EGFR shRNA聯(lián)合雷帕霉素對(duì)Colo-16細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響

王 慧 楊 艷 李竹茜 展曉紅 魏志平

1青島市城陽(yáng)區(qū)人民醫(yī)院皮膚科,青島,266109;2青島大學(xué)附屬醫(yī)院病理科,青島,266109;3徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚科,徐州,221002

皮膚鱗狀細(xì)胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma, CSCC)是一種以角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖和分化水平的降低為特征的皮膚惡性腫瘤,其發(fā)病率僅次于基底細(xì)胞癌,惡性程度僅次于黑素瘤[1],目前,CSCC的治療主要有Mohs顯微外科、化療、光動(dòng)力療法、放療、生物療法和免疫療法[2,3]。大多數(shù)皮膚鱗癌可通過(guò)手術(shù)成功根除,但部分皮膚鱗癌具有較高的侵襲性、轉(zhuǎn)移率和死亡率[3-6]。 EGFR/PI3K/AKT/mTOR是重要的信號(hào)通路之一,與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[7-9]。EGFR 及mTOR通路在分子水平存在交叉點(diǎn),均與CSCC發(fā)展密切相關(guān)[10,11]。雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)是從吸水性鏈霉菌提取出來(lái)的一種新型大環(huán)內(nèi)酯類免疫抑制劑,是mTOR特異性抑制劑[12,13],本研究以人CSCC細(xì)胞Colo-16為研究對(duì)象,觀察EGFR shRNA聯(lián)合RAPA對(duì)Colo-16細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響,探討其可能機(jī)制,為CSCC的藥物治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 材料 Colo-16細(xì)胞株由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所提供,胎牛血清來(lái)自杭州四季青生物材料有限公司,RPMI 1640培養(yǎng)液來(lái)自美國(guó)Gibco公司。陰性對(duì)照質(zhì)粒shRNA-NC和EGFR shRNA質(zhì)粒由上海吉瑪制藥有限公司構(gòu)建,RAPA來(lái)自美國(guó)Sigma-Aldrich公司,細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(cell counting kit-8,CCK-8)購(gòu)自上海碧云天生物科技有限公司;Transwell購(gòu)自美國(guó)Costar公司, Lipofectamine2000試劑來(lái)自美國(guó)Invitrogen公司,細(xì)胞增殖核抗原Ki-67(Ki-67)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9、鼠抗人 β 肌動(dòng)蛋白一 抗、羊抗鼠二抗、羊抗兔二抗及Western印跡法化學(xué)發(fā)光工作液均來(lái)自美國(guó)Santa Cruz公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建 復(fù)蘇……