血清EBV抗體及其DNA聯合檢測對鼻咽癌診斷價值

秦倪 王帥 劉雯

［摘要］ 目的 探討血清EB病毒（EBV）抗體以及EBV-DNA聯合檢測在鼻咽癌治療前診斷中的臨床價值。

方法 采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法檢測163例鼻咽癌病人和140例健康對照者血清EBV衣殼抗原IgA（VCA-IgA）、早期抗原IgA（EA-IgA）、Rta蛋白IgG（Rta-IgG）抗體水平，熒光定量聚合酶鏈式反應法檢測EBV-DNA載量，評價各項指標在鼻咽癌診斷中的價值。

結果 鼻咽癌病人血清EBV VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG抗體效價和EBV-DNA載量水平以及其陽性率均顯著高于健康對照者（t=12.499～14.597，Z=12.893，χ2=51.274～153.132，P＜0.05）。VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA聯合檢測診斷鼻咽癌的曲線下面積（AUC）為0.992。Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌病人VCA-IgA、Rta-IgG抗體效價及EBV-DNA載量均顯著高于Ⅰ～Ⅱ期病人（t=3.332、4.324，Z=10.507，P＜0.05）。

結論 VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA聯合檢測對于鼻咽癌早期篩查及診斷具有較高的臨床價值。

［關鍵詞］ 鼻咽癌；皰疹病毒4型，人；抗體，病毒；DNA，病毒；診斷

［中圖分類號］ R739.63

［文獻標志碼］ A

［文章編號］ 2096-5532（2023）01-0064-04

doi：10.11712/jms.2096-5532.2023.59.017

［網絡出版］ https：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20230302.1738.005.html;2023-03-03 17：08：42

VALUE OF COMBINED MEASUREMENT OF SERUM EPSTEIN-BARR VIRUS ANTIBODIES AND EPSTEIN-BARR VIRUS DNA IN THE DIAGNOSIS OF NASOPHARYNGEAL CARCINOMA

QIN Ni， WANG Shuai， LIU Wen

（School of Basic Medicine， Qingdao University Medical College， Qingdao 266071， China）

; ［ABSTRACT］ ?Objective ?To investigate the clinical value of combined measurement of serum Epstein-Barr virus （EBV） antibodies and EBV-DNA in the preoperative diagnosis of nasopharyngeal carcinoma.

Methods ?A total of 163 patients with nasopharyngeal carcinoma and 140 healthy controls were enrolled. ELISA was used to measure the serum levels of VCA-IgA， EA-IgA， and Rta-IgG， and quantitative real-time PCR was used to measure EBV-DNA load. The value of each indicator in the diagnosis of nasopharyngeal carcinoma was analyzed.

Results ??Compared with the healthy controls， the patients with nasopharyngeal carcinoma had significantly higher titers of VCA-IgA， EA-IgA， and Rta-IgG antibodies and significantly higher load and positive rate of EBV-DNA （t=12.499-14.597，Z=12.893，χ2=51.274-153.132，P<0.05）. Combined measurement of VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA had an area under the ROC curve of 0.992 in the diagnosis of nasopharyngeal carcinoma. The patients with stage Ⅲ-Ⅳ nasopharyngeal carcinoma had significantly higher titers of VCA-IgA and Rta-IgG antibodies and EBV-DNA load than those with stage Ⅰ-Ⅱ nasopharyngeal carcinoma （t=3.332， 4.324，Z=10.507，P<0.05）.

Conclusion ?Combined measurement of VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA has a high clinical value in the early screening and diagnosis of nasopharyngeal carcinoma.

［KEY WORDS］ ?nasopharyngeal carcinoma; herpesvirus 4， human; antibodies， viral; DNA， viral; diagnosis

鼻咽癌是起源于鼻咽黏膜上皮細胞的頭頸部惡性腫瘤，其發病率居頭頸部惡性腫瘤首位［1-3］。鼻咽癌起病隱匿、早期癥狀不明顯、發病位置狹窄，易被忽視且易擴散轉移，大多數病人發現時已處于中晚期，嚴重影響了病人的預后［4］。早發現早診斷，有利于鼻咽癌病人的治療和預后。EB病毒（EBV）與鼻咽癌的發生密切相關，可以潛伏感染鼻咽部黏膜上皮細胞引發癌變，并刺激機體產生相應的抗體，如EBV衣殼抗原IgA（VCA-IgA）、早期抗原IgA（EA-IgA）、Rta蛋白IgG（Rta-IgG）等，這些抗體可作為鼻咽癌的血清學標志物，然而單個指標檢測對鼻咽癌的血清學輔助診斷效能不理想，目前臨床上多采用多個指標聯合檢測的方式［3，5］。應用熒光定量聚

