神經源性絲氨酸蛋白酶抑制劑在自發性腦出血患者中的表達與作用

宮萍 錢希岷 徐黎明 吳衛文△

(復旦大學附屬中山醫院青浦分院,(1.神經內科;(2.檢驗科,上海 201700)

自發性腦出血是一種常見的腦卒中疾病,具有高發病率、高死亡率、高致殘率的特點,給社會和家庭都帶來了沉重的負擔[1]。其中血腦屏障(BBB)損傷是腦出血后水腫形成的重要機制之一,而腦水腫是腦出血患者病情惡化和死亡的重要原因。因此,控制腦水腫、降低顱內壓是腦出血治療的重點之一。神經源性絲氨酸蛋白酶抑制劑(NSP)主要在中樞和外周神經系統的神經元中表達,是一種眾所周知的組織型纖溶酶原激活物(t-PA)抑制劑[2]。研究[3]發現,外源性NSP能夠減少腦缺血后腦血管通透性的增加從而減少BBB損傷。目前關于NSP的神經保護作用已有很多研究,但主要是在缺血性卒中、癲癇等中樞神經系統疾病,在腦出血中的作用研究較少。本研究希望通過測定ICH患者的NSP濃度,探討NSP在ICH患者中的表達及與臨床預后的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年11月至2021年7月我院神經內科住院的自發性腦出血患者65例納入腦出血組。納入標準:診斷為自發性腦出血,參考中國腦出血診治指南(2019)[1];發生腦出血至入院時間<24 h;幕上出血者出血量<30 mL,幕下出血者出血量<10 mL;GCS評分≥5分;同意加入本次研究;簽署知情同意書。排除標準:合并其他急性中樞神經系統疾病;合并惡性腫瘤、嚴重心、肝、腎功能不全及血液系統疾病等;病例資料缺失。選取同期我院醫護人員及來院體檢的社區居民50例納入對照組。入組標準:年齡、性別與腦出血組匹配;既往無中樞神經系統疾病病史;簽署知情同意書。

1.2方法 血清NSP的檢測:腦出血組于入院次日,抽血時間距發病(38.6±10.7)h,對照組體檢當日,均為清晨空腹抽取肘靜脈血3 mL,室溫血液自然凝固10～20 min,離心20 min左右(2 000～3 000 r/min),分離血清后置-20℃冰箱保存,待所有標本收集完成后集中進行檢測。應用雙抗體夾心法測定標本中NSP水平,用純化的NSP捕獲抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被的微孔中依次加入NSP,再與辣根過氧化物(HRP)標記的檢測抗體結合,經過徹底洗滌后加底物四甲基聯苯胺(TMB)顯色,用酶標儀在450 nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中NSP含量。

1.3觀察指標 選擇美國國立衛生研究院卒中量表(NIHSS)評估腦出血患者病情的嚴重程度[4];選擇格拉斯哥昏迷評分(GCS)評估腦出血患者意識狀態,GCS評分<15分為意識障礙[4];選擇改良Rankin量表(mRS)評估腦出血患者神經功能恢復情況[6],將mRS≥2分者作為預后不良組,mRS<2分為預后良好組。

2 結 果

2.1一般資料情況比較 腦出血組共納入病例65例,3例因3月后失訪,最終完成研究62例,其中男38例,女24例;平均年齡(57.51±14.49)歲;有高血壓史48例,糖尿病史11例。對照組納入50例,其中男29例,女21例;平均年齡(60.82±14.18)歲;有高血壓史15例,糖尿病史6例。兩組在性別、年齡、糖尿病史方面對比差異無統計學意義(P>0.05),腦出血組有高血壓史占比高于對照組(P<0.001)。

2.2腦出血組與對照組NSP濃度比較 腦出血組入院次日NSP濃度為(2.57±0.47)ng/mL,對照組NSP濃度為(2.03±0.78)ng/mL。腦出血組NSP濃度明顯高于對照組(P<0.001)。

2.3腦出血組預后不同患者的臨床資料及NSP水平比較 腦出血患者發病3個月后行改良Rankin量表評分,其中預后良好組37例,預后不良組25例。兩組在性別、年齡、高血壓史、糖尿病史、首診舒張壓水平、腦出血部位(基底核區與非基底核區)、腦出血是否破入腦室等方面無統計學差異(P>0.05)。預后良好組在入院時NIHSS評分、是否存在意識障礙、腦出血量、首診收縮壓水平均低于預后不良組(P<0.05),預后良好組NSP濃度高于預后不良組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組預后不同腦出血患者臨床資料及NSP濃度比較

2.4自發性腦出血預后相關因素Logistic回歸分析 對腦出血組患者預后不同兩組有統計學差異的指標進行Logistic回歸分析,結果顯示入院時NIHSS評分、腦出血量是影響自發性腦出血患者預后的獨立因素(P<0.05)。見表2。

表2 影響ICH患者預后的相關因素Logistic回歸分析

3 討 論

NSP是絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族中的一員,主要抑制t-PA、尿激酶型纖溶酶原激活劑和纖維蛋白溶酶活性,對tPA作用最強[7]。體外實驗動物發現腦缺血后腦組織中NSP表達上調,外源性給予NSP可減小缺血梗死灶體積、減少神經細胞凋亡、阻止小膠質細胞激活、降低血腦屏障通透性減輕腦水腫,而細胞凋亡、腦水腫、血腦屏障破壞等在缺血和出血性卒中機制中存在共同之處[8-9]。臨床研究[10-11]表明,急性缺血性卒中患者血清NSP水平在入院時高表達預示較好臨床結局。W.Li等[12]在非t-PA誘導的腦出血小鼠中發現NSP在其腦組織中表達增加,在出血后48 h達高峰,血腫周圍局部注射NSP可減輕腦血腫及血腦屏障通透性,證實NSP在非t-PA誘導的腦出血小鼠中存在神經保護作用,文中推測NSP可能在修復血管內皮中發揮作用,改善腦出血時血腦屏障完整性從而緩解腦水腫。

為研究NSP在臨床腦出血患者中的表達,本研究檢測62例在發病24 h內入院的自發性腦出血患者的血清NSP水平,通過與50例健康體檢者對比,自發性腦出血患者發病后血清NSP水平明顯升高(P<0.05),與W.Li等[12]在腦出血小鼠中觀察的結果一致。進一步研究NSP濃度與ICH患者預后的相關性,對腦出血患者在發病3個月后采用改良Rankin量表評分進行預后評估,其中37例預后良好,25例預后不良,對兩組患者進行臨床相關資料及NSP濃度比較,發現預后良好組在入院時NIHSS評分、發病時存在意識障礙、腦出血量、首診收縮壓水平等方面均較預后不良組低(P<0.05),而NSP濃度預后良好組高于預后不良組(P<0.05),提示NSP可能對腦出血患者預后有保護作用;對兩組間有統計學差異的指標進Logistic回歸分析,結果顯示入院時NIHSS評分、腦出血量是影響自發性腦出血患者預后的獨立因素(P<0.05),NSP濃度暫未得到統計學差異,考慮可能因樣本量過小有一定關系,需進一步增加樣本量明確NSP與腦出血預后的相關性。

綜上所述,本研證實自發性腦出血患者發病后血清NSP水平升高,雖然回歸分析未得到NSP與自發性腦出血患者預后的顯著性關系,但預后良好組NSP水平高于預后不良組,提示可能對預后有一定保護作用,后期可進一步增加樣本量進行分析。NSP在自發性腦出血中的作用可以為腦出血治療提供一種可嘗試的治療思路。