基于腸道菌群和短鏈脂肪酸代謝探討甘草制遠志降低腸道炎癥的作用機制

王梓宇，張智慧，吳 鵬，李浩然，趙 夢，何夢嬌，張學蘭，趙 鑫

基于腸道菌群和短鏈脂肪酸代謝探討甘草制遠志降低腸道炎癥的作用機制

王梓宇，張智慧，吳 鵬，李浩然，趙 夢，何夢嬌，張學蘭*，趙 鑫*

山東中醫藥大學藥學院，山東 濟南 250355

研究遠志甘草制前后對正常大鼠腸道菌群和短鏈脂肪酸（short-chain fatty acids，SCFAs）代謝的影響，探討甘草制遠志降低腸道炎癥的機制。SD大鼠連續15 d ig遠志或制遠志后，ELISA法檢測十二指腸組織中炎癥因子白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、IL-8和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平；蘇木素-伊紅（HE）染色觀察腸組織病理變化；采用16S rDNA測序技術檢測大鼠腸道菌群結構變化；運用氣相色譜法測定大鼠糞便中乙酸、丙酸、丁酸、戊酸含量。甘草制遠志可顯著降低遠志引起的大鼠十二指腸組織中IL-6、IL-8、TNF-α水平升高和腸道炎癥損傷（＜0.05、0.01）。16S rDNA測序結果顯示，甘草制遠志后可改善遠志引起的大鼠腸道菌群結構改變和物種多樣性減少，在門水平上主要表現為厚壁菌門（Firmicutes）和疣微菌門（Verrucomicrobia）相對豐度回升（＜0.05、0.01），擬桿菌門（Bacteroidetes）、變形菌門（Proteobacteria）和放線菌門（Actinobacteriota）相對豐度下調（＜0.05、0.01）；在屬水平上，遠志甘草制后可上調有益菌乳酸桿菌屬、毛螺菌屬、顫螺旋菌屬等菌屬的豐度（＜0.05、0.01），下調潛在的致病菌擬桿菌屬、梭狀芽孢桿菌屬等菌屬的豐度。甘草制遠志可一定程度逆轉遠志引起的大鼠糞便中乙酸、丙酸、丁酸、戊酸含量降低（＜0.05、0.01）。遠志引起的腸道炎癥可能與其引起腸道菌群和SCFAs紊亂有關，甘草制遠志可通過改善腸道菌群和SCFAs代謝來降低腸道炎癥反應。

遠志；甘草制；腸道炎癥；腸道菌群；短鏈脂肪酸；遠志𠮿酮III；3,6′-二芥子酰基蔗糖

遠志為臨床常用中藥，具有安神益智、交通心腎、祛痰、消腫的功效[1]。遠志生用具有刺激咽喉、令人嘔吐的不良反應，大劑量服用會產生胃腸毒性，抑制實驗動物的胃腸運動，造成胃腸黏膜損傷[2]。甘草制遠志可緩和燥性，消除麻味，免刺咽喉，并可增強遠志安神益智作用，故遠志臨床應用時一般需要炮制后入藥[3]。研究表明，遠志經甘草制后皂苷、糖酯和有機酸類成分含量發生明顯變化，并可緩解遠志引起的腸道炎癥和腸黏膜損傷[4-6]。但甘草制遠志減輕腸道炎癥的機制尚未闡明。

腸道菌群為在腸道中定植的細菌組成的生態系統，具有促進免疫系統發育、拮抗外來致病菌定植的作用[7]。腸道微生物群改變會使黏膜免疫反應失調，導致宿主發生腸道炎癥。調節腸道菌群平衡可以恢復免疫系統的穩態，從而改善腸道炎癥[8]。短鏈脂肪酸（short-chain fatty acids，SCFAs）是腸道菌群主要代謝產物，包括乙酸、丙酸、丁酸、戊酸等，其在大鼠糞便中含量高低可間接反映腸道內微生物變化，并對人體健康起著重要作用[9]。SCFAs可調節宿主能量代謝和能量供應，具有抑制病原菌、維持腸屏障功能及抗炎作用[10]。目前遠志炮制前后對正常大鼠腸道菌群及SCFAs代謝的影響未見報道。本研究從甘草制遠志調節腸道菌群和糞便中SCFAs代謝角度探討遠志甘草制減輕腸道炎癥的機制，進一步豐富遠志炮制減毒的科學內涵，為遠志的臨床應用提供科學依據。