合酶鏈式反應（FQ-PCR）技術檢測血清EBV-DNA載量能夠提高鼻咽癌早期篩查的準確率，近年來逐漸引起重視［6-8］。本研究在常用的鼻咽癌抗體標志物組合（VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG）的基礎上，聯合檢測血清EBV-DNA載量，以探討血清EBV抗體和EBV-DNA聯合檢測在鼻咽癌治療前診斷中的價值。現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2019年12月—2020年12月，選取青島大學附屬醫院住院及門診確診的鼻咽癌病人163例（鼻咽癌組），其中男95例，女68例，年齡42～84歲，平均（63.39±8.90）歲。所有病例均經組織病理檢查確診為鼻咽癌，且未合并其他惡性腫瘤或器官衰竭，3個月內均未發生急性感染、急性心腦血管疾病及嚴重創傷，采血檢驗前均無手術、化療、放療及免疫治療史。依據中國鼻咽癌2008臨床TNM分期標準進行分期，其中Ⅰ～Ⅱ期70例（早期），Ⅲ～Ⅳ期93例（晚期）。同期選取體檢中心的140例健康體檢者作為對照組，其中男73例，女67例，年齡為38～84歲，平均（62.45±9.77）歲；均排除鼻咽部疾病，且無心腦血管疾病、急性感染及嚴重創傷。兩組的年齡及性別差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 標本采集與檢測

鼻咽癌病人均于入院后治療前采集清晨空腹靜脈血5 mL，體檢者均于體檢日采集清晨空腹靜脈血5 mL，均以4 000 r/min離心10 min，分離血清。采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法檢測VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG抗體水平，采用FQ-PCR法檢測EBV-DNA載量，所有檢測均嚴格按照儀器及配套試劑的說明進行操作。抗體陽性判斷標準：VCA-IgA、EA-IgA以標本吸光度（A）值/校準品A值≥1.1為陽性；Rta-IgG以標本A值/臨界值≥1為陽性，其中臨界值根據說明書提供的方法計算。VCA-IgA、EA-IgA及Rta-IgG的結果以相對A值（rA）表示，rA=S/CO，S/CO為標本A值與cutoff值的比值。采用自動分析軟件對FQ-PCR結果進行分析，EBV-DNA以＞5×105 copies/L為陽性。聯合檢測采用平行試驗（并聯試驗）方法，檢測項目其中一項為陽性即判斷為陽性。

1.3 統計學分析

使用SPSS 23.0統計學軟件進行數據統計分析。符合正態分布的計量資料以±s形式表示，組間比較采用成組t檢驗；不符合正態分布的計量資料以中位數（M）和四分位數間距（QU－QL）形式表示，組間比較采用秩和檢驗；計數資料以例數和百分數表示，組間比較采用χ2檢驗。根據血清EBV抗體和EBV-DNA檢測結果繪制受試者工作特征（ROC）曲線，采用公式計算診斷靈敏度、特異度、準確度和曲線下面積（AUC）等指標［9］。以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結? 果

2.1 兩組血清EBV抗體效價及EBV-DNA載量的比較

鼻咽癌組血清VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG抗體效價和EBV-DNA載量水平及其陽性率均高于對照組，差異均有統計學意義（t=12.499～14.597，Z=12.893，χ2=51.274～153.132，P＜0.05）。結果見表1、2。

2.2 血清EBV抗體和EBV-DNA檢測對鼻咽癌的診斷價值

單項檢測中，AUC最高的指標為EBV-DNA（0.930），靈敏度最高的為VCA-IgA（78.53%），特異度最高的為EBV-DNA（92.86%），準確度最高的為EBV-DNA（84.49%）；聯合檢測中，AUC最高的指標為VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA（0.992），靈敏度最高的為VCA-IgA+EA-IgA+EBV-DNA以及VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA（100.00%），特異度最高的則為VCA-IgA+EA-IgA+EBV-DNA（65.00%），準確度最高的為VCA-IgA+EA-IgA+EBV-DNA（83.83%）。見圖1和表3。

