)病癥狀，降低對(duì)雞只造成的損傷和影響[10]。建議滅活疫苗作二次免疫，首免在3～4 周齡，二免在10～12 周齡。

3.3 藥物預(yù)防

藥物治療是防控雞滑液囊支原體感染的一個(gè)重要手段。雖然應(yīng)用藥物很難將存在于雞群中的滑液囊支原體根除，但是將泰樂(lè)菌素、泰萬(wàn)菌素、泰妙菌素、替米考星、二氟沙星和氧氟沙星等敏感藥物添加在飼料和飲水中可有效防治雞滑液囊支原體的感染。但使用泰樂(lè)菌素、泰妙菌素等抗支原體病藥物時(shí)應(yīng)注意與（甲基）鹽霉素等聚醚類藥物的配伍禁忌。有條件的雞場(chǎng)建議在用藥之前做藥敏試驗(yàn)，選擇敏感藥物采取輪換用藥的方式，分階段使用，并嚴(yán)格遵守休藥期。

3.4 實(shí)行精細(xì)化管理

滑液囊支原體與雞場(chǎng)管理有很大的相關(guān)性，回顧調(diào)查發(fā)現(xiàn)，衛(wèi)生打掃不及時(shí)、管理松散的雞場(chǎng)雞滑液囊支原體血清樣品陽(yáng)性檢出率高。為降低發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，需要改善飼養(yǎng)條件、加強(qiáng)精細(xì)化管理，減少各種誘發(fā)因素與應(yīng)激因素。加強(qiáng)雞場(chǎng)環(huán)境控制，嚴(yán)格把控雞舍內(nèi)溫度和濕度，為雞群提供舒適的生長(zhǎng)環(huán)境。針對(duì)雞群不同生長(zhǎng)階段，對(duì)養(yǎng)分的需求不同，科學(xué)搭配日糧，確保雞群獲取充足、全面的營(yíng)養(yǎng)[11]。同時(shí)在飼料內(nèi)補(bǔ)充微量元素、維生素等，提升雞群免疫力。適當(dāng)降低飼養(yǎng)密度，及時(shí)淘汰病、弱、殘次雞，保持舍內(nèi)整潔衛(wèi)生，及時(shí)清除圈舍內(nèi)的灰塵、羽毛和廢棄物等；加強(qiáng)通風(fēng)，保持舍內(nèi)空氣新鮮。嚴(yán)格落實(shí)全進(jìn)全出的生產(chǎn)制度，切斷場(chǎng)內(nèi)病原微生物的傳播鏈。雞舍內(nèi)雞群出欄后必須徹底清洗、干燥和消毒，適當(dāng)增加空舍時(shí)間，使舍內(nèi)病原微生物得到全面凈化。全面執(zhí)行績(jī)效考核制度，所有員工工資與生產(chǎn)成績(jī)掛鉤，加強(qiáng)員工責(zé)任心和主人翁精神，提升員工工作的主觀能動(dòng)性；對(duì)員工實(shí)行末尾淘汰制，營(yíng)造認(rèn)真負(fù)責(zé)的工作氛圍。

3.5 執(zhí)行嚴(yán)格的生物安全措施

加強(qiáng)員工滑液囊支原體病防控知識(shí)培訓(xùn)，強(qiáng)化員工防疫意識(shí)。對(duì)雞場(chǎng)實(shí)行封閉式管理，嚴(yán)格按照雞場(chǎng)防疫要求對(duì)進(jìn)出的人員、車輛、物品等進(jìn)行徹底消毒。進(jìn)出門(mén)口消毒池、洗手盆等長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)使用的消毒藥必須定期更換，防止使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)分解失效。選擇刺激性小的消毒劑2～3種（如戊二醛、百毒殺等），現(xiàn)配現(xiàn)用，采取輪流交替的方式進(jìn)行帶雞消毒。加強(qiáng)雞場(chǎng)內(nèi)外道路、生活區(qū)、生產(chǎn)區(qū)消毒，消毒工作責(zé)任到人，并加強(qiáng)監(jiān)管。按照雞場(chǎng)具體生產(chǎn)情況，制定適合雞場(chǎng)自身的防疫激勵(lì)制度，人人擔(dān)責(zé)、人人都是防疫主體，減少雞滑液囊支原體的傳入風(fēng)險(xiǎn)。

4 小結(jié)

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，不同區(qū)縣、不同品種、不同用途和不同日齡的雞群均存在不同程度的滑液囊支原體感染。畜牧主管部門(mén)應(yīng)高度重視，開(kāi)展更廣泛的血清學(xué)檢測(cè)，進(jìn)一步摸清本區(qū)域滑液囊支原體感染的真實(shí)狀況，同時(shí)積極配合養(yǎng)雞場(chǎng)從業(yè)人員采取注意引種、疫苗免疫、藥物預(yù)防、實(shí)行精細(xì)化管理和執(zhí)行嚴(yán)格的生物安全措施等綜合防控技術(shù)才能切斷其傳播鏈，保護(hù)易感雞群，降低滑液囊支原體病的感染率，才能更好地促進(jìn)益陽(yáng)地區(qū)養(yǎng)雞產(chǎn)業(yè)持續(xù)健康穩(wěn)定發(fā)展。