1 材料

1.1 動物

SPF級雄性SD大鼠，體質量（200±20）g，購自濟南朋悅實驗動物繁育有限公司，動物合格證號SCXK（魯）20190003。動物于溫度（23±1）℃、相對濕度（60±5）%、自然晝夜節律光照環境，適應性飼養7 d。動物實驗經山東中醫藥大學實驗動物倫理委員會批準（批準號SDUTCM20220525002）。

1.2 藥材

遠志購自山東百味堂中藥飲片有限公司，經山東中醫藥大學藥學院徐凌川教授鑒定為遠志科植物遠志Willd.的干燥根。

制遠志按《中國藥典》2020年版一部炮制方法制備[1]：取凈遠志段1 kg，置鍋內，加甘草汁和適量水，煮至湯液吸盡，口嘗無刺喉感，取出，干燥。每1千克遠志用甘草60 g。

1.3 藥品與試劑

白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、IL-8、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）ELISA試劑盒（批號分別為190729KE1、190729KE2、190729KE3）均購自江蘇晶美生物科技有限公司；Qiagen凝膠提取試劑盒購自德國Qiagen公司；Phusion?型高保真PCR預混液購自美國New England Biolabs公司；Universal DNA純化回收試劑盒購自中國天根生化科技有限公司；NEBNext?Ul tra?Ⅱ DNA Library PrepKit建庫試劑盒購自美國Illumina公司；對照品乙酸、丙酸、丁酸、戊酸（批號分別為CHB180927、CHB180603、CHB180606、CHB180126，質量分數均≥98%）購自成都克洛瑪生物科技有限公司。

1.4 儀器

352型酶標儀（長沙平凡儀器儀表有限公司）；Qubit 2.0熒光計、Ec250-90型電泳儀（美國Thermo Fisher Scientific公司）；Gene-Amp?9700型PCR擴增儀（美國ABI公司）；NEBNext?Ultra? II DNA Library PrepKit型Illumina NovaSeq平臺、Illumina Novaseq型測序儀（美國Illumina公司）；Tanon 1600型凝膠成像系統（上海天能科技有限公司）；H3-18KR型臺式高速冷凍離心機（湖南可成儀器設備有限公司）；FA1604N型電子天平（上海精密科學儀器有限公司）；Agilent 6890型氣相色譜儀（美國Agilent公司）。

2 方法

2.1 遠志與制遠志提取物的制備及其主要成分定量分析

取遠志和制遠志粉末（過2號篩）各1 kg，分別加10、8、8倍量的70%乙醇超聲提取3次，每次超聲1 h，抽濾，濾液合并，減壓濃縮至一定體積，冷凍干燥。按照課題組前期建立的方法[6]，采用HPLC法對遠志與制遠志提取物中主要成分進行定量分析。

2.2 分組與給藥

SD大鼠適應性喂養7 d后隨機分為空白組及遠志低、高劑量（4、8 g/kg）組和制遠志低、高劑量（4、8 g/kg，以生藥量計）組，每組6只。取凍干粉適量，臨用前用蒸餾水配成折合生藥量1.00 g/mL的藥液。各給藥組ig相應藥物，1次/d，連續15 d，空白組ig等體積的生理鹽水。

2.3 大鼠十二指腸組織中炎癥因子IL-6、IL-8和TNF-α水平的測定

給藥結束后，取大鼠十二指腸組織，剪碎，稱定，加磷酸緩沖鹽溶液勻漿（組織∶溶液＝1 g∶9 mL），將勻漿器下端插入冰水中上下研磨6～8 min，4 ℃、3000 r/min離心15 min，取上清液，按照試劑盒說明書檢測IL-6、IL-8和TNF-α水平。

