39%噻嗪酮·螺蟲乙酯懸浮劑分析方法研究

侯影，吳迪，梁觀鳳，林培旺，諶偉

(1.上海悅聯生物科技有限公司，上海 201215；2.北京市植物保護站，北京 100120；3.上海悅聯化工有限公司，上海 201416)

噻嗪酮(buprofezin)屬雜環類昆蟲幾丁質合成抑制劑，對鞘翅目、部分同翅目以及蜱螨目具有持效性殺幼蟲活性，目前主要登記用于水稻、果樹、茶樹、蔬菜等作物害蟲的防治，可有效防治大葉蟬科、飛虱科、粉虱科、蚧科、盾蚧科和粉蚧科等害蟲[1]。螺蟲乙酯(spirotetramat)是具有雙向內吸傳導性能的季酮酸類殺蟲劑，與拜耳公司的殺蟲殺螨劑螺螨酯(spirodiclofen)和螺甲螨酯(spiromesifen)屬同類化合物，可以在整個植物體內上下移動，抵達葉面和樹皮，從而防治如生菜和白菜內葉上及果樹皮上的害蟲，抑制害蟲的卵和幼蟲生長，保護新生莖、葉和根部，且持效期長，可提供長達8 周的有效防治[1]。螺蟲乙酯與噻嗪酮復配具有延緩抗藥性、殺蟲殺卵效果好、持效期長、低毒、使用劑量小、不污染環境、低殘留等優點，可達到延緩害蟲產生抗藥性和防治已產生抗藥性的害蟲及殺滅害蟲卵的目的。

目前，有關螺蟲乙酯的分析方法[2-5]和噻嗪酮的分析方法[6-8]已有相關報道，但2 者混配懸浮劑的分析方法還未見報道。基于此，本文研究開發反相高效液相色譜法對39%噻嗪酮·螺蟲乙酯懸浮劑(26%+13%)中有效成分噻嗪酮和螺蟲乙酯進行同柱分析和定量，操作快速、簡便，精密度和準確度均能滿足定量分析要求，能為該產品質量控制提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑和試劑

螺蟲乙酯標樣(質量分數99.0%)、噻嗪酮標樣(質量分數99.1%)，沈陽化工研究院有限公司；甲醇(色譜純)，默克化學；水，二次重蒸蒸餾水。流動相：甲醇∶水=75∶25(體積比)，經0.45 μm 孔徑的濾膜，并在超聲波浴槽中脫氣10 min。

1.2 主要儀器

LC-20A 高效液相色譜儀配二極管陣列檢測器(日本島津公司)；色譜柱：Φ4.6 mm×150 mm 不銹鋼柱，內裝5 μm Kromasil C18為填充料的不銹鋼柱(諾力昂公司)。ML204T 電子天平(梅特勒-托利多公司)；SK3200H 超聲振蕩器(上海科導超聲儀器有限公司)。

1.3 色譜操作條件

檢測器為二極管陣列檢測器；流動相為甲醇∶水=75∶25(體積比)；流量為1.0 mL/min，柱溫為室溫(溫差變化不大于2 ℃)，檢測波長為245 nm，進樣體積為20 μL。在此色譜條件下，螺蟲乙酯和噻嗪酮的保留時間分別為約2.7、5.5 min。典型的噻嗪酮(螺蟲乙酯)高效液相色譜圖見圖1。

圖1 39%噻嗪酮·螺蟲乙酯懸浮劑高效液相色譜圖

1.4 測定步驟

1.4.1 標準溶液配制

分別稱取螺蟲乙酯標樣0.05 g(精確到0.000 1 g)和噻嗪酮標樣0.10 g(精確到0.000 1 g)于50 mL 容量瓶中，加入適量甲醇超聲振蕩5 min 使樣品溶解，恢復至室溫后用甲醇定容，搖勻；再用移液管準確吸取5 mL 至50 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋定容，搖勻，備用。

1.4.2 試樣溶液配制

稱取0.38 g(精確到0.000 1 g)樣品，置于50 mL容量瓶中，加入適量甲醇超聲振蕩5 min 使樣品溶解，恢復至室溫后用甲醇定容，搖勻；再用移液管準確吸取5 mL 至50 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋定容，搖勻，用0.45 μm 濾膜過濾，濾液備用。

