做好農產品中農藥殘留能力驗證的探討

唐修然 胡王艷 姚曉寒 李香花

能力驗證是利用實驗室間比對，按照預先制定的準則評價參加者的能力。實驗室參加能力驗證工作，要求檢驗人員具有較強的操作技能、較高的專業知識水平以及具有豐富的實操判斷經驗。本文總結能力驗證經常遇到的困難及不合格的原因，結合本實驗室參加能力驗證時實際采用的試驗方法和經驗，提出參加能力驗證應注意的幾點建議，供實驗室檢驗人員參考，以提高能力驗證結果準確性。

1.引言

能力驗證是實驗室外部質量控制的有效手段，是檢驗檢測機構最常采用的質量控制方法之一。在食品安全監督抽檢承檢機構考核中，能力驗證也被列為承檢單位檢測能力考核計分項。能力驗證是檢查實驗室是否持續保持相應資質檢測能力，檢驗人員是否具備相應專業技術水平的活動。農產品檢驗檢測機構通過參加能力驗證活動，發現并糾正存在問題，規范檢測業務工作流程，確實提高檢驗檢測能力和技術水平，有效保證檢測工作的科學性、公正性和權威性，確保為正確評價農產品質量安全提供客觀、公正、科學、可靠的檢測數據。

2.歷年能力驗證基本情況

能力驗證項目一般涵蓋農業部門在各項農產品質量安全檢測任務涉及的農藥殘留檢測項目或是食品質量安全監督抽檢項目。農業農村局在農產品中開展能力驗證領域包括農產品中農藥殘留檢測、農產品中重金屬檢測、畜禽產品中獸藥和違禁添加物殘留檢測、水產品中藥物殘留檢測、土壤中重金屬檢測等。據有關數據統計顯示，近幾年自治區農業農村局在農產品各領域檢驗檢測能力驗證中，農產品農藥殘留檢測技術能力驗證合格率為63.4%至74.4%之間，而其他各領域如農產品中重金屬檢測等的能力驗證合格率幾乎可達到90%以上的合格率。農業農村部辦公廳發布的2019年全國農產品質量安全檢測技術能力驗證結果的通報也顯示，地市縣級檢測機構在農產品中農藥殘留檢測能力驗證合格率為78.6%。農產品農藥殘留檢測技術能力驗證合格通過率遠遠低于農產品其他領域能力驗證合格率。由此可見，農產品中農藥殘留檢測技術能力驗證是困擾許多農產品質量檢驗檢測機構的難題。

3.考核難度分析

檢驗檢測機構參加能力驗證一般有兩種情況，第一種情況是雙盲考核。這里說的雙盲考核既不明確考核的具體目標物，也不明確目標物質的濃度范圍，即在考核中要做目標物的定性分析和定量檢驗，先確定本次考核中的具體目標物，再對目標物質進行準確定量。在雙盲考核中一般考核目標物都比較多，從幾個到幾十個不等，并且在定性和定量時必須缺一不可，全部準確定量才算合格通過。所以從考核難度上看，難度系數是非常大的。第二種是單盲考核。單盲考核對于雙盲考核來說，考核難度就簡單很多，單盲考核時給出了具體考核目標物質，并且目標物一般不會太多，一般考核2-3個項目，單盲考核只需要對指定的目標物進行準確定量即可。

4.不合格主要原因分析

從往年對能力驗證不合格原因分析可看出，主要存在以下幾個方面：一是人員能力不足。參加能力驗證的檢驗員專業知識水平不足，缺乏豐富的實際操作經驗，遇到問題沒有得到合理分析解決。二是儀器設備條件限制。檢驗檢測機構儀器設備測量精度或穩定性未能達到最佳檢測狀態，影響了檢測數據的準確性。有些地區特別是落后的市縣區檢驗檢測機構儀器設備相對缺乏，儀器老舊，型號落后。三是項目漏檢為能力驗證不通過的常見情形。檢驗檢測機構在做考核實驗時，對考核項目定性不正確，出現漏檢錯檢現象時有發生，這是影響考核通過的重要原因之一。四是檢測過程不規范。農產品農藥殘留檢測過程前處理方法選擇不合理，對樣品的提取、濃縮、凈化等過程把控不準確，標準曲線制作不夠合理規范。質控樣品回收率疑義或換算差錯，沒有真正發揮質控作用。還有少數原因是上報材料的完整性。未確保提交的原始數據記錄、儀器檢測原始譜圖合理性和完整性。