2.4 大鼠小腸組織病理學檢查

將各組大鼠相同部位小腸組織用4%多聚甲醛固定48 h，進行石蠟包埋、切片，蘇木素-伊紅（HE）染色后置于顯微鏡下進行組織病理學觀察并拍照。

2.5 大鼠腸道菌群16S rDNA基因測序與分析

末次給藥后，按摩大鼠腹部促其排便，將糞便裝入無菌凍存管中，液氮速凍后放置?80 ℃冰箱保存。采用十六烷基三甲基溴化銨法提取各組大鼠糞便樣品總DNA，2%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的提取純度和濃度。采用特異性引物515F（5’-ACTCCTACGGGAG-3’）、806R（5’-GCAGCAGT- CTAAT-3’）通過PCR擴增樣品的V3～V4區域。根據PCR產物濃度進行等量混樣，充分混勻后使用2%瓊脂糖凝膠電泳驗證，Universal DNA純化試劑盒對目的條帶進行回收。使用 NEBNext?Ultra? II DNA Library PrepKit制備文庫，Qubit進行文庫定量，使用Illumina Novaseq高通量測序平臺測定腸道微生物群。對所有樣本有效Tags以97%的一致性進行操作分類單元（operational taxonomic units，OTU）聚類。對以上得到的有效數據使用QIIME2軟件中的DADA2模塊進行降噪，并過濾豐度小于5的序列，從而獲得最終的ASVs（擴增子序列變異）以及特征表（序列在樣本中的豐度表）。使用QIIME2軟件中的classify-sklearn模塊將得到的ASVs與數據庫比對從而得到每個ASV的物種信息。根據OTU分類對腸道微生物的物種多樣性及物種差異進行分析。

2.6 大鼠糞便中SCFAs含量測定

參照蔣愷憧等[11]建立的檢測方法，分別精密稱取乙酸、丙酸、丁酸和戊酸對照品適量，以乙醚配制成質量濃度均為1 mg/mL的對照品溶液，再稀釋成不同質量濃度的混合對照品溶液，繪制標準曲線。取大鼠糞便約0.2 g，加2 mL超純水混勻，4 ℃、10 000 r/min離心10 min，取上清液1 mL，加入50%硫酸200 μL、無水乙醚2 mL，混勻，4 ℃、10 000 r/min離心30 min，取醚層進氣相色譜檢測。

2.7 統計學分析

3 結果

3.1 遠志甘草制前后主要成分定量分析

如表1所示，遠志經過甘草制后，球腺糖A和3,4,5-三甲氧基肉桂酸含量增加，而西伯利亞遠志糖A5、西伯利亞遠志糖A6、遠志𠮿酮III、遠志蔗糖酯B、3,6′-二芥子酰基蔗糖、黃花遠志素A、遠志蔗糖酯A、遠志蔗糖酯C、遠志寡精H、遠志寡精A、遠志皂苷B含量降低。

3.2 遠志甘草制前后對大鼠十二指腸組織中炎癥因子IL-6、IL-8和TNF-α水平的影響

如圖1所示，與空白組比較，遠志低、高劑量組和制遠志高劑量組大鼠十二指腸組織中炎癥因子IL-6、IL-8和TNF-α水平均顯著增加（＜0.05、0.01），而制遠志低劑量組大鼠十二指腸組織中各炎癥因子水平無明顯變化。與等劑量遠志組比較，制遠志組大鼠十二指腸組織中炎癥因子水平均顯著降低（＜0.05、0.01）。表明遠志經甘草制后可減輕大鼠腸道炎癥反應。

表1 遠志甘草制前后主要成分含量

Table 1 Contents of main components in Polygalae Radix before and after licorice processing

成分質量分數/% 遠志制遠志 西伯利亞遠志糖A50.432 0.393 西伯利亞遠志糖A60.307 0.278 遠志𠮿酮III0.782 0.718 球腺糖A0.253 0.332 遠志蔗糖酯B0.276 0.239 3,6′-二芥子酰基蔗糖1.7041.426 黃花遠志素A0.1100.094 遠志蔗糖酯A0.8900.731 遠志蔗糖酯C0.4120.370 3,4,5-三甲氧基肉桂酸0.1760.313 遠志寡精H0.2930.214 遠志寡精A0.5670.534 遠志皂苷B4.9293.943

與空白組比較：*P＜0.05 **P＜0.01；與等劑量遠志組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01，圖5、6同

3.3 遠志甘草制前后對大鼠小腸組織病理特征的影響

如圖2所示，空白組大鼠小腸腸壁完整且平坦，各層結構比較清晰，小腸黏膜絨毛內未見糜爛及潰瘍，炎細胞較少，絨毛內血管略有充血，黏膜下及肌層未見明顯異常；遠志低、高劑量組未見完整絨毛結構，部分切片有淋巴組織增生現象，小腸黏膜絨毛內可見大量炎細胞浸潤，絨毛黏膜上皮脫落、壞死，黏膜下及肌層未見炎細胞浸潤，并見血管擴張充血；制遠志低劑量組可見完整絨毛結構，小腸黏膜絨毛內僅有微量炎細胞浸潤，血管擴張不明顯，黏膜下及肌層未見炎細胞浸潤；制遠志高劑量組可見完整絨毛結構，小腸黏膜絨毛內有少量炎細胞浸潤，血管擴張不明顯，黏膜下及肌層未見炎細胞浸潤。表明遠志經甘草制后可減輕大鼠小腸組織的黏膜損傷和炎癥反應。

