PAX3 基因沉默對P19 細胞向心肌樣細胞分化的影響及其機制

萬朝輝, 曾 良, 李 晶, 雷長城

（1.南華大學衡陽醫學院附屬第二醫院急診科，湖南 衡陽 421001；2.南華大學衡陽醫學院附屬第三醫院急診科，湖南 衡陽 421900；3.南華大學衡陽醫學院附屬第二醫院心血管內科，湖南 衡陽 421001）

先天性心臟病 （congenital heart disease，CHD）是最常見的出生缺陷之一，在我國每年有十幾萬CHD 患兒出生，其嚴重威脅新生兒健康，給患兒家庭和社會帶來沉重負擔［1-3］。心臟發育是一個復雜的過程且容易受到干擾，涉及多種信號的精確調控［4-5］。Notch 信號在哺乳動物心臟發育過程中發揮重要作用，參與房室管、主動脈瓣、心室和心臟流出道的發育，Notch 信號突變與多種類型CHD 有關［6-8］。配對盒因子（paired box，PAX）家族是一個高度保守的轉錄基因家族，普遍存在于多種生物體中［9］。PAX3 作為其中一員，是人體重要的轉錄調節因子，對于組織和器官的發育和分化均具有重要的調節作用。PAX3 促進胚胎發育和神經嵴（neural crest，NC）形成，胚胎時期NC 細胞活動與心臟的發育有密切關聯，NC 細胞是促進心臟流出道分隔發育完善的關鍵，提示PAX3 可能是維持心臟正常發育的重要轉錄因子［10-11］。然而，PAX3 是否通過Notch 信號調控心臟發育有待進一步研究。本研究選用P19 細胞，通過體外實驗探討PAX3 對P19 細胞向心肌樣細胞分化的影響，闡明其可能作用機制，為CHD 的防治提供依據。

1 材料與方法

1.1 細胞、主要試劑和儀器P19 細胞購自美國菌種保藏中心（American Type Culture Collection，ATCC）。α-MEM 培養基和胎牛血清購自美國Invitrogen 公司，二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）和嘌呤霉素和4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（4′，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）購自美國Sigma 公司，反轉錄試劑盒和實時熒光定量……