5.能力驗證實驗過程關鍵控制點

本實驗室參加的能力驗證中檢院組織的能力驗證計劃：蔬菜（菠菜）凍干粉中毒死蜱、腐霉利的測定。蔬菜中毒死蜱、腐霉利的測定常見方法有GB 20769-2008、NY/T 761-2008、GB 23200.113-2018和GB 23200.121-2021等，涉及氣相色譜法、氣相色譜－質譜聯用法和液相色譜－質譜聯用法。檢測機構可根據自身實驗室檢驗資質能力范圍選擇合適的檢驗方法。本次實驗決定選擇GB 23200.113-2018氣相色譜－質譜聯用法和GB 23200.121-2021液相色譜－質譜聯用法同時進行，氣相色譜－質譜聯用法和液相色譜－質譜聯用法的優勢是為質譜提供了準確的定性檢測方法。較氣相色譜法而言，質譜聯用在定性檢測時更加可靠可控，同時采用多方法和多儀器比對進行定性和定量，可更大程度提高上報結果的準確性。

主要儀器設備和材料：島津LCMS-8040液相色譜－質譜聯用儀：配有電噴霧離子源（ESI），色譜柱：島津C18-AQ，粒徑1.9μm，2.1（內徑）×100mm（HSS）；島津GCMSTQ-8040氣相色譜－質譜聯用儀：配有電子轟擊源（EI），色譜柱：島津毛細管柱SH-l-5Sil MS，30meter，0.25mmID，0.25μm df；電子天平；高速勻漿機；氮吹儀；離心機；渦旋混合器；島津QuEChERS提取鹽包、島津QuEChERS凈化管，乙腈、乙酸乙酯均為色譜純。標準品：新購買的有證標準物質100μg/mL毒死蜱標準溶液和100μg/mL腐霉利標準溶液。

5.1樣品前處理過程的關鍵控制點

5.1.1毒死蜱和腐霉利兩個項目均可采用以上四個檢驗方法進行檢測，而采用GB 23200.113-2018和GB 23200.121-2021優勢更勝一籌，這兩個方法均使用QuEChERS前處理方法，其優點是精確度和準確度高、可分析農藥范圍廣、回收率高、分析速度快、操作簡便、使用溶劑少等。單次處理所用到的樣品量為10g，較其他兩個方法的取樣量少一半多。一份試樣可同時提供兩種方法檢測，試樣經提取、凈化后，取一份上清液經微孔濾膜過濾后供液相色譜－質譜聯用儀檢測用；另取一份上清液經氮吹后用乙酸乙酯復溶，過濾后供氣相色譜－質譜聯用儀檢測用。在能力驗證提供樣品量少的情況下，采用GB 23200.113-2018或GB 23200.121-2021方法能夠爭取了更多次試驗的機會，多次試驗提供多組數據參考，在發現問題時可進行重復試驗，提高結果準確性的概率。

5.1.2提取時勻漿轉速、時間嚴格控制，轉速在0-5s平穩升至理想轉速15000r/min，并記錄勻漿提取時間足夠1min。當能力驗證樣品為速凍干粉時，嚴格按照樣品附帶的作業指導書進行樣品復溶，如作業指導書要求蔬菜凍干粉樣品以5倍蒸餾水復原，在操作過程不能隨意改變其稀釋比例，否則可能導致樣品溶解不完全降低提取率，或稀釋體積過大影響后續提取濃縮等步驟操作，也有可能因變換了比例而在最終的結果計算時出現差錯。

5.1.3供氣相質譜聯用儀檢測用試液，氮吹時水浴溫度平穩恒定在40℃，溫度過低會降低吹干速度，溫度過高將導致農藥損失。肉眼觀察氣體吹出速度流量大小一致，或使用同一個管位出風口依次對空白、試樣、加標試樣進行氮吹。氮吹近干點把控準確，在輕微晃動試管時肉眼觀察試管底部無明顯大粒液珠，并且濕潤而不干。

5.2校準曲線的制備和運用技巧

首先取一份樣品做預實驗，初步測定考核樣大致濃度，再根據初步測定結果確定標準曲線梯度范圍，使待測物含量落在標準曲線中間濃度范圍為宜。在制作標準工作曲線時，根據不同方法和儀器可以制作溶劑標準工作曲線、空白基質標準曲線和基質加標標準曲線，通過各種方法繪制校準曲線，不同工作曲線加載計算試樣濃度比較，提供數據參考，最終檢測結果一般用基質校準曲線進行定量。液質聯用儀可以使用溶劑直接配置標準曲線，初步測定被測物的大概濃度范圍，為能力驗證爭取更多寶貴時間。在氣相質譜法中基質加標標準曲線可以有效消除基質效應的影響和各操作步驟可能存在的干擾。