3.4 遠志甘草制前后對大鼠腸道菌群的影響

3.4.1 對大鼠腸道菌群α多樣性的影響 如表2所示，各組Coverage值均大于0.9，表明序列測序覆蓋良好。與空白組比較，各給藥組的Chao1、Ace、Shannon、Simpson指數均顯著降低（＜0.05、0.01）；與等劑量遠志組比較，制遠志組Chao1、Ace、Shannon、Simpson指數均顯著升高（＜0.05、0.01）。表明遠志經甘草制后能有效改善遠志所致大鼠腸道菌群物種多樣性減少現象。

圖2 遠志甘草制前后對大鼠小腸組織病理特征的影響(HE, ×100)

表2 遠志甘草制前后對大鼠腸道菌群α多樣性的影響(, n = 6)

與空白組比較：P＜0.05P＜0.01；與等劑量遠志組比較：P＜0.05P＜0.01

P< 0.05P< 0.01blank group;P< 0.05P< 0.01group with same dose

3.4.2 對大鼠腸道菌群β多樣性的影響 采用主成分分析（principal component analysis，PCA）比較不同樣本間的群落組成差異。提取各樣品的16S rDNA序列的主成分因子，繪制PCA圖（圖3）。結果顯示，與空白組的距離，制遠志低劑量組最近，其次是制遠志高劑量組，遠志低、高劑量組與空白組的距離較遠。說明遠志顯著改變了大鼠腸道微生物群落結構，遠志經甘草制后可改善這一變化。

3.4.3 基于門水平的菌群結構差異分析 如圖4-A所示，在門水平上，各組大鼠腸道菌群主要包括厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門（Bacteroides）、變形菌門（Proteobacteria）、疣微菌門（Verrucomicrobia）和放線菌門（Actinobacteriota），其中，以厚壁菌門豐度最高，其次是擬桿菌門。如圖5-A所示，與空白組比較，遠志低、高劑量組厚壁菌門和疣微菌門豐度顯著降低（＜0.05、0.01），擬桿菌門、變形菌門、放線菌門的豐度顯著增加（＜0.050.01）；與等劑量遠志組比較，制遠志組厚壁菌門和疣微菌門豐度顯著增加（＜0.05、0.01），擬桿菌門、變形菌門和放線菌門豐度顯著降低（＜0.05、0.01），制遠志低劑量組腸道菌群組成與空白組更相似。說明遠志在門水平上可導致大鼠腸道菌群紊亂，而甘草制可一定程度地調節這一紊亂。

圖3 遠志甘草制前后對大鼠腸道菌群β多樣性的影響

3.4.4 基于屬水平的菌群結構差異分析 如圖4-B所示，各樣品組中相對豐度較高的菌屬為擬桿菌屬、乳酸桿菌屬、毛螺菌屬、毛螺菌屬-NK4A136、梭狀芽孢桿菌屬、普雷沃氏菌屬-UCG-001、雷爾氏菌屬和顫螺旋菌屬。如圖5-B所示，與空白組比較，遠志低、高劑量組擬桿菌屬、-NK4A136和梭狀芽孢桿菌屬顯著增加（＜0.05、0.01），乳酸桿菌屬顯著減少（＜0.05、0.01），遠志高劑量組毛螺菌屬、-UCG-001和顫螺旋菌屬顯著減少（＜0.01）。與等劑量遠志組相比，制遠志組乳酸桿菌屬、毛螺菌屬、顫螺旋菌屬的豐度顯著增加（＜0.05、0.01），擬桿菌屬、梭狀芽孢桿菌屬呈降低趨勢。說明遠志甘草制后可上調有益菌乳酸桿菌屬、毛螺菌屬、顫螺旋菌屬的豐度，下調潛在的致病菌擬桿菌屬、梭狀芽孢桿菌屬的豐度。

