EGFR shRNA聯合雷帕霉素對Colo-16細胞增殖、遷移及侵襲的影響

王 慧 楊 艷 李竹茜 展曉紅 魏志平

1青島市城陽區人民醫院皮膚科,青島,266109;2青島大學附屬醫院病理科,青島,266109;3徐州醫科大學附屬醫院皮膚科,徐州,221002

皮膚鱗狀細胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma, CSCC)是一種以角質形成細胞過度增殖和分化水平的降低為特征的皮膚惡性腫瘤,其發病率僅次于基底細胞癌,惡性程度僅次于黑素瘤[1],目前,CSCC的治療主要有Mohs顯微外科、化療、光動力療法、放療、生物療法和免疫療法[2,3]。大多數皮膚鱗癌可通過手術成功根除,但部分皮膚鱗癌具有較高的侵襲性、轉移率和死亡率[3-6]。 EGFR/PI3K/AKT/mTOR是重要的信號通路之一,與腫瘤細胞的生長、侵襲、轉移密切相關[7-9]。EGFR 及mTOR通路在分子水平存在交叉點,均與CSCC發展密切相關[10,11]。雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)是從吸水性鏈霉菌提取出來的一種新型大環內酯類免疫抑制劑,是mTOR特異性抑制劑[12,13],本研究以人CSCC細胞Colo-16為研究對象,觀察EGFR shRNA聯合RAPA對Colo-16細胞增殖、遷移和侵襲的影響,探討其可能機制,為CSCC的藥物治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 材料 Colo-16細胞株由中國醫學科學院皮膚病研究所提供,胎牛血清來自杭州四季青生物材料有限公司,RPMI 1640培養液來自美國Gibco公司。陰性對照質粒shRNA-NC和EGFR shRNA質粒由上海吉瑪制藥有限公司構建,RAPA來自美國Sigma-Aldrich公司,細胞計數試劑盒(cell counting kit-8,CCK-8)購自上海碧云天生物科技有限公司;Transwell購自美國Costar公司, Lipofectamine2000試劑來自美國Invitrogen公司,細胞增殖核抗原Ki-67(Ki-67)、基質金屬蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9、鼠抗人 β 肌動蛋白一 抗、羊抗鼠二抗、羊抗兔二抗及Western印跡法化學發光工作液均來自美國Santa Cruz公司。

1.2 細胞培養及穩定細胞系構建 復蘇……