2.3 不同分期鼻咽癌病人血清EBV抗體效價和DNA載量比較

Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌病人血清VCA-IgA、Rta-IgG抗體效價和EBV-DNA載量明顯高于Ⅰ～Ⅱ期病人，差異均具有統計學意義（t=3.332、4.324，Z=10.507，P＜0.05）；Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌病人EBV-DNA陽性率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期病人，差異具有統計學意義（χ2=46.802，P＜0.05），但不同分期鼻咽癌病人3項抗體陽性率比較差異無顯著意義（P＞0.05）。見表4、5。

3 討? 論

近年來，鼻咽癌的發病率逐年升高，在我國其發病率和死亡率均高于世界平均水平［4，10］。EBV是可引起人類B淋巴細胞感染的皰疹病毒，與鼻咽癌的發生發展密切相關。機體感染EBV產生的多種特異性抗體，如VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG等，具有不同的臨床意義，它們在不同鼻咽癌病人血清中的滴度有一定差異，且其血清水平與病人病情密切相關［5］。

VCA-IgA和EA-IgA檢測在鼻咽癌篩查及輔助診斷中已有較多應用。Rta蛋白是EBV裂解期BRLF1基因突變表達的一種編碼蛋白，能誘導促進鼻咽部上皮細胞分裂發生癌變，是目前備受關注的新分子靶標，檢測EBV Rta-IgG有助于早期鼻咽癌的輔助診斷［10］。國內外已經有不少研究證實了Rta-IgG與VCA-IgA、EA-IgA聯合檢測在鼻咽癌早期診斷中的潛在價值［11-12］。EBV感染機體后可潛伏在淋巴細胞內，并以環狀DNA的形式游離于細胞質中，因此檢測EBV-DNA拷貝數可反映病人體內EBV載量［13-14］。

本文研究結果顯示，鼻咽癌組血清VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG抗體效價和EBV-DNA載量及其陽性率均顯著高于健康對照組，提示該4項指標可用于鼻咽癌的輔助診斷。進一步分析這4項指標的診斷價值，單項檢測中AUC最大的為EBV-DNA（0.930），其診斷效能最優，且其診斷特異度及準確度也最高，但診斷靈敏度低于VCA-IgA。因此，在臨床篩查鼻咽癌時各項標志物常采用聯合檢測且并聯試驗的方法，以提高診斷的陽性率。本文研究結果顯示，聯合檢測可明顯提高診斷效能，4項指標聯合檢測的AUC及靈敏度均最高，常規兩種抗體和EBV-DNA檢測組合VCA-IgA+EA-IgA+EBV-DNA的AUC、靈敏度及特異度也明顯高于單純抗體組合VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG，表明VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA聯合檢測在臨床篩查鼻咽癌時具有較好的應用潛力。

目前，EBV抗體效價與鼻咽癌臨床分期的相關研究較多，但結果存在一定的爭議［15］。而EBV-DNA拷貝數的檢測可以更直觀地體現機體內EBV的含量，為探究EBV載量與鼻咽癌分期的關系提供了便利。本研究初步探討了163例鼻咽癌病人3種EBV抗體和EBV-DNA與鼻咽癌病人TNM分期的關系，結果顯示，Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌病人血清VCA-IgA、Rta-IgG抗體效價和EBV-DNA載量明顯高于Ⅰ～Ⅱ期病人，并且EBV-DNA陽性率也明顯高于Ⅰ～Ⅱ期病人，但其他3項指標的陽性率在早期和晚期病人中無統計學差異。以往的研究已經證實，VCA-IgA陽性提示病毒大量復制，而EA-IgA陽性提示病毒進入復制階段［16］。因此，與EA-IgA相比較，血清VCA-IgA滴度變化更為明顯。隨著臨床分期的升高，鼻咽癌會刺激EBV編碼蛋白的高表達，Rta蛋白表達也會增高，進而使得相應抗體效價增高［11，17］。因此，晚期鼻咽癌病人血清中的Rta-IgG水平明顯高于早期病人。隨著病情的惡化，腫瘤細胞釋放到外周血可引起病人血清中EBV-DNA拷貝數的增加［1］。因此，EBV-DNA拷貝數與腫瘤分期呈正相關性。今后的研究中，我們將擴大樣本量，在根據檢測結果區分不同分期的病人時重新計算截斷值，并進一步分析各項標志物區分不同分期鼻咽癌病人的診斷價值。