圖4 腸道菌群分類門水平 (A)和屬水平 (B)的物種組成分析

圖5 腸道菌群分類門水平 (A)和屬水平 (B)的物種組成差異分析(, n = 6)

3.5 遠志甘草制前后對大鼠糞便中SCFAs水平的影響

如圖6所示，與空白組比較，遠志低、高劑量組大鼠糞便中乙酸、丙酸、丁酸和戊酸含量均顯著降低（＜0.05、0.01）；與等劑量遠志組比較，遠志經甘草制后，乙酸、丙酸、丁酸和戊酸含量明顯回升（＜0.05、0.01）。說明遠志可引起大鼠糞便中SCFAs水平紊亂，而甘草制可改善這一紊亂。

圖6 遠志甘草制前后對大鼠糞便中SCFAs水平的影響(, n = 6)

4 討論

以往對遠志炮制減毒研究主要聚焦在遠志炮制前后成分、急性毒性和胃腸毒性變化方面，忽略了其對腸道菌群和SCFAs的影響。研究表明，腸道菌群失調，可誘導腸道免疫反應，損傷腸道黏膜屏障能力，進而導致腸道炎癥[12]。SCFAs可抑制腸道內致病菌定植，維持腸上皮細胞形態、功能及腸道黏膜的完整性，并可調節機體的免疫炎癥反應[13]。本研究表明，遠志能夠導致大鼠腸道黏膜損傷和腸道炎癥，顯著升高大鼠十二指腸組織中炎癥因子水平，甘草制遠志可改善遠志導致的腸道炎癥和腸道黏膜損傷。

腸道菌群紊亂常表現為菌群多樣性的降低和結構組成的變化[14]。本研究結果表明，遠志可導致大鼠腸道菌群豐富度和多樣性減少，并可引起腸道菌群結構發生明顯變化，而甘草制遠志可不同程度改善遠志導致的上述變化。遠志可降低大鼠腸道中厚壁菌門和疣微菌門豐度，增加擬桿菌門、放線菌門、變形菌門豐度，可使正常大鼠腸道中有益菌乳酸桿菌屬、毛螺菌屬、顫螺旋菌屬豐度顯著降低，而潛在的致病菌擬桿菌屬、梭狀芽孢桿菌屬豐度顯著增加；遠志經甘草制后可在一定程度上調節遠志引起的上述腸道菌群門、屬豐度變化，其調控結果與空白組更為接近。研究發現，厚壁菌門有眾多有益菌，其中，乳酸桿菌有助于維護腸道微生態穩定，但當發生病毒感染和炎癥反應時，腸道乳酸桿菌易受影響導致豐度下降[15]。變形菌門豐度提高會破壞腸道菌群穩態，加劇腸道疾病進展[16]。梭狀芽孢桿菌屬與腸道炎癥疾病的發生密切相關[17]。而乳酸桿菌屬作為腸道中重要的益生菌，在調節腸道菌群平衡方面發揮著重要的作用[18]。遠志導致腸道內有益菌與致病菌比例失調，打破腸道內環境的平衡，引起腸道菌群紊亂。而遠志經甘草汁煮制后可通過上調有益菌豐度并減少致病菌數量，改善菌群結構，從而維持腸道菌群平衡。遠志甘草制后緩解腸道炎癥分析與甘草制可調節腸道菌群紊亂有關。

厚壁菌門是腸道菌群中產生SCFAs的優勢菌種，其下的梭菌科是產生丁酸的主要菌種[19]。SCFAs可調節腸道內環境平衡，減少炎癥反應的發生[20]。SCFAs可緩解結腸炎癥和氧化應激反應，為結腸上皮細胞提供充足的能量，加快細胞增殖，從而增強腸道的免疫屏障[21]。丙酸能夠減少促炎因子的表達，有利于修復黏膜炎癥，還可提高腸上皮細胞閉鎖連接蛋白-1表達水平，從而提高腸道黏膜的屏障功能[22]。本研究結果表明，正常大鼠ig遠志提取物后，其糞便中乙酸、丙酸、丁酸和戊酸水平顯著降低，而制遠志提取物大鼠糞便中乙酸、丙酸、丁酸和戊酸水平較遠志明顯回升，其原因分析與甘草制遠志可調節腸道菌群有關。遠志甘草制后降低腸道炎癥與甘草制可調節腸道SCFAs代謝紊亂有關。

