新生兒6 698例常見遺傳性聾基因篩查結果分析

韋柳婷，吳秋龍，黃之虎

聽力受損是常見的出生缺陷，全球先天性聽力受損的病人60%~80%與遺傳因素有關，攜帶有基因突變的新生兒，其聽力損失發生率是普通新生兒的10 倍以上［1］。新生兒聽力損傷的早期診斷非常重要，有聽力受損的新生兒能夠被及早識別并進行干預治療，可以避免由于聽力損失而導致的語言和社交障礙。有研究表明，青少年及成人語前耳聾病人人工耳蝸植入術后的聽覺語言能力康復效果不如幼兒及學齡期語前耳聾病人［2］。除了新生兒聽力篩查外，耳聾基因篩查也逐步成為新生兒聽力損失早期的有效篩查方法。耳聾基因的突變頻率在不同國家、地區和民族之間存在差異，有明顯的種族和區域差異［3］。廣西壯族自治區是少數民族地區，除了壯族，還有苗族、瑤族、侗族、仫佬族等，南寧地區的少數民族主要以壯族居多。本研究對新生兒進行耳聾基因檢測，研究的突變位點有13 個，除了tRNA的2個位點外，其他11個是各基因中的熱點突變。與耳聾相關tRNA 的檢測在我國的研究少見，增加tRNA 的檢測位點，可以了解南寧地區的耳聾基因突變類型的分布情況，分析漢族與壯族之間的差異，希望能夠為南寧地區先天性聽力損傷的預防和保健工作提供指導。

1 資料與方法

1.1 一般資料2017 年8 月至2021 年4 月在廣西壯族自治區民族醫院出生并進行耳聾基因篩查的6 698例新生兒，男性3 583例，女性3 115例，男女比例為1∶0.87。壯族有2 697 例（男性1 349 例，女性1 348 例），漢族3 607 例（男性1 833 例，女性1 774例），其他少數民族392 例。本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求，所有研究對象監護人均簽署知情同意書。

1.2 研究方法新生兒于出生時采集臍帶血，EDTA-K2抗凝，2～8 ℃冷藏保存。在一個星期內進行DNA 提取，對4個耳聾基因的13個突變位點進行PCR 擴增和導流雜交基因分析，通過對雜交膜條的顯色位點來分析是否存在耳聾基因的位點突變。

1.3 檢測指標GJB2 基因5 個突變位點：c.235 del C、c.35 del G、c.299-300 del AT、c.155-158 del TCTG、c.176-191 del 16；SLC26A4 基因3 個突變位點：c.919-2A>G、c.1229 C>T、c.2168 A>G；mt DNA 4 個位點：12S rRNA 2個突變位點（g.1555 A>G、g.1494 C>T），tRNA 2 個突變位點（G.7445 A>G、G.12201 T>C）；GJB3基因1個突變位點：c.538 C>T。

1.4 試劑和儀器DNA的提取、擴增和雜交分析全部采用廣東潮汕凱普生物化學科技股份有限公司的耳聾易感基因檢測試劑盒配套試劑。DNA 提取采用凱普HBNP-4801A 自動核酸提取儀，PCR 擴增應用博日TC-96/G/H（b）擴增儀，導流雜交使用凱普HBHM3000S醫用核酸快速雜交儀。

1.5 統計學方法采用SPSS 20.0 軟件進行統計分析，各組間檢出率的比較采用χ2檢驗分析，以P<0.05 為檢驗水準。當n≥40 且所有T≥5，用普通χ2檢驗；當n≥40，但1≤T<5 時，用校正χ2檢驗；當n<40 或T<1時，用Fisher確切概率法進行檢驗。

2 結果

2.1 耳聾基因篩查總體情況篩查陽性119 例，總體檢出率為1.78%，其中，漢族人群3 607 例，耳聾基因的檢出率為73 例（2.02%），其中男35 例（1.91%），女38 例（2.14%）；壯族人群2 697 例，耳聾基因檢出率為44 例（1.63%），其中男24 例（1.78%），女20 例（1.48%），其余2例陽性為其他少數民族。常見耳聾基因在壯漢兩民族的檢出率差異無統計學意義（χ2=1.30，P=0.253），且不同性別壯漢兩民族人群耳聾基因檢出率差異無統計學意義。