綜上所述，相較于單一的EBV抗體檢測，聯合檢測可提高診斷效能，并且在初篩時3項抗體聯合EBV-DNA檢測更為理想，有利于病人的早期診斷、病情判斷及個性化治療方案的及時制定，在鼻咽癌病人輔助診斷和治療中具有一定的臨床價值。

［參考文獻］

［1］李旌. 聯合檢測EB病毒不同抗體及其DNA診斷鼻咽癌的價值［J］. 中國現代藥物應用， 2020，14（20）：102-104.

［2］劉琳，鄧舒妮. 鼻咽癌常見分子靶向藥物的臨床研究進展［J］. 世界最新醫學信息文摘， 2019，19（28）：101-103.

［3］張靜，谷秀梅，鄧紅玉，等. 血清EB病毒抗體EA-IgA、VCA-IgA和Rta-IgG聯合檢測在鼻咽癌診斷中的意義［J］. 實用預防醫學， 2021，28（1）：44-47.

［4］邱燁，張俊杰. 鼻咽癌早期篩查的研究進展［J］. 中國耳鼻咽喉顱底外科雜志， 2020，26（2）：201-204.

［5］張曉琍，周建林，曹穎平. 鼻咽癌篩查中三種EB病毒抗體檢測的應用［J］. 中華檢驗醫學雜志， 2015，38（2）：111-114.

［6］溫東輝. 熒光定量聚合酶鏈反應法監測血漿EBV-DNA水平在鼻咽癌患者診療中價值［J］.中國醫藥科學， 2020，10（11）：113-115，179.

［7］王琳，朱優立，黃書滿，等. 血漿EBV-DNA水平測定在監測鼻咽癌高危人群中的臨床應用意義［J］. 臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志， 2018，32（4）：298-301.

［8］劉艷石，劉璐. EB病毒抗體及其DNA在鼻咽癌復發患者血清中的表達水平及其臨床意義［J］. 中國醫學前沿雜志（電子版）， 2017，9（12）：115-119.

［9］尹一兵，倪培華. 臨床生物化檢驗技術［M］. 北京：人民衛生出版社， 2015.

［10］陳思皓，張石川，李廚榮，等. 鼻咽癌臨床分型研究進展［J］. 中國癌癥防治雜志， 2021，13（5）：564-568.

［11］曾澤勇，區葉明. 血清EB病毒Rta-IgG抗體檢測在鼻咽癌診斷中的應用價值研究［J］.中國實用醫藥， 2018，13（19）：18-19.

［12］羅耀凌，陳浩，彭頌國，等.聯合檢測EB病毒不同抗體及EB病毒DNA在鼻咽癌血清學診斷中的價值［J］.中華醫學雜志，2013，93（44）：3516-3519.

［13］李志勇，楊荃荃，吉爽，等. EBV-DNA定量檢測在鼻咽癌隨訪中的意義［J］. 國際病毒學雜志， 2015，22（4）：281-285.

［14］嚴翠娥，陳鋒，王秋萍，等. 血清EA-IgA、VCA-IgA、Rta-IgG、EBV-DNA與鼻咽癌的相關性分析［J］. 中國醫刊， 2017，52（8）：98-100.

［15］杜云，俞霞，季明芳. EB病毒血清抗體水平與鼻咽癌臨床分期相關性研究進展［J］. 中國腫瘤臨床， 2016，43（19）：869-872.

［16］麻婷婷，許四宏，周海衛. EB病毒實驗室檢測技術研究進展［J］. 分子診斷與治療雜志， 2020，12（11）：1587-1590.

［17］鄭裕明，蔡永林，成積儒，等. 鼻咽癌EB病毒Rta/IgG抗體檢測的診斷價值［J］. 中華實驗和臨床病毒學雜志， 2009，23（4）：285-287.

（本文編輯 馬偉平）