課題組前期研究表明，遠志經甘草炆制后遠志皂苷B含量顯著降低，并增加新成分甘草苷、甘草酸[23]。甘草中主要成分甘草苷和甘草酸具有抗炎作用[24]。另有研究報道，皂苷類成分為遠志的主要毒性成分，遠志總皂苷、遠志皂苷B均可顯著增加兔離體腸管的收縮幅度，遠志皂苷B對大鼠胃腸道刺激和損傷作用明顯大于細葉遠志皂苷[25]。本研究結果表明，遠志引起的腸道炎癥可能與其引起腸道菌群和SCFAs紊亂有關，甘草制遠志可通過改善腸道菌群和SCFAs代謝來降低腸道炎癥反應。據本研究結果結合文獻報道，推測遠志甘草制后腸毒性降低可能與皂苷含量降低和輔料甘草的添加有關，有待深入研究。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 中國藥典 [S]. 一部. 2020: 163.

[2] 王瑞, 吳桐, 劉悅, 等. 遠志和蜜遠志對小鼠胃腸的急性毒性作用 [J]. 中國中醫藥現代遠程教育, 2018, 16(8): 88-90.

[3] 李振嵐, 吳紅旗. 遠志炮制減毒增效作用的研究進展 [J]. 實用臨床醫藥雜志, 2023, 27(8): 135-138.

[4] 高慧, 熊曉莉, 張青, 等. 基于UPLC-LTQ-Orbitrap MS技術分析遠志炮制前后成分變化 [J]. 中藥新藥與臨床藥理, 2021, 32(12): 1845-1854.

[5] 欒茹喬, 張學蘭, 吳鵬, 等. HPLC法測定遠志及其3種炮制品中3種寡糖酯 [J]. 中成藥, 2017, 39(8): 1666-1669.

[6] Cui Y L, Zhao X, Tang Y Q,. Comparative study on the chemical components and gastrointestinal function on rats of the raw product and licorice-simmered product of[J]., 2021, 2021: 8855536.

[7] Zhou B L, Yuan Y T, Zhang S S,. Intestinal flora and disease mutually shape the regional immune system in the intestinal tract [J]., 2020, 11: 575.

[8] Amoroso C, Perillo F, Strati F,. The role of gut microbiota biomodulators on mucosal immunity and intestinal inflammation [J]., 2020, 9(5): 1234.

[9] Liu P Y, Wang Y B, Yang G,. The role of short-chain fatty acids in intestinal barrier function, inflammation, oxidative stress, and colonic carcinogenesis [J]., 2021, 165: 105420.

[10] Parada Venegas D, De la Fuente M K, Landskron G,. Short chain fatty acids (SCFAs)-mediated gut epithelial and immune regulation and its relevance for inflammatory bowel diseases [J]., 2019, 10: 277.

[11] 蔣愷憧, 程悅, 焦圣寅, 等. 糞便中6種短鏈脂肪酸的氣相色譜快速檢測法 [J]. 現代預防醫學, 2020, 47(4): 686-689.

[12] 金博. 腸道菌群移植與潰瘍性結腸炎 [J]. 世界華人消化雜志, 2017, 25(1): 23-30.

[13] 王程瑤, 張政, 吳靜. 腸道短鏈脂肪酸在炎癥性腸病中的研究進展 [J]. 中國醫刊, 2022, 57(12): 1302-1307.

[14] 陳啟軍, 于嵐, 趙文文, 等. 遠志提取物對抑郁大鼠腸道菌群的作用研究[J]. 中草藥, 2021, 52(8): 2313-2323.

[15] Wang Y, Wu Y P, Wang Y Y,. Antioxidant properties of probiotic bacteria [J]., 2017, 9(5): 521.

[16] Litvak Y, Byndloss M X, Tsolis R M,. Dysbiotic proteobacteria expansion: A microbial signature of epithelial dysfunction [J]., 2017, 39: 1-6.

[17] 鄭東宇, 周翌婧, 晏路標, 等. 梭狀芽孢桿菌屬致新生兒壞死性小腸結腸炎關聯性分析 [J]. 公共衛生與預防醫學, 2021, 32(2): 7-11.

[18] 黃小娟. 乳酸桿菌聯合甲硝唑治療妊娠合并滴蟲性陰道炎的臨床療效 [J]. 中國醫藥指南, 2022, 20(19): 43-46.