1.4.3 試樣的測定

在上述操作條件下，待儀器穩定后，連續注入數針標樣溶液，計算各針相對響應值的重復性，待相鄰2 針的響應值變化小于1.5%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.5 試樣中有效含量的計算

將測得的2 針試樣溶液以及試樣前后2 針標樣溶液中的峰面積分別進行平均，試樣中噻嗪酮(螺蟲乙酯)的質量分數X(%)分別按式(1)計算：

式中：A1為標樣溶液中噻嗪酮(螺蟲乙酯)峰面積的平均值；A2為試樣溶液中噻嗪酮(螺蟲乙酯)峰面積的平均值；m1為噻嗪酮(螺蟲乙酯)標樣的質量，g；m2為試樣的質量，g；P為標樣中噻嗪酮(螺蟲乙酯)的質量分數，%。

2 結果與討論

2.1 檢測波長和流動相選擇

通過二極管陣列檢測器對螺蟲乙酯標樣和噻嗪酮標樣在200～400 nm 范圍內的吸收光譜進行掃描，結果見圖2，確定檢測波長為245 nm。調整甲醇、水的比例，將噻嗪酮和螺蟲乙酯進行有效分離，同時有效避免助劑和雜質干擾，最后確定為甲醇∶水=75:25(體積比)作為流動相。在此分析條件下對39%噻嗪酮·螺蟲乙酯懸浮劑試樣中螺蟲乙酯、噻嗪酮峰純度掃描，螺蟲乙酯、噻嗪酮的峰純度均＞99%，由峰純度掃描結果顯示39%噻嗪酮·螺蟲乙酯懸浮劑中螺蟲乙酯、噻嗪酮有效成分出峰位置無明顯物質干擾，符合定量分析要求。

圖2 39%噻嗪酮·螺蟲乙酯懸浮劑中螺蟲乙酯和噻嗪酮HPLC-DAD 特異性掃描圖

2.2 分析方法的線性相關性

準確配制一系列不同質量濃度的螺蟲乙酯和噻嗪酮標樣溶液，然后分別按1.4 節測定步驟進行分析檢測，分別以螺蟲乙酯和噻嗪酮的質量濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標進行做圖和線性擬合，結果見圖3、4。螺蟲乙酯線性回歸方程為y=50.333 9x+0.083 4，相關系數R2=0.999 0；噻嗪酮線性回歸方程y=11.931 7x-0.008 6，相關系數R2=0.999 6。

圖3 螺蟲乙酯質量濃度與響應值之間的線性曲線

圖4 噻嗪酮質量濃度與響應值之間的線性曲線

2.3 分析方法的精密度試驗

任取一批39%噻嗪酮·螺蟲乙酯懸浮劑，按本方法中1.4 節測定步驟連續測定螺蟲乙酯、噻嗪酮質量分數6 次，分別計算其平均值、標準偏差、變異系數(表1)。螺蟲乙酯的標準偏差為0.06、變異系數為0.46%；噻嗪酮的相對標準偏差為0.10、變異系數為0.38%，標準偏差均小于Horwitz 公式修正值。

表1 分析方法的精密度測定

2.4 分析方法的準確度試驗

制備39%噻嗪酮·螺蟲乙酯懸浮劑空白制劑樣品，準確稱取5 份，并分別加入定量的螺蟲乙酯、噻嗪酮標樣，按1.4 節測定步驟測定螺蟲乙酯、噻嗪酮標樣的加入量，同加入的理論值進行比較，計算回收率(表2)。螺蟲乙酯回收率為98.48%～101.22%，平均回收率為99.91%；噻嗪酮回收率為99.36%～101.35%，平均回收率為100.34%。

表2 分析方法的準確度測定

續表2

3 結論

本文采用高效液相色譜儀建立了復配懸浮劑中噻嗪酮和螺蟲乙酯的定量分析方法，此方法能快速準確測定39%噻嗪酮·螺蟲乙酯懸浮劑噻嗪酮和螺蟲乙酯的含量。方法簡便快捷、重現性好、準確度高的特點，符合農藥產品質量分析要求，可以適用于39%噻嗪酮·螺蟲乙酯懸浮劑產品的質量分析控制。