2.2 四個耳聾基因篩查結果在119 例陽性樣本中，67 例檢出GJB2 基因突變，檢出率為1.00%（67/6 698），是最常見的耳聾突變基因，其次是SLC26A4基因（0.48%），然后依次為mt DNA（0.27%）和GJB3（0.03%），見表1。漢族GJB2 基因的檢出率為1.11%，壯族為1.00%，兩者差異無統計學意義（χ2=0.171，P=0.680），同時，GJB3、SLC26A4 和mt DNA 在壯漢兩民族間的檢出率差異無統計學意義，見表2。不同性別壯漢兩民族人群4個耳聾基因的分布均差異無統計學意義，見表1。

表1 不同性別壯漢兩民族4個耳聾基因的檢出率/例（%）

表2 壯漢兩民族4個耳聾基因的檢出率比較/例（%）

2.3 漢族與壯族人群耳聾基因突變位點分布情況c.235 del C 突變是GJB2 基因最常見的突變位點，總體檢出率為0.87%，漢族為0.89%，壯族為0.96%，差異無統計學意義（χ2=1.00，P=0.752）。c.299-300delAT 在漢族有檢出，在壯族未檢出，但是在壯漢兩民族間差異無統計學意義（χ2=3.64，P=0.057）。c.919-2A>G 是SLC26A4基因的主要突變位點，總體檢出率為0.33%，漢族為0.47%，壯族為0.15%，漢族高于壯族，差異有統計學意義（χ2=4.85，P=0.028）。其他突變位點在兩民族的檢出率均差異無統計學意義，見表3。

表3 漢族和壯族耳聾基因13個突變位點的檢出率/例（%）

檢出1例c.176-191del16位點與c.299-300delAT位點雙重雜合突變。未檢出c.35 del G 和c.155-158del TCTG 突變，壯族c.1229 C>T 突變的檢出率與c.919-2A>G 突變一致。g.1555 A>G 檢出率為0.22%，有8 例為g.1555 A>G 的均質突變，壯族5 例，漢族3例。mt DNA 12201 T>C突變在壯漢兩民族中均未檢出，壯族未檢出g.1494 C>T 突變，壯族檢出1例G.7445 A>G 均質突變，漢族檢出1 例G.7445 A>G異質突變。壯漢兩民族各檢出GJB3c.538 C>T 突變1 例。由表4 可發現，耳聾基因的13 個突變位點在壯漢兩民族的男女當中的分布均差異無統計學意義。

表4 耳聾基因13個突變位點在壯漢兩民族男女當中的檢出率/例（%）

3 討論

遺傳性聾主要是單基因遺傳病，可以分為非綜合性耳聾和綜合性耳聾，非綜合性耳聾是指不伴隨有其他組織器官癥狀和體征的聽力損傷［4］。我國遺傳性聾相關的主要有4 個基因［5］，GJB2、SLC26A4、12S rRNA 和GJB3。本研究均涉及這四個耳聾基因，總檢出率為1.78%，GJB2 基因檢出率為1.00%，依次為SLC26A 基因0.48%、mt DNA0.27%和GJB3 0.03%。與相同檢測位點或者少于本研究檢測位點的研究對比發現，南寧地區的耳聾基因陽性檢出率低，佛山地區新生兒耳聾基因陽性率為2.98%［6］，浙江紹興地區為4.00%［7］，山西晉東南地區為5.03%［8］，北京4.38%［9］。研究顯示，隨著檢測位點的擴大，檢出率增加［10-11］，研究篩查的基因位點數量較少，會導致一定的漏檢率。本研究耳聾基因檢出率低，除了與地區差異和檢測基因突變位點數量有關外，耳聾基因的攜帶率與民族有關系［12］。研究分析了漢族與壯族的差異，兩者不僅在耳聾基因的總體檢出率差異無統計學意義，漢族2.02%，壯族1.63%，而且，4個耳聾基因在壯漢兩民族的檢出率差異無統計學意義。

