羥基脲聯合輻射對沉默ATRX 后細胞周期及凋亡的影響

田宏遠, 尹彩云, 王 麗, 胡沛蕓, 張晨陽, 李秋月, 鄭清照, 齊亞莉, 方 芳, 王志成

（1.吉林大學公共衛生學院 國家衛健委放射生物學重點實驗室，吉林 長春 130021；2.吉林醫藥學院公共衛生學院流行病學教研室，吉林 吉林 132013）

羥基脲（hydroxyurea，HU）是一種結構簡單的化學合成物，對核糖核苷酸還原酶（ribonucleotide reductase，RNR）起抑制作用［1］。RNR 參與DNA 復制和修復的重要環節，核糖核苷酸在RNR 作用下脫氧被還原為DNA 合成過程中所需要的原料［2］。研究［3］發現：HU 誘導骨肉瘤U2OS 細胞凋亡。HU 上調凋亡相關基因和蛋白表達誘發細胞的氧化應激，并在小鼠卵母細胞成熟期間導致細胞凋亡［4］。研究［5-7］報道：α-地中海貧血/精神發育遲滯綜合征 X 染色體相關蛋白（α-thalassemia/mental retardation syndrome nondeletion type X-chromosome associated protein，ATRX）是重要的DNA 損傷修復和染色質重塑蛋白。本課題組前期研究［8］結果顯示：沉默ATRX可以增強輻射誘導HeLa 細胞的凋亡，可以作為腫瘤輻射增敏的潛在靶點。因此，本研究探討HU 預處理聯合輻射對沉默ATRX 細胞周期及凋亡的影響，并分析相關分子機制，為腫瘤放療增敏提供新的分子靶點和思路。

1 材料與方法

1.1 細胞、主要試劑和儀器靶向沉默ATRX 的慢病毒由吉林大學國家衛健委放射生物學重點實驗室包裝和保存，A549 細胞和HEK293T 細胞（上海生命科學學院細胞研究所）。Annexin Ⅴ-PE/7-ADD 凋亡試劑盒（美國BD 公司），ATRX 一抗和ECL 發光試劑盒（美國Santa Cruz 公司），GAPDH、細胞周期分裂因子25B （cell division cyclin 25B，CDC25B）、細胞周期蛋白（Cyclin）B1和細胞周期蛋白依賴性激酶1 （cyclin dependent kinase 1，CDK1）一抗（美國CST 公司），DMEM培養基（美國Gibco 公司），胎牛血清（江蘇MRC公司），HU（美國Sigma 公司），其他試劑為國產分析純。流式細胞儀（美國BD FACS Aria 公司），X 射線輻照儀（X-RAD320iX，美國Precision X-ray股份有限公司）。……