內質網相關降解蛋白Derlin-1和配對盒2在子宮內膜癌組織中的表達及與患者臨床特征的關系

李少良，胡蝶，柯賢勝，朱海霞

武穴市第一人民醫院1腫瘤科，2產科，湖北 武穴 435400

子宮內膜癌屬于上皮性惡性腫瘤，多見于圍絕經期女性，早期無特異性癥狀，確診時患者多已處于晚期，錯過了最佳的治療時機，預后較差[1]。盡早明確患者的疾病進展，才能在最佳時機對其開展針對性治療，進而改善患者的預后[2]。目前，子宮內膜癌的發病機制尚未明確，有研究認為與基因表達異常、雌激素大量分泌密切相關[3-4]。內質網相關降解蛋白Derlin-1 和配對盒2（paired box 2，PAX2）在女性生殖系統惡性腫瘤的發生、發展中發揮重要作用。Derlin-1是臨床公認的致癌基因，具有誘導腫瘤新生血管生成的作用；PAX2屬于細胞核器官早期發育的調控基因之一，具有促進腫瘤細胞增殖的作用[5-6]。基于此，本研究探討Derlin-1和PAX2 在子宮內膜癌中的表達及與患者臨床特征的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月至2021年12月武穴市第一人民醫院收治的子宮內膜癌患者。納入標準：符合《子宮內膜癌診斷與治療指南（第四版）》[7]中關于子宮內膜癌的診斷標準，經病理學檢查確診；國際婦產科聯盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期為Ⅰ～Ⅳ期。排除標準：合并其他惡性腫瘤；合并免疫系統疾病；妊娠期或哺乳期女性。依據納入和排除標準，本研究共納入80 例子宮內膜癌患者，年齡28～68 歲，平均（44.66±4.26）歲；FIGO 分期：Ⅰ期32 例，Ⅱ期26 例，Ⅲ期14 例，Ⅳ期8 例；分化程度：高分化22 例，中分化42 例，低分化16 例；病理學分級：G1級28 例，G2級27 例，G3級25 例。另選取同期武穴市第一人民醫院收治的80 例子宮肌瘤患者，年齡27～70 歲，平均（45.11±4.13）歲。兩組患者年齡比較，差異無統計學意義（P﹥0.05），具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準通過，所有患者均知情同意。

1.2 免疫組化法檢測Derlin-1 和PAX2 蛋白的表達情況

取子宮內膜癌患者的子宮內膜癌組織和子宮肌瘤患者的正常子宮內膜組織，5 μm 厚切片，滴入兔抗人Derlin-1 一抗（稀釋濃度為1∶500）、兔抗人PAX2 一抗（稀釋濃度為1∶500）和生物標記羊抗兔免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）二抗（稀釋濃度為1∶1000），于室溫下孵育4 h 后滴入辣根過氧化物酶，再次孵育30 min 后磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗3 次，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色后，蘇木素復染8～10 s，中性樹膠密封切片，顯微鏡下觀察染色強度和陽性細胞所占比例。

判定標準：光學顯微鏡下隨機取5個視野，每個視野計數100個細胞，染色強度和陽性細胞所占比例分別計分。無著色計0分，淡黃色染色計1分，棕黃色染色計2分，黃褐色染色計3分；陽性細胞所占比例﹤10%計1 分，10%～50%計2 分，51%～80%計3 分，﹥80%計4分。將染色強度評分和陽性細胞所占比例評分相乘，≥4分判定為陽性，﹤4分判定為陰性。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0 軟件對所有數據進行統計分析，正態分布計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗，組內比較采用配對t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；Derlin-1 蛋白陽性表達的影響因素采用多因素Logistic 回歸分析；以P﹤0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Derlin-1、PAX2 表達情況的比較

子宮內膜癌組織中Derlin-1、PAX2 蛋白陽性表達率均明顯高于正常子宮內膜組織，差異均有統計學意義（P﹤0.01）。（表1、圖1）

圖1 Derlin-1、PAX2蛋白在子宮內膜癌組織中的表達情況（免疫組化染色，×400）

2.2 不同臨床特征子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中Derlin-1、PAX2 蛋白表達情況的比較

不同年齡、絕經情況、病理類型、肌層浸潤深度、脈管浸潤情況、病理學分級子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中Derlin-1 陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P﹥0.05）；FIGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、淋巴結轉移子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中Derlin-1 陽性表達率分別高于FIGO 分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化、無淋巴結轉移的患者，差異均有統計學意義（P﹤0.05）。不同年齡、絕經情況、病理類型、FIGO 分期、肌層浸潤深度、脈管浸潤情況、分化程度、淋巴結轉移情況、病理學分級子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中PAX2 陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P﹥0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中Derlin-1、PAX2 蛋白表達情況的比較

2.3 Derlin-1 蛋白陽性表達影響因素的多因素Logistic 回歸分析

將2.2 中差異有統計學意義的FIGO 分期、分化程度、淋巴結轉移情況作為自變量，Derlin-1 蛋白表達情況作為因變量納入多因素Logistic 回歸分析，結果顯示，FIGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、淋巴結轉移均為Derlin-1 蛋白陽性表達的獨立危險因素（P﹤0.05）。（表3）