[19] Louis P, Hold G L, Flint H J. The gut microbiota, bacterial metabolites and colorectal cancer [J]., 2014, 12(10): 661-672.

[20] Thorburn A N, Macia L, MacKay C R. Diet, metabolites, and “western-lifestyle” inflammatory diseases [J]., 2014, 40(6): 833-842.

[21] Furusawa Y, Obata Y, Fukuda S,. Commensal microbe-derived butyrate induces the differentiation of colonic regulatory T cells [J]., 2013, 504(7480): 446-450.

[22] Tong L C, Wang Y, Wang Z B,. Propionate ameliorates dextran sodium sulfate-induced colitis by improving intestinal barrier function and reducing inflammation and oxidative stress [J]., 2016, 7: 253.

[23] 崔月莉, 吳鵬, 張丹捷, 等. 遠志與炆遠志HPLC指紋圖譜比較 [J]. 中藥材, 2020, 43(3): 575-581.

[24] Zheng Z, Xu Y, Liu F,. Screening bioactive components ofFisch. with isolated perfused lung extraction and HPLC-ESI-MSnanalysis [J]., 2019, 169: 127-132.

[25] Wen L, Xia N, Tang P P,. The gastrointestinal irritation of polygala saponins and its potential mechanismand[J]., 2015, 2015: 918048.

Mechanism of licorice-boiledon reducing intestinal inflammation based on intestinal flora and short-chain fatty acid metabolism

WANG Zi-yu, ZHANG Zhi-hui, WU Peng, LI Hao-ran, ZHAO Meng, HE Meng-jiao, ZHANG Xue-lan, ZHAO Xin

College of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China

To study the effects of Yuanzhi () on intestinal flora and metabolism of short chain fatty acids (SCFAs) in normal rats before and after licorice processing, and explore the mechanism of licorice-boiledon reducing intestinal inflammation.SD rats were igor licorice-boiledfor 15 d, levels of inflammatory factors such as interleukin-6 (IL-6), IL-8 and tumor necrosis factor-α (TNF-α) in duodenal tissue were detected by ELISA; Pathological changes of intestinal tissue were observed by hematoxylin-eosin staining; 16S rDNA sequencing technique was used to detect the structural changes of intestinal flora in rats; Contents of acetic acid, propionic acid, butyric acid and valeric acid in feces of rats were determined by gas chromatography (GC).Licorice-boiledsignificantly reduced the levels of IL-6, IL-8 and TNF-α in duodenal tissue and intestinal inflammatory damage caused by(< 0.05, 0.01).The results of 16S rDNA sequencing showed that licorice-boiledcould improve the structural changes of intestinal flora and decrease the species diversity caused byin rats. At the phylum level, the relative abundance of Firmicutes and Verrucomicrobia were increased (< 0.05, 0.01), while the relative abundance of Bacteroidetes, Proteobacteria and Actinobacteriota were decreased (< 0.05, 0.01). At the genus level, the abundance of beneficial bacteria such as,andwere increased (< 0.05, 0.01), and the abundance of potential pathogenic bacteria such asandwere decreased after licorice-boiling. Licorice-boiledcould reverse the decrease of acetic acid, propionate, butyric acid and valerate in rat feces caused byto a certain extent (< 0.05, 0.01).The intestinal inflammation caused bymay be related to the disorder of intestinal flora and SCFAs. Licorice-boiledcan reduce the intestinal inflammatory reaction by improving the metabolism of intestinal flora and SCFAs.

; licorice-boiled; intestinal inflammation; intestinal flora; short chain fatty acids; polygalaxanthone III; 3,6′-disinapoyl sucrose

R285.5

A

0253 - 2670(2023)14 - 4556 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.14.016

2023-02-27

國家自然科學基金面上項目（82173974）；國家中醫藥管理局中藥炮制技術傳承地項目（國中醫藥科技中藥[2022]59號）；國家重點研發計劃課題（2018YFC1707204）

王梓宇（1997—），女，碩士研究生，研究方向為中藥炮制原理與飲片質量控制。E-mail: wangziyu5899@163.com

張學蘭（1963—），女，博士生導師，教授，主要從事中藥炮制原理與飲片質量控制研究。E-mail: zhang8832440@sina.com

趙 鑫（1991—），女，講師，主要從事中藥飲片制備技術與質量控制研究。E-mail: 137462537@qq.com

[責任編輯 李亞楠]