5.3樣品加標回收的質量控制措施

對于農藥殘留質控加標回收試驗，同一種農藥在各個濃度的回收率不一樣，不同農藥在同一個濃度的回收率也不一樣。所以，在初次測定目標農藥確定毒死蜱的質量濃度約是0.16-0.20mg/kg，腐霉利質量濃度約是0.85-0.95mg/kg，那么，應針對兩種農藥分別做與考核濃度一致的加標試驗，即在與考核盲樣基質一致的空白樣品中毒死蜱質控加標含量為0.20mg/kg，腐霉利質控加標含量為0.90mg/kg。一般回收率在80%-120%之間是比較理想的，如果出現回收率偏移嚴重，則應查找原因，從前處理、標準物質配制、儀器設備狀態等整個檢測過程排除可能出現的問題，并進行糾正。本次質控加標回收實驗結果顯示，毒死蜱、腐霉利在不同加標濃度時，用氣相色譜－質譜聯用法和液相色譜－質譜聯用法分別檢測，結果見表1。

檢測過程質量控制措施可信時，即用空白樣品加標的質控回收率在符合標準規定范圍內，可對樣品進行回收率折算。檢測結果最終根據質控回收率的多少決定是否對考核樣檢測值進行校正。在此，毒死蜱無論在液質聯用法還是氣質聯用法中回收率都接近100%，可以不進行校正，而腐霉利質控回收率均在110%以上，則進行結果校正。再結合本實驗室日常檢測經驗，毒死蜱、腐霉利選擇氣質聯用法并進行回收率校正確定最終上報結果。

5.4儀器分析譜圖準確把控

在進行能力驗證時應提前做好儀器設備維護保養，調整儀器至最佳工作狀態。液質聯用儀對管路和色譜柱、離子源窗口等部位清洗干凈，在氣質聯用儀更換襯管、色譜柱等耗材后必須做好老化操作，檢測前用高濃度目標農藥標準溶液持續進樣至儀器達到飽和，保持儀器穩定性，調整色譜條件、質譜條件等使目標農藥呈現良好峰形。實驗過程的原始數據及儀器檢測譜圖真實完整保存，不得擅自更改數據改變實驗的真實性。

6.做好能力驗證的幾點建議

一是提高檢測人員技術能力，控制人為誤差。檢驗人員具有較強的操作技能、較高的專業知識水平以及具有豐富的實操判斷經驗直接關系檢測結果的可靠性。有時檢驗機構會指定交代年輕的檢驗員參加能力驗證，以此考察培養的檢驗人員是否達到較高的專業技術能力，此時應配備有經驗豐富的高水平專業技術人員專門指導和監督其能力驗證的整個過程，并對檢測結果進行評定，以確保最終上報結果的準確性。

二是理性選擇檢驗方法。當所在實驗室擁有幾個檢驗方法資質均覆蓋能力驗證項目時，應采取最常做最有把握的檢驗方法實施考核工作，而不能在關鍵時刻盲目探索，增加了考核通過的風險。

三是檢驗標準物質的關鍵作用。進行能力驗證時盡量使用新啟用的最新有效標準品物質，不建議使用放置過久的標準物質或開啟稀釋后的標準儲備液，避免因標準物質降解濃度降低從而引起測量結果偏高的現象。制作校準曲線濃度范圍合理，在預測樣品大概濃度后，配置標準曲線梯度范圍應盡量使樣品濃度落在標準曲線梯度的中間范圍。

四是把握儀器設備狀態，消除系統誤差。對儀器設備的關注往往很注重大型儀器設備的檢定校準和期間核查。儀器的性能穩定，持續處于最佳工作狀態是直接影響監測數據的準確性和有效性的關鍵因素。同時，各種計量器具的檢定校準也不可忽視，移液管、移液槍、容量瓶的精準度同樣密切影響著實驗過程的準確性。

五是環境條件控制。農藥殘留檢驗中使用的試劑大部分都是有機溶劑，對實驗室環境要求較高，在適宜的溫濕度條件下進行實驗，儀器室溫度控制合適并且穩定，以免溫度過高加快待上機試液的揮發，影響準確度和精密度。

總結

實驗室參加能力驗證項目考核時，應確保人員能力、儀器設備條件等影響最大的主要因素保持在最佳實驗狀態。本文以參加能力驗證時在樣品前處理過程的關鍵控制點，樣品加標回收的質量控制措施，校準曲線的制備和運用技巧，儀器分析譜圖準確把控等方面進行經驗交流與分享，并在人機料法環各方面提出應注意的幾點建議，為檢測機構參加能力驗證時提供參考，以提高農產品農藥殘留檢測能力驗證通過率。

作者簡介：

唐修然（1987-），女，廣西賀州人，本科，工程師；研究方向：產品質量檢測及檢測技術研發工作。