表3 Derlin-1 蛋白陽性表達影響因素的多因素Logistic 回歸分析

3 討論

子宮內膜癌作為嚴重威脅女性生命健康的生殖系統惡性腫瘤，發病率逐年升高，若不及時治療，極有可能引發不孕不育或子宮內膜異位性痛經等并發癥，影響患者的生活質量[8-9]。因此，盡早確診并根據其疾病嚴重程度及時對患者開展針對性治療十分有必要。目前，臨床認為子宮內膜癌的發生、發展與細胞增殖和凋亡密切相關，一旦人體的原癌基因或抑癌基因表達異常，其細胞增殖和凋亡周期也會隨之失衡，最終加快腫瘤細胞的增殖，對腫瘤的生物學特征影響較大[10-11]。既往臨床主要通過診斷性刮宮篩查該病，但該方法無法區分子宮頸腺癌和子宮內膜癌，誤診的可能性較大[12-13]。隨著篩查技術的不斷成熟，免疫組化法逐漸應用于臨床，逐漸成為子宮內膜癌早期篩查的主要方法[14-15]。

Derlin-1是臨床常見的癌基因，正常情況下可起到降解錯誤蛋白的作用，有助于減輕細胞的負擔[16-17]。Derlin-1 主要定位于內質網膜中，可直接參與腫瘤細胞的信號轉導和細胞凋亡過程，Derlin-1表達異常上調，患者體內的腫瘤細胞侵襲速度會隨之加快，而Derlin-1 表達下調能夠抑制腫瘤細胞的增殖，可見Derlin-1 表達與疾病嚴重程度密切相關[18-19]。此外，Derlin-1 還能通過與泛素結合酶E2C（ubiquitin-conjugating enzyme E2C，UBE2C）相結合的方式促使蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，又稱AKT）和細胞外信號調節激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）的磷酸化增加，導致Derlin-1 異常表達，而Derlin-1 異常表達能夠加快子宮內膜癌細胞的增殖和遷移，一定程度上加快了子宮內膜癌的進展速度，一旦子宮內膜癌進展至晚期，其低分化和淋巴結轉移的可能性也會隨之上升，且Derlin-1 表達越高，出現低分化和淋巴結轉移的可能性也就越大，說明Derlin-1 表達上調能夠加快子宮內膜癌的進展，促使其分化，進而加大淋巴結轉移的可能性。

配對盒（paired box，PAX）是人體中普遍存在的發育調控基因家族，共9 個成員，PAX2是原癌基因，在正常組織中不表達或低表達，一旦表達即可加速細胞增殖，導致腫瘤細胞迅速增殖轉移，加重腫瘤患者的病情[20-21]。相關研究顯示，PAX2 多在宮頸、子宮內膜或生殖道等部位表達，通過細胞培養可發現，正常情況下子宮內膜中的PAX2 無法被活化，若雌激素分泌紊亂，PAX2 將會出現異常表達，可見PAX2 能夠對子宮內膜癌的癌變情況進行調節，在子宮內膜癌診斷中具有輔助意義[22-23]。PAX2 一旦表達異常升高，人體內的細胞增殖速度會加快，極易引發多器官癌變。

本研究結果顯示，子宮內膜癌組織中Derlin-1、PAX2 蛋白陽性表達率均明顯高于正常子宮內膜組織，差異均有統計學意義（P﹤0.01）；且FIGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、淋巴結轉移子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中Derlin-1 陽性表達率分別高于FIGO 分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化、無淋巴結轉移的患者，差異均有統計學意義（P﹤0.05），提示Derlin-1 在子宮內膜癌中高表達，且Derlin-1 的陽性表達率與子宮內膜癌FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移情況密切相關。結果表明Derlin-1 表達異常升高會加快子宮內膜癌的疾病進展速度，同時增加其惡性程度，或可通過下調Derlin-1 表達的方式有效抑制腫瘤細胞增殖，可見通過檢測Derlin-1 的表達情況，能夠幫助患者選擇較為合適的治療方法，進而提高臨床治療效果。但本研究發現，不同年齡、絕經情況、病理類型、FIGO 分期、肌層浸潤深度、脈管浸潤情況、分化程度、淋巴結轉移情況、病理學分級子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中PAX2 陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P﹥0.05）。這可能與本研究樣本量偏少有關，有待進一步研究證實。

綜上所述，Derlin-1、PAX2 在子宮內膜癌組織中高表達，且其表達與子宮內膜癌患者FIGO 分期、分化程度、淋巴結轉移情況有關，臨床可根據其表達情況判斷患者的病情進展情況，從而及時對患者開展合適的治療，達到提高患者臨床治療效果的目的。但值得注意的是，本研究納入的樣本量較少，結果可能存在一定偏差，有待加大樣本量進行研究，才能進一步保障結果的可靠性。