新生SD 大鼠原代海馬組織中神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)和鑒定

張玲娣, 趙 亮, 由 涌, 許 倩, 楊振軍

（1.承德醫(yī)學院人體解剖教研室，河北 承德 067000；2.承德醫(yī)學院藥理學教研室，河北 承德 067000；3.承德醫(yī)學院免疫學教研室，河北 承德 067000；4.承德醫(yī)學院基礎醫(yī)學研究所，河北 承德 067000）

神經(jīng)干細胞（neural stem cells，NSCs）存在于神經(jīng)系統(tǒng)中，其能夠進行自我更新，具有分化為神經(jīng)元、星形膠質細胞和少突膠質細胞潛能的原始未分化細胞的能力［1-2］。NSCs 不僅可以通過分化為神經(jīng)元進行神經(jīng)替代，還具有增加內源性神經(jīng)營養(yǎng)因子釋放、促進血管生成和突觸重建及抑制免疫炎癥等作用［3-7］。因此，NSCs 已經(jīng)成為神經(jīng)科學領域研究的熱點。

研究［8-11］發(fā)現(xiàn)：哺乳動物胚胎時期在大腦皮質、嗅球、紋狀體和海馬區(qū)等不同腦區(qū)均存在NSCs。成年哺乳動物腦組織中NSCs 存在于側腦室的腦室下區(qū)及海馬區(qū)的齒狀回顆粒下層［12-13］。本研究對既往方法［14-16］進行改良，體外分離培養(yǎng)新生SD 大鼠海馬組織中NSCs，鑒定NSCs 純度并觀察培養(yǎng)過程中NSCs 形態(tài)表現(xiàn)和生長規(guī)律變化，為原代海馬組織中NSCs 提取及培養(yǎng)提供參考，并為相關實驗提供可靠細胞來源。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、主要試劑和儀器新生24 h 內SD大鼠由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，動物生產(chǎn)許可證編號：SCXK （京）2019-0008。DMEM/F12 基礎培養(yǎng)基、B-27、L-谷氨酰胺（L-glutamine）、表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）和堿性成纖維細胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）購自美國Thermo Fisher 公司，青-鏈霉素混合液和細胞增殖與活性檢測試劑盒購自上海索寶生物科技有限公司，Nestin多克隆一抗、AF-488 標記的羊抗兔二抗、流式抗體標記液和抗體封閉液購自北京博奧森生物技術有限公司，EdU-555 細胞增殖檢測試劑盒和DAPI 染色液購自上海碧云天生物技術有限公司。……