GJB2基因是本次研究最主要的突變基因，其不同突變位點c.235 del C、c.35 del G、c.299 - 300de?lAT、c.176-191del16 和c.155-158 del TCTG 的總體檢出率分別為0.87%、0、0.10%、0.03%和0，在壯漢兩民族的檢出率均差異無統計學意義。GJB2 c.235 del C突變檢出率最高，其中漢族的檢出率為0.89%，壯族0.96%。然后是c.299 - 300delAT 突變，漢族c.299 - 300delAT 突變檢出率為0.19%，壯族未檢出該突變位點。c.235 del C 是亞洲人群的熱點突變位點［13］，但是在臺灣的一項研究中發現，GJB2 c.109G> A 的突變頻率大于c.235 del C［14］。研究中，c.176-191del16 位點均在女性中檢出，檢出1 例c.176-191del16 位點與c.299-300delAT 位點的雙重雜合突變，可導致耳聾的發生，病兒需要使用助聽器。而本次研究未檢出的c.35 del G 突變則多發現在歐洲和中東［15-16］。

SLC26A4 基因突變可導致Pendred 綜合征或非綜合性耳聾，c.919-2A>G 突變是SLC26A4 基因中最常見的突變類型，檢出率為0.33%，也是本研究中唯一在壯漢兩民族的檢出率差異有統計學意義的突變位點（P=0.028），漢族SLC26A4 基因的c.919-2A>G 突變位點的檢出率高于壯族，漢族為0.47%，壯族為0.15%。其次是c.1229 C>T 突變，檢出率為0.12%，在雷潔等［17］的研究中發現，深圳南山區c.2168 A>G 突變是僅次于c.919-2A>G 的突變類型，與本研究存在不同，差異體現了SLC26A4 基因突變類型的分布與地區相關。c.919-2A>G 突變是漢族SLC26A4 基因主要的突變位點，與其他研究一致［18-19］。而壯族的c.919-2A>G 和c.1229 C>T 位點的檢出率一致，均為0.15%，有研究顯示，壯族女性常見的SLC26A4 基因突變位點為c. 1983C>A、c.1547dup、c.754T>C、c.1905G>A、c.919-2A>G 和c.678T>C，只有c.919-2A>G 突變位點在本次研究中，其他5個并未進行檢測［20］。因此，壯漢兩民族在SLC26A4 基因攜帶率是否存在差異，c.919-2A>G 是否為本地區壯族SLC26A4 基因的熱點突變，需要增加檢測位點和擴大樣本量進行研究。

mt DNA 是線粒體相關的耳聾基因，其中12S rRNA 屬于藥物性耳聾基因，突變可導致使用氨基糖苷類抗生素引起的聽力損傷。本研究顯示，南寧地區g.1555 A>G為12S rRNA基因最常見突變，檢出15例，基因頻率為0.22%，其中8例均質突變，5例為壯族，3 例為漢族，對于確診的病人，終身禁止使用氨基糖苷類抗生素。壯漢兩民族在g.1555 A>G 和g.1494 C>T 位點突變的檢出率差異無統計學意義。本研究發現G.7445 A>G 突變2例，檢出率為0.03%，漢族與壯族各檢出1例，壯族為均質突變，漢族為異質突變，壯漢兩民族G.7445 A>G 檢出率差異無統計學意義。Zheng 等［21］研究闡明了線粒體tRNA 突變是中國人群聽力損失的一個重要原因，Cao等［6］在佛山地區新生兒耳聾基因突變研究中發現G.7445 A>G 突變位點的檢出率為0.006%。Yan 等［22］在一個漢族家系中鑒定G.12201 T>C 突變導致母系遺傳遲發性非綜合征耳聾，但是，本研究未檢出G.12201 T>C突變。

GJB3 基因位于1 號染色體，該基因的突變可導致高頻感音神經性耳聾，在本研究中，GJB3 基因突變頻率0.03%，是4 個耳聾基因中檢出率最低的基因，漢族與壯族均有檢出，檢出率差異無統計學意義，漢族為0.03%，壯族為0.04% 。

本研究尚有不足之處，樣本量少、檢測位點少，除了壯族外，其他的少數民族樣本較少，沒有對廣西的其他少